龐春潔，張 林

（馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，湖北 武漢 430064）

愈創(chuàng)甘油醚片作為一種祛痰藥類非處方藥藥品，其主要有效成分為愈創(chuàng)甘油醚，臨床應(yīng)用已有幾十年之久，其化學(xué)成分性質(zhì)較穩(wěn)定[2]。國(guó)外很多國(guó)家也將該藥作為非處方產(chǎn)品銷售，說明該藥安全性良好。該藥物在臨床中不良反應(yīng)一般較輕，不影響血壓，血壓維持平穩(wěn)，患者耐受性比較理想，而且用藥方便，市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值較高[2]。在愈創(chuàng)甘油醚片生產(chǎn)過程中，為了保證產(chǎn)品質(zhì)量，就需要對(duì)愈創(chuàng)甘油醚片的有效成分進(jìn)行測(cè)定。愈創(chuàng)甘油醚片目前已收載于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中[3]，過往一般選擇滴定與萃取相結(jié)合的方式對(duì)愈創(chuàng)甘油醚片的有效成分進(jìn)行測(cè)定，但是該方法的重現(xiàn)性并不理想，而且操作比較繁瑣[4]。本研究選擇高效液相色譜法（HPLC）對(duì)愈創(chuàng)甘油醚片有效成分進(jìn)行測(cè)定，操作比較簡(jiǎn)單方便，結(jié)果準(zhǔn)確，具體試驗(yàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

選擇安捷倫1260型液相色譜儀。北京賽多利斯儀器有限公司的1/10000電子分析天平；昆山超聲儀器有限公司的KQ-500DE型超聲波清洗器。

1.2 試藥

選擇中國(guó)藥生物制品鑒定所的愈創(chuàng)甘油醚對(duì)照品；乙腈、磷酸、三乙胺分別選擇HPLC級(jí)、優(yōu)級(jí)純、分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

①色譜條件：采用Agilent C18色譜柱，5 μm，150*4.6 mm；流動(dòng)相選擇磷酸溶液（1%）-三乙胺溶液（1%）-乙腈，35:35:30比例；進(jìn)樣量設(shè)置為10 μl，流速設(shè)置為每分鐘1.0 ml，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為273 nm。

②選擇波長(zhǎng)：準(zhǔn)確稱取愈創(chuàng)甘油醚對(duì)照品，并將其加入到流動(dòng)相內(nèi)進(jìn)行溶解，稀釋成每1 ml含25 μg愈創(chuàng)甘油醚的溶液，以分光光度法進(jìn)行測(cè)定，于273 nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)最大吸收，故將測(cè)驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)定為273 nm。

③考察線性關(guān)系：準(zhǔn)確稱取0.0105 g愈創(chuàng)甘油醚對(duì)照品（經(jīng)105℃干燥恒重），并將其放置在100 ml量瓶?jī)?nèi)，通過流動(dòng)相將其溶解、稀釋到刻度，搖勻并準(zhǔn)確取2 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、15 μl、20 μl、30 μl，分別注入到液相色譜儀。縱坐標(biāo)、橫坐標(biāo)分別為峰面積、愈創(chuàng)甘油醚量，獲回歸方程A=0.6891C+688.02，r=0.9999，結(jié)果顯示愈創(chuàng)甘油醚在0.2～3.0 μg范圍內(nèi)同色譜色譜面積線性關(guān)系比較理想。

④輔料干擾試驗(yàn)：根據(jù)處方量準(zhǔn)確稱取0.6 g輔料，放置在50 ml量瓶?jī)?nèi)，通過流動(dòng)相將其溶解、稀釋到刻度，然后將其搖勻，進(jìn)行濾過處理后準(zhǔn)確量取2.0 ml續(xù)濾液，放置在50 ml量瓶?jī)?nèi)，通過流動(dòng)相將其稀釋到刻度，進(jìn)樣10 μl，光譜圖分析結(jié)果顯示輔料不存在干擾。說明該可方可準(zhǔn)確的進(jìn)行有效成分測(cè)定。

