楊花梅 孫菲，2 馬燕琳，2，3，4，5 李崎，2，3，4，5

海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院1海南省人類(lèi)生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，2生殖醫(yī)學(xué)科（?？?70100）；3海南省地方病（地中海貧血）臨床醫(yī)學(xué)研究中心（?？?70100）；4海南醫(yī)學(xué)院熱帶轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（?？?70100）；5?？谑腥祟?lèi)遺傳資源保藏重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（海口570100）

β-地中海貧血［1］（β-thalassemia，簡(jiǎn)稱(chēng)β-地貧）是由于β-珠蛋白基因異常所致的單基因遺傳病，呈世界性分布，而我國(guó)尤以華南、西南地區(qū)發(fā)病最高，其中廣東、廣西、海南以及云南是地中海貧血的高發(fā)省份［2］。β-地貧臨床癥狀輕重不一，可分為輕型、中間型及重型，其治療方法也有所不同。輸血和鐵螯合是目前治療地貧的常規(guī)方法，部分患者需終生依賴(lài)輸血及鐵螯合來(lái)維持生命。該方案雖改善了患者的生存質(zhì)量，但是長(zhǎng)期的輸血和鐵螯合也帶來(lái)了與輸血相關(guān)的感染和器官損傷等風(fēng)險(xiǎn)，也無(wú)法解決該疾病固有的遺傳原因［3］。異體造血干細(xì)胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，HSCT）是目前已經(jīng)證實(shí)的臨床治愈地貧的唯一方法，如果在輸血傳播感染和鐵超載等并發(fā)癥發(fā)生之前進(jìn)行HSCT，能夠顯著提高患者的生存率至90%［4］。但只有一小部分患者有合適的捐贈(zèng)者，且清髓性HSCT 的死亡率達(dá)5% ～10%，移植物抗宿主?。╣raft versus host disease，GVHD）、不良免疫反應(yīng)和醫(yī)療費(fèi)用高等原因?qū)е略撝委煼椒ǖ木窒扌?，無(wú)法廣泛應(yīng)用［5］。

在過(guò)去的幾十年里，人們一直在研究基因治療方法治愈單基因血液遺傳病。β-地貧是點(diǎn)突變引起的單基因遺傳病，其利用自體造血干細(xì)胞進(jìn)行基因治療成為近些年的研究熱點(diǎn)。異體HSCT僅限于有人白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigens，HLA）同源供體的患者，而使用自體造血干細(xì)胞進(jìn)行基因治療能夠?yàn)楫愺wHSCT 提供一種替代的治療方法［5］，不僅避免了GVHD，而且治療所需的調(diào)節(jié)方案中不需要免疫抑制藥物，使異體HSCT 受限的患者也可以進(jìn)行轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的輸注，這明顯擴(kuò)大了治療的適用范圍。

1 β-地貧的發(fā)病機(jī)制及臨床表現(xiàn)

β-地貧的發(fā)生是由于位于11 號(hào)染色體短臂第1 區(qū)第5 號(hào)帶第5 亞帶（11p15.5）的β-珠蛋白基因突變和∕或缺失，β-珠蛋白肽鏈的生物合成減少（β+-地貧）或完全被抑制（β0-地貧），使構(gòu)成血紅蛋白的α-珠蛋白肽鏈和β-珠蛋白肽鏈間的平衡被破壞，導(dǎo)致正常血紅蛋白合成減少或者無(wú)法合成，病情遷延導(dǎo)致慢性貧血。與此同時(shí)，α-珠蛋白肽鏈相對(duì)增多，未結(jié)合的α-珠蛋白肽鏈極難溶解，相互集聚形成不穩(wěn)定產(chǎn)物，該產(chǎn)物損害和破壞紅細(xì)胞前體導(dǎo)致無(wú)效紅細(xì)胞生成，在子代細(xì)胞中沉淀導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血，最終患者在臨床上表現(xiàn)出不同程度的貧血。在造血組織中遲發(fā)和死亡的紅細(xì)胞前體的大量擴(kuò)張會(huì)導(dǎo)致骨缺損、肝脾腫大和鐵超載。而慢性貧血會(huì)導(dǎo)致組織氧合不良和EPO 升高；無(wú)效紅細(xì)胞生成和慢性溶血又會(huì)使患者血液處于高凝狀態(tài)，增加血栓風(fēng)險(xiǎn)。無(wú)效紅細(xì)胞生成和慢性組織缺氧也會(huì)抑制鐵調(diào)素（鐵的負(fù)性調(diào)節(jié)激素，減少機(jī)體鐵的吸收）的合成和分泌，使循環(huán)中鐵調(diào)素降低，引起一系列反應(yīng)導(dǎo)致全身鐵代謝異常。針對(duì)無(wú)效紅細(xì)胞生成及鐵失調(diào)，目前有多項(xiàng)研究獲得了積極性成果［5-6］。

