敬明武，葛宇杰，劉科亮，蔣勇，劉麗達

（四川省疾病預(yù)防控制中心，四川 成都）

0 引言

破壁靈芝孢子粉膠囊在臨床中有一定的應(yīng)用，為了探究其對化學性肝損傷的輔助保護作用，本研究選取了大鼠進行試驗探究，以期能夠為臨床提供一定的幫助[1，2]。

1 材料和方法

1.1 樣品

破壁靈芝孢子粉膠囊，膠囊內(nèi)容物系紅褐色。建議人體每天用量2800mg/60kg.BW，進行試驗時，需要對受試物溶液進行配制，溶劑使用蒸餾水。

1.2 無水乙醇

分析純。

1.3 實驗動物

50只雌性SD大鼠,體重180-220g ，生產(chǎn)許可證號為SCXK(川)2018-24.SPF級。實驗動物房為屏障系統(tǒng)，使用許可證號為SYXK（川）2016～043，調(diào)整好溫濕度，分別為20℃-25℃、40%-70%。

1.4 試驗分組及劑量設(shè)計

對50只SD大鼠實施分組，以平均分的方式，10只為一組，共分成五組，試驗設(shè)233mg/kg.BW、700mg/kg.BW、1400mg/kg.BW三個劑量組（依次相當于推薦的人體用量的5、15、30倍），分別稱取5.83g、17.5g、35.0g受試物，將蒸餾水分別加入，均加到250ml，混合均勻備用，保存在冰箱中，使用完后再調(diào)配。另設(shè)蒸餾水對照組和50%乙醇模型對照組。用濃度為50%的乙醇造成肝損傷模型，灌胃量14ml/kg.BW（折合乙醇的劑量為7000mg/kg. BW）。

1.5 試驗方法

采用酒精肝損傷模型法，將不同劑量受試物給以三個劑量組，給陰性對照組和模型對照組蒸餾水，每日1次，經(jīng)口灌胃，用量為10ml/kg. BW，持續(xù)進行30d，每周進行2次體重測量，以此調(diào)整給藥量。試驗結(jié)束時給三個劑量組和模型對照組50%無水乙醇14ml/kg. BW 1次，經(jīng)口灌胃，給陰性對照組以同體積的蒸餾水，進行16h的禁食后將動物處死，并將肝臟取出進行重量測量，對臟體比進行計算，并用肝臟進行生化指標檢測及組織病理學檢查。

2 檢測指標

2.1 肝勻漿中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛（malondialdehyde，MDA）、還原型谷胱甘肽（glutathione，GSh）及甘油三酯（triglyceride，TG）的測定

MDA和 GSH測定試劑盒用UV1100分光光度計測定；TG測定試劑盒用CX4全自動生化分析儀進行測定。

2.2 肝臟稱重及臟器系數(shù)的計算

見表1中的內(nèi)容。

2.3 肝臟組織病理學診斷標準

2.3.1 病理觀察材料

從動物肝左葉中部做橫切面取材、切片、染色、鏡下觀察脂滴在肝臟中的分布、范圍和面積。

2.3.2 病理觀察方法

使用40倍物鏡連續(xù)記錄每例動物肝組織70個視野，每個視野根據(jù)陽性細胞數(shù)量及分布范圍，采用0、1、2、3、4分的評分方法。計算70個視野得分的平均值，作為該例肝組織的脂肪染色評分。

2.3.3 病理診斷標準

將肝細胞脂滴染色作為病理組織學觀察指標，并根據(jù)病理改變程度0、1、2、3、4量化，評價肝損傷程度。

2.3.4 肝細胞脂肪染色共分為五級

肝細胞內(nèi)脂滴散在、稀少：0分；含脂滴的肝細胞不足1/4： 1分；含脂滴的肝細胞不足1/2：2分；含脂滴的肝細胞不足3/4：3分；脂滴差不多代替肝組織：4分。

2.4 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

使用SPSS 11.0 for windows軟件包分析相關(guān)數(shù)據(jù)。采用方差齊性檢驗對照組和各劑量組數(shù)據(jù)，如果方差齊，則實施方差分析，如P＜0.05，則兩兩比較采用Dunnett法；如果方差不齊，那么就需要轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)，若還是不齊，則改為秩和檢驗，如P＜0.05，則兩兩比較采用Dunnett，s T3法。采用t值檢驗陰性對照組與模型對照組數(shù)據(jù)。

3 統(tǒng)計學方法

得出的數(shù)據(jù)均使用統(tǒng)計學軟件SPSS15.0軟件進行分析，計量資料采用（±s）表示，并進行t檢驗，組間差異有統(tǒng)計學意義則使用P＜0.05表示。

4 試驗結(jié)果

4.1 破壁靈芝孢子粉膠囊對大鼠體重、肝重、肝體比的影響

破壁靈芝孢子粉膠囊各劑量組大鼠的初始體重相比于陰性對照組和模型對照組，方差齊，方差分析結(jié)果，P＞0.05，表明各組動物初始體重不存在明顯差異，各劑量組動物的中期體重、終重、肝重及肝體比相較于模型對照組，無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。

4.2 破壁靈芝孢子粉膠囊對大鼠肝勻漿中MDA、GSh、TG含量的影響

在肝勻漿中MDA、GSH、TG含量方面，相比于陰性對照組，模型對照組大鼠MDA、TG含量明顯上升，GSH含量明顯下降，均經(jīng)由t值檢驗，均P＜0.01，說明此模型成功，實驗有較高的可靠性。在MDA、GSH、TG含量方面，相比于模型對照組，中、高劑量組的MDA明顯下降、GSH明顯上升，均P＜0.05，具有統(tǒng)計學差異。而TG含量在三個劑量組中差異不大，P＞0.05。

4.3 肝臟組織病理學檢查結(jié)果

在肝細胞脂肪染色評分方面，相較于陰性對照組，模型對照組大鼠更高，有極顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01），說明此模型成功，實驗有較高的可靠性。而相較于模型對照組，三個劑量組中中、高劑量組評分明顯更低，有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。見表1、表2。

表1 破壁靈芝孢子粉膠囊對大鼠肝臟病理變化觀察記錄

表2 破壁靈芝孢子粉膠囊對大鼠肝臟組織病理學檢查結(jié)果 （±s）

表2 破壁靈芝孢子粉膠囊對大鼠肝臟組織病理學檢查結(jié)果 （±s）

注：**表示與模型對照組比較P＜0.01，*表示與模型對照組比較P＜0.05

組別 劑量組(mg/kg.BW)動物數(shù)(只) 脂肪染色評分（分）陰性對照 0 10 0.10±0.141**模型對照 0 10 2.48±0.749低劑量 233 10 2.02±0.607中劑量 700 10 1.34±0.566*高劑量 1400 10 1.24±0.672*

5 討論

破壁靈芝孢子粉膠囊采用經(jīng)口灌胃的方式持續(xù)用于雄性SD大鼠30d后，發(fā)現(xiàn)動物能夠正常的生長發(fā)育[3-5]。建立酒精性肝損傷模型后，中、高劑量組中大鼠肝勻漿中的過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛含量能夠明顯下降，肝勻漿中的谷胱甘肽含量上升，均P＜0.05；較之于模型對照組，三個劑量組大鼠肝勻漿中甘油三酯含量無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；在脂肪染色評分方面，中高劑量組明顯下降，有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01），組織病理學檢查呈現(xiàn)出陽性結(jié)果[6]。依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中之規(guī)定，破壁靈芝孢子粉膠囊對雌性SD大鼠具有酒精性肝損傷輔助保護作用[7,8]。