梁凱玲 秦丹卿 黃演林 王繼成 梁杰 姚翠澤 杜麗

(廣東省婦幼保健院 醫(yī)學(xué)遺傳中心，廣東 廣州 511442)

α-地中海貧血是由于α-珠蛋白基因發(fā)生缺失或者突變導(dǎo)致的遺傳性溶血性貧血，包括缺失型和非缺失型兩類。中國(guó)南方人群中最常見(jiàn)的非缺失型a-地中海貧血包括Hb Constant Spring(Hb CS)、Hb Quong Sze(Hb QS)和Hb Westmead(Hb WS)，其中Hb WS(HBA2:c.369C>G)頻率最高。Hb WS是一種輕度不穩(wěn)定的血紅蛋白變異體，由于α2珠蛋白基因的122位密碼子CAC突變?yōu)镃AG[CD122(CAC>CAG)]，使此位密碼子編碼的組氨酸變成谷氨酰胺所致[1]。為探討Hb WS不同基因型和血液學(xué)表型之間的關(guān)系，本研究回顧性分析了179例Hb WS的基因分型和血液學(xué)特征，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2018年1月至2019年12月于廣東省婦幼保健院進(jìn)行α和β地中海貧血基因診斷檢測(cè)后，確診為Hb WS的攜帶者共179例，其中男性64例，女性115例，年齡1～45歲。篩選α和β地中海貧血基因結(jié)果為陰性的50例樣本作為正常對(duì)照組1(男女各25例)；篩選東南亞缺失型α-地貧雜合子25例樣本作為對(duì)照組2(男性13例，女性12例)。

1.2 方法

1.2.1 血液學(xué)表型分析 采用 Sysmex XN-5000型五分類血細(xì)胞分析系統(tǒng)進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)，主要的紅細(xì)胞參數(shù)包括血紅蛋白(hemoglobin，HGB)、平均紅細(xì)胞體積(mean corpuscular volume，MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)。采用法國(guó)Sebia公司的CAPILLARYS 2 FLE-XPIERCING全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行血紅蛋白組分分析，篩查指標(biāo)包括血紅蛋白A(hemoglobin A，Hb A)、血紅蛋白A2(hemoglobin A 2，Hb A2)、血紅蛋白F(hemoglobin F，Hb F)等。

1.2.2 地中海貧血基因分析 使用中國(guó)廈門致善生物公司試劑盒磁珠法進(jìn)行外周血基因組DNA的提??；應(yīng)用PCR—流式熒光雜交法檢測(cè)常見(jiàn)的3種缺失型α地貧,常見(jiàn)的3種α珠蛋白基因點(diǎn)突變及17種β珠蛋白基因點(diǎn)突變(基因診斷試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供)。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS軟件對(duì)血液學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 179例Hb WS基因型分組 將179例Hb WS攜帶者患者按照基因型分為4組，具體如下：Hb WS 雜合子組即αWSα/αα共140 例(78.21%)；Hb WS雜合子復(fù)合α-地貧組9例(5.03%)，包括αWSα/ -α3. 7(6例)和αWSα/ -α4. 2(3例)；Hb WS雜合子復(fù)合東南亞缺失型α-地貧組即--SEA/αWSα共18 例(10.06%)；Hb WS合并輕型β-地貧組12例(6.70%)，包括αWSα/αα合并βCD41-42/βN(4例)、αWSα/αα合并βCD17/βN(2例)、αWSα/αα合并βIVS-II-654/βN(2例)、αWSα/αα合并β-28/βN(1例)、αWSα/αα合并βCD26/βN(1例)、αWSα/αα合并βCD71-72/βN(1例)以及αWSα/合并βCD41-42/βN(1例)

2.2.1 αWSα/αα組和正常對(duì)照組間的相關(guān)血液學(xué)參數(shù)比較結(jié)果 兩組間的HGB、MCV和MCH的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而Hb F、Hb A和Hb A2 的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2.2 αWSα/-α組和αWSα/αα組間的相關(guān)血液學(xué)參數(shù)比較分析結(jié)果 兩組間MCH的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而HGB、MCV 、Hb F、Hb A和Hb A2 的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；αWSα/-α組與--SEA/αα對(duì)照組間比較結(jié)果顯示兩組間MCV、MCH和Hb A2 的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而HGB、Hb F和Hb A的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2.3 --SEA/αWSα組與--SEA/αα對(duì)照組間的相關(guān)血液學(xué)參數(shù)比較分析結(jié)果 兩組間HGB、MCV、MCH和Hb A2的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而Hb F和Hb A的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2.4 αWSα/αα合并輕型β-地貧組的血液學(xué)指標(biāo)分析 MCV、MCH均降低,大部分表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素性貧血， HGB正?；蜉p微降低， Hb A2均升高，Hb F正?；蜉p微升高；1例孕婦患者的HGB低于90g/dL；1例αWSα/αα合并βCD26/βN基因型出現(xiàn)異常血紅蛋白Hb E。