根據(jù)現(xiàn)有數(shù)據(jù)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過(guò)200 個(gè)導(dǎo)致β-地貧的基因突變［7］，不同的基因缺陷組成不同的表型，而擁有同樣表型的個(gè)體也會(huì)表現(xiàn)出不同的臨床癥狀，后者可能由于表觀遺傳因素影響所致。臨床上根據(jù)其嚴(yán)重程度不同將β-地貧分為輕型、中間型和重型［3］。如今，根據(jù)患者輸血需求，又分為輸血依賴(lài)性地貧（transfusion-dependent thalassemia，TDT）和非輸血依賴(lài)性地貧（non-transfusion-dependent thalassemia，NTDT）。TDT 與NTDT這種分類(lèi)僅代表患者被當(dāng)下診斷時(shí)的一個(gè)臨床水平，其可以根據(jù)患者是否積極治療的情況而發(fā)生臨床轉(zhuǎn)換，故同一患者的輸血要求應(yīng)間隔的進(jìn)行重新評(píng)估［5］。

后來(lái)發(fā)現(xiàn)，合并有α-地貧的β-地貧患者，由于緩和了α-珠蛋白肽鏈與β-珠蛋白肽鏈之間的不平衡狀態(tài)，臨床癥狀減輕［8］。更加值得注意的是，伴有遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)狀態(tài)（hereditary persistence of fetal hemoglobin，HPFH）的β-地貧或鐮狀細(xì)胞?。╯ickle cell disease，SCD）突變的個(gè)體，由于胎兒血紅蛋白（HbF）彌補(bǔ)了成人血紅蛋白（HbA）的不足，在某些情況下患者完全無(wú)臨床表現(xiàn)［9］。這些臨床觀察表明，利用其作為一種治療疾病的手段，誘導(dǎo)重型β-地貧患者產(chǎn)生HbF、減少α-珠蛋白基因的產(chǎn)生均能起到治療作用。

2 治療進(jìn)展

2.1 輸血、鐵螯合和脾切除重型β-地貧（屬于TDT）在出生后不久就會(huì)表現(xiàn)出嚴(yán)重的貧血癥狀，除自身無(wú)法合成血紅蛋白外，還會(huì)形成包涵體進(jìn)一步產(chǎn)生其他并發(fā)癥，故這類(lèi)患者需要終身規(guī)律輸血治療以維持患兒正常身體發(fā)育所需，以及控制潛在的病理生理機(jī)制。中間型β-地貧（屬于NTDT）主要表現(xiàn)為輕至中度的貧血，患者自身能夠合成部分血紅蛋白，故這類(lèi)患者只需偶爾在特定時(shí)期內(nèi)（如手術(shù)、懷孕和感染）進(jìn)行輸血，以提高血紅蛋白濃度。輕型β-地貧由于臨床癥狀不明顯或者幾乎無(wú)臨床癥狀而無(wú)需輸血治療［3］。

但由輸血導(dǎo)致的血源性感染、同種異體免疫反應(yīng)，尤其是全身多個(gè)器官的鐵超載問(wèn)題，會(huì)使患者又產(chǎn)生一系列與鐵代謝相關(guān)的并發(fā)癥，患者要進(jìn)行鐵螯合至關(guān)重要。而β-地貧患者本身表現(xiàn)出的無(wú)效紅細(xì)胞生成以及由此導(dǎo)致的紅細(xì)胞運(yùn)輸氧的能力下降而形成的組織缺氧，影響鐵調(diào)素的合成和分泌，使機(jī)體發(fā)生鐵過(guò)載，若不及時(shí)除鐵，會(huì)導(dǎo)致心肌病、肝纖維化或肝硬化、內(nèi)分泌疾病等并發(fā)癥［1，5］。根據(jù)國(guó)際地貧聯(lián)盟指南，對(duì)于TDT 患者，當(dāng)血清鐵蛋白超過(guò)1 000 μg∕L 時(shí)，就要進(jìn)行鐵螯合治療。而對(duì)于NTDT 患者，血清鐵蛋白超過(guò)800 μg∕L，就要進(jìn)行鐵螯合治療。目前常用的鐵螯合藥物為去鐵胺、去鐵酮、地拉羅司［1］。

大量無(wú)效紅細(xì)胞的生成會(huì)使得脾臟對(duì)其破壞增加，導(dǎo)致脾腫大、脾亢，故合并癥狀性脾腫大、脾亢者可進(jìn)行脾切除。對(duì)于不能接受輸血和鐵螯合治療的患者，也可進(jìn)行脾切除治療［1］。脾切除的主要目的是為了降低血液消耗、輸血需求，最終減少鐵負(fù)荷。由于目前輸血方案的日趨完善，對(duì)于TDT 患者來(lái)說(shuō)，脾切除已經(jīng)過(guò)時(shí)。除此之外，脾臟本身對(duì)機(jī)體中的有毒鐵有一定的清除作用，并能清除異常的血小板和紅細(xì)胞。一旦切除，隨著時(shí)間推移會(huì)出現(xiàn)血栓形成、鐵超載及嚴(yán)重的術(shù)后感染（如腦膜炎和敗血癥）等并發(fā)癥。尤其是5 歲以下的兒童，脾切除年齡與術(shù)后感染的風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)［3，5］。

2.2 異體造血干細(xì)胞移植HSCT自80年代開(kāi)創(chuàng)至今，已成為治愈重型地貧患者的一種重要手段［10］。歐洲血液和骨髓移植學(xué)會(huì)研究報(bào)道了2000 至2010年間進(jìn)行HLA 匹配同胞供體移植的治療情況，移植年齡≤18 歲的患者總生存率達(dá)（91±1）%、無(wú)事件生存率達(dá)（83 ± 1）%；與終生輸血、鐵螯合和并發(fā)癥處理相比，HSCT 改善了重癥患兒的生活質(zhì)量［10］。盡管有數(shù)據(jù)支持HSCT 在HLA 匹配情況下更為理想，但是，找到組織相容性供體的可能性小于50%［11］。對(duì)于沒(méi)有HLA 匹配同胞或者不相關(guān)供體的患者，可以選擇HLA 不匹配的相關(guān)供體、HLA不匹配的不相關(guān)供體或者不相關(guān)臍帶血進(jìn)行移植［11］。但是該報(bào)告沒(méi)有研究替代供體移植的結(jié)果。來(lái)自國(guó)際血液和骨髓移植研究中心的數(shù)據(jù)研究顯示，與HLA 匹配的相關(guān)或不相關(guān)供體相比，HLA 不匹配的相關(guān)供體的無(wú)事件存活率及總存活率較低，患者5年無(wú)事件存活率在年齡≤6 歲組為86%，7 ～15 歲組為80%，16 ～25 歲組為63%。因此在疾病早期就開(kāi)始同時(shí)尋找與HLA 匹配的相關(guān)和不相關(guān)供體，如果沒(méi)有HLA 匹配同胞，則可以選擇HLA 匹配的不相關(guān)供體進(jìn)行移植［12］。

