柴發(fā)永

（山東省食品藥品審評(píng)認(rèn)證中心，山東 濟(jì)南 250014）

大豆異黃酮是大豆中一種類雌激素結(jié)構(gòu)的天然活性成分，具有多方面的保健功效。研究顯示，大豆異黃酮具有預(yù)防骨質(zhì)疏松、抑制腫瘤及抗衰老等生物學(xué)作用[1]。本文主要研究其促進(jìn)免疫力的功效作用。

1 材料與方法

1.1 受試物

大豆異黃酮膠囊，0.3 g/粒（每粒含大豆異黃酮50mg），每日1粒。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種雌性小鼠[選用北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0004]，平均體重20g，每組10只。

1.3 劑量及給藥：

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)人體推薦劑量的5倍，10倍，30倍，設(shè)置為低、中、高劑量組，即每日25 mg/kg、50 mg/kg和150 mgkg（即大豆異黃酮4.16 mg、8.33和25.14 mg/kg）。用5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成相應(yīng)濃度的受試物溶液，每日經(jīng)口給予一次，灌胃體積為10 ml/kg。同時(shí)設(shè)置模型組和對(duì)照組，用5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，灌胃體積與受試物組相同，連續(xù)31 d。各組均給與維持飼料。除空白對(duì)照組，其余各組小鼠于灌胃第25、27、29 d腹腔注射環(huán)磷酰胺制造免疫力低下模型[2]。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法：

1.4.1 臟器指數(shù)的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠稱重，脫臼處死，取脾臟和胸腺稱重，計(jì)算臟器指數(shù)。脾臟指數(shù)=脾臟/體重；胸腺指數(shù)=胸腺/體重。

1.4.2 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

取羊血，生理鹽水洗滌三次，每只鼠腹腔注射2%綿陽(yáng)紅細(xì)胞溶液（V/V）0.2ml，致敏后4 d，測(cè)量左后足趾部厚度。

1.4.3 碳粒廓清能力的測(cè)定

小鼠稱重后，根據(jù)體重尾靜脈注射印度墨汁（稀釋至濃度為0.05 mL/10gBW）。墨汁注入后，立即計(jì)時(shí)。從注射墨汁2 min、10 min兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別眼眶靜脈取血20 μL，然后加到3.0 mL 0.1%碳酸鈉溶液中。在600 nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度值（OD），以0.1%碳酸鈉溶液作為空白對(duì)照。完后將小鼠處死，取肝臟和脾臟，稱重，小鼠碳粒廓清能力以吞噬指數(shù)（α）表示。按下式計(jì)算：K=（lgOD1-lgOD2）/（t2-t1） α=體重÷（肝重＋脾重）×K1/3

1.4.4 腹腔注射巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

給小鼠腹腔注射1 mL 20%雞紅細(xì)胞懸液，30 min后脫臼處死，仰位固定后經(jīng)腹腔注射生理鹽水，輕輕按腹部20次。取腹腔巨噬細(xì)胞洗液1 mL，分別滴于2片載玻片上，于37℃孵箱溫育30 min。孵畢，于生理鹽水中漂洗，除去未貼片細(xì)胞。固定后染色，油鏡下計(jì)數(shù)。每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算公式為：吞噬百分率（%）=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞×100% 吞噬指數(shù)=被吞噬雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響

與對(duì)照組相比，模型組脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)明顯降低，提示造模成功（P＜0.05）。中劑量組脾臟指數(shù)與對(duì)照組相比明顯升高，高劑量組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比值與對(duì)照組相比明顯升高，均有顯著性差異（P＜0.05）。

表1 大豆異黃酮對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響（±s）

表1 大豆異黃酮對(duì)小鼠臟器指數(shù)的影響（±s）

注：與模型組相比，*P＜0.05；#與對(duì)照組相比，P＜0.05

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2.2 對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響

結(jié)果顯示，模型組的足趾腫脹程度明顯低于對(duì)照組，提示造模成功（P＜0.05）。中劑量組與高劑量組的足趾腫脹程度明顯增加，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。

表2 大豆異黃酮對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響（±s）

表2 大豆異黃酮對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響（±s）

注：與模型組相比，*P＜0.05 ；#與對(duì)照組相比，P＜0.05

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2.3 對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

結(jié)果顯示，模型組吞噬指數(shù)α及吞噬率明顯低于對(duì)照組，提示造模成功（P＜0.05）；中、高劑量組吞噬指數(shù)α與雞紅細(xì)胞吞噬率與對(duì)照組相比明顯增加，有顯著性差異（P＜0.05，0.01）。

3 討 論

脾臟是人體最大的免疫器官，含有多種免疫活性細(xì)胞和細(xì)胞因子，巨噬細(xì)胞是脾臟內(nèi)主要非特異免疫細(xì)胞，激活后可主動(dòng)吞噬、殺傷或消化病原微生物。巨噬細(xì)胞還是特異性免疫的輔助細(xì)胞，可通過提供抗原、啟動(dòng)免疫應(yīng)答（如分泌活性因子白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子等）等激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫作用。胸腺是機(jī)體重要的淋巴器官，T淋巴細(xì)胞在胸腺內(nèi)發(fā)育成熟，并釋放免疫因子等，參與細(xì)胞免疫[3-4]。

環(huán)磷酰胺為常用的烷化類免疫抑制劑，主要用于癌癥的化療，通過DNA烷基化破壞DNA的合成、抑制核蛋白質(zhì)的合成，致使免疫功能低下[4]。本研究通過環(huán)磷酰胺制造免疫力低下模型，探討大豆異黃酮對(duì)免疫力的促進(jìn)作用。結(jié)果顯示，中劑量組脾臟/體重比值顯著升高，高劑量組脾臟/體重與胸腺比值顯著升高；中、高劑量組的足趾腫脹程度顯著增加；中、高劑量組吞噬指數(shù)與雞紅細(xì)胞吞噬率均顯著提高（均P＜0.05，0.01）。大豆異黃酮能提高小鼠碳粒廓清能力及單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能，對(duì)免疫力低下小鼠免疫功能有促進(jìn)作用。