表1 4組不同基因型Hb WS的血液學(xué)參數(shù)與對(duì)照組比較分析

3 討論

Hb WS是由于α2珠蛋白基因突變產(chǎn)生的一種輕度不穩(wěn)定的血紅蛋白變異體，Hb WS雜合子屬于靜止型α-地中海貧血，基因型為αWSα/αα。本研究中的140例αWSα/αα型患者，臨床上無(wú)貧血表現(xiàn)或有輕度貧血，出現(xiàn)輕度貧血表現(xiàn)的主要是孕婦人群，考慮為妊娠期貧血導(dǎo)致，并非Hb WS雜合子所引起；該組基因型的血液學(xué)指標(biāo)基本正常，符合靜止型α-地貧表型特征。這類患者和健康人無(wú)明顯區(qū)別，但以往的研究[2]表明這類患者在發(fā)熱、服用磺胺類藥物時(shí)容易發(fā)生溶血導(dǎo)致輕微的貧血。臨床上僅憑血常規(guī)和血紅蛋白電泳篩查容易導(dǎo)致此類靜止型α-地貧的漏診。在本研究中，9例Hb WS雜合子合并(-α3.7/)或(-α4.2/)，HGB值均正常，MCV和MCH降低，表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素癥，但其血液學(xué)參數(shù)變化較小，血常規(guī)和血紅蛋白電泳各項(xiàng)指標(biāo)與- -SEA/αα對(duì)照組比較表現(xiàn)得更輕微，這和曾勁偉等[3]的報(bào)道一致。Hb WS雜合子合并輕型β-地貧，主要表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素性貧血，血紅蛋白電泳參數(shù)Hb A2升高，Hb F正?；蛘咻p微升高，與輕型β-地貧臨床表型相似，只通過(guò)常規(guī)的血液學(xué)篩查易漏診和誤診,在臨床工作中需注意鑒別[4]。顏綿生等[5]認(rèn)為盡管Hb WS的突變發(fā)生在α2基因上，但引起α珠蛋白鏈合成減少的變化程度可能較小，輕型β-地貧的血液學(xué)指標(biāo)受Hb WS雜合子的影響不顯著，輕型β-地貧的臨床表型容易遺漏Hb WS雜合子的存在。在本次分析的12例Hb WS合并輕型β-地貧病例中，臨床表現(xiàn)大部分無(wú)貧血或者輕微貧血，只有1例孕婦患者為中度貧血，HGB為84 g/dl，考慮為妊娠狀態(tài)加重貧血癥狀。

東南亞缺失型α-地貧是中國(guó)南方最常見(jiàn)的缺失型α-地貧，攜帶此基因的雜合子個(gè)體無(wú)臨床癥狀，血紅蛋白正?；蛴休p度貧血，MCV和MCH降低。當(dāng)東南亞缺失型α-地貧合并α+-地中海貧血稱為血紅蛋白H病，該基因型地中海貧表型和貧血程度差異大。此類基因型主要是由于4個(gè)α基因中3個(gè)發(fā)生了缺陷，導(dǎo)致α鏈合成降低，產(chǎn)生多余的β鏈，α鏈和β鏈比例失衡，紅細(xì)胞受損導(dǎo)致慢性溶血性貧血[1]。本次研究中的18例Hb WS雜合子合并東南亞缺失型α-地貧也是血紅蛋白H病的一種，HGB正常或輕微下降，MCV和MCH降低，大多數(shù)血液學(xué)參數(shù)與東南亞缺失型雜合子比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但其臨床表型又較其他基因型的血紅蛋白H病為輕，電泳未見(jiàn)Hb H區(qū)帶等其他異常血紅蛋白。本研究中此種Hb H病的表型特征與此前的報(bào)道一致[6]。

在本次研究的所有兩兩比較組之間，MCH的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，依此推斷在靜止型α-地貧篩查指標(biāo)中，MCH具有較高的靈敏度，此前也有學(xué)者[7]建議臨床采用MCH作為靜止型α-地貧篩查的重要指標(biāo)。

Hb WS是最常見(jiàn)的非缺失型α-地貧點(diǎn)突變類型，無(wú)論是單獨(dú)存在還是合并其他地貧基因型，該突變對(duì)血液學(xué)表型影響均較小，臨床需注意對(duì)該突變類型的檢測(cè)，避免漏診和誤診。此外，此基因型攜帶者應(yīng)避免服用磺胺類藥物和預(yù)防感染，以減少溶血的發(fā)生。本研究分析Hb WS不同基因型對(duì)血液學(xué)表型的影響,為地貧遺傳咨詢和臨床診斷提供參考依據(jù)。