在歷史上，骨髓是HSCT 的唯一來(lái)源。但在過(guò)去的20年里發(fā)生了轉(zhuǎn)變，外周血干細(xì)胞正在逐漸取代骨髓干細(xì)胞成為HSCT 的主要異體來(lái)源。研究發(fā)現(xiàn)與骨髓來(lái)源相比，使用外周血來(lái)源的干細(xì)胞在生存率及GVHD 方面沒(méi)有顯著差異，且后者移植速度更快，排斥反應(yīng)率更低，這也得益于調(diào)節(jié)方案的支持［13］。還有研究利用外周血、骨髓或臍帶血無(wú)關(guān)供體移植，調(diào)節(jié)清髓方案以降低移植物的毒性作用，顯著增加總體生存率［14-15］。

2.3 抑制無(wú)效紅細(xì)胞生成紅細(xì)胞生成是受細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)因子的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)管制的。EPO 具有促進(jìn)各類(lèi)紅系祖細(xì)胞和前體從早期的紅系祖細(xì)胞晚期向早幼紅階段的存活和增殖。JAK2 是一種胞質(zhì)酪氨酸激酶，可介導(dǎo)EPO 受體信號(hào)。EPO 與其受體的結(jié)合導(dǎo)致JAK2 的磷酸化，并激活對(duì)紅細(xì)胞生成至關(guān)重要的通路［16］。應(yīng)用JAK2 抑制劑（Ruxolitinib）在定期輸血的地貧患者中進(jìn)行其有效性和安全性的第2a 期實(shí)驗(yàn)表明，其可防止地貧紅系細(xì)胞增殖和減少脾腫大，認(rèn)為其在治療地貧癥狀方面是有益的［17］。

Mini-hepcidin 和跨膜蛋白絲氨酸6（transmembrane protein serine 6，TMPRSS6）抑制劑，其Minihepcidin 能夠模擬內(nèi)源性鐵調(diào)素的功能，TMPRSS6可減少鐵調(diào)素的表達(dá)，故減少TMPRSS6 的表達(dá)即可促進(jìn)內(nèi)源性鐵調(diào)素的產(chǎn)生。在小鼠模型中，服用Mini-hepcidin 或者抑制TMPRSS6 可顯著改善無(wú)效紅細(xì)胞生成、貧血和鐵超載［18-19］。針對(duì)TMPRSS6 的反義寡核苷酸或小干擾RNA 的使用已被證明可以改善小鼠貧血、鐵超載及其他β-地貧的臨床前模型［20］。

生長(zhǎng)分化因子11（growth differentiation factor 11，GDF11）通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-受體負(fù)調(diào)節(jié)紅細(xì)胞生成，并被活化素受體-II 配體陷阱（包括Sotatercept 和Luspatercept）阻斷。有臨床實(shí)驗(yàn)利用Sotatercept 和修飾后的Luspatercept 來(lái)阻斷GDF11的活性刺激晚期紅細(xì)胞的產(chǎn)生。關(guān)于Sotatercept第2a 階段的用于確定其安全性和耐受性的劑量研究，有16 例TDT 和30 例NTDT 患者登記進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測(cè)試［21］。以及Luspatercept 第2 階段的臨床實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行中，此次有64 名志愿者（31 例TDT 和33 例NTDT），其目的是確定其是否可以改善β-地貧患者的貧血和并發(fā)癥，目前結(jié)果令人鼓舞［22］。現(xiàn)Luspatercept 在19 個(gè)國(guó)家進(jìn)行第3 階段的研究，該實(shí)驗(yàn)利用Luspatercept 與安慰劑對(duì)照，在都加上最佳支持治療同時(shí)研究其在成人患者中的安全性和有效性，發(fā)現(xiàn)使用Luspatercept 的效果明顯高于安慰劑組，患者表現(xiàn)為輸血