⑤穩(wěn)定性測(cè)試：選擇試品溶液，放置于室溫下，分別于0、1、2、4、8小時(shí)后進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示峰面積基本未變，RSD為0.22%，結(jié)果提示在8小時(shí)內(nèi)樣品均較穩(wěn)定。

⑥精密度試驗(yàn)：選取線性關(guān)系范圍內(nèi)的溶液，持續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μl，愈創(chuàng)甘油醚峰面積的RSD為0.25%。結(jié)果提示該方法精密度較好，可滿足定量分析的要求。

⑦重復(fù)性試驗(yàn)：稱取6份同一樣品，按上述方法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，各樣品含量的RSD為0.2%，結(jié)果顯示該試驗(yàn)方式重復(fù)性良好。

⑧回收率試驗(yàn)：根據(jù)處方比例對(duì)樣品進(jìn)行配制，分別加入標(biāo)示量80%、100%、120%的愈創(chuàng)甘油醚，根據(jù)上述樣品含量測(cè)定方法進(jìn)行處理，然后對(duì)回收率進(jìn)行計(jì)算。

⑨測(cè)定樣品含量：選取10片樣品，將其研細(xì)，準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于0.1 g的愈創(chuàng)甘油醚，放置在50 ml量瓶?jī)?nèi)，通過流動(dòng)相將其溶解、稀釋到刻度，搖勻、濾過后準(zhǔn)確量取2 ml續(xù)濾液，放置在50 ml量瓶?jī)?nèi)，選擇流動(dòng)相將其稀釋到刻度，進(jìn)樣10 μl，選擇外標(biāo)法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。

2.2 結(jié)果

2.2.1 回收率結(jié)果觀察

經(jīng)過9次測(cè)定，加樣平均回收率為100.03%，RSD為0.39%，具體結(jié)果如表1所示。

表1 加樣回收率結(jié)果觀察

2.2.2 樣品含量測(cè)定結(jié)果觀察

采用外標(biāo)法對(duì)樣品含量進(jìn)行測(cè)定，2次測(cè)定結(jié)果分別為99.7%，99.2%。

3 討 論

游離愈創(chuàng)木酚是愈創(chuàng)甘油醚片常見的一種已知雜質(zhì)，正常情況均能檢測(cè)出該雜質(zhì)[5-6]。愈創(chuàng)甘油醚同分異構(gòu)體則是另外一種雜質(zhì)，但是選擇梯度洗脫，測(cè)定所需時(shí)間較長(zhǎng)。本研究采用HPLC法，Agilent C18色譜柱，流動(dòng)相選擇磷酸溶液-三乙胺-乙腈溶液，波長(zhǎng)273 nm，通過等度洗脫就能有效分開同分異構(gòu)體，進(jìn)而明顯縮短測(cè)定時(shí)間，測(cè)定效率明顯提升。除此之外，當(dāng)所選擇的色譜柱更換廠家品牌后，分離效果依然比較理想。同時(shí)在輔料干擾試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)該測(cè)定方法不存在輔料干擾的情況，不影響試驗(yàn)準(zhǔn)確度。由此可以發(fā)現(xiàn)，該方法能對(duì)難分離物質(zhì)進(jìn)行有效分離，檢測(cè)準(zhǔn)確，具有較強(qiáng)的可重復(fù)性，穩(wěn)定性也比較理想，具有比較顯著的優(yōu)越性。

本研究中結(jié)果顯示，該試驗(yàn)方法加樣回收率達(dá)100.03%，RSD:0.39%，愈創(chuàng)甘油醚片有效成份含量測(cè)定結(jié)果顯示均達(dá)99%以上。

綜上所述，選擇HPLC法測(cè)定愈創(chuàng)甘油醚片的有效成分穩(wěn)定可靠，準(zhǔn)確度高，而且操作簡(jiǎn)單方便，在生產(chǎn)過程中可對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效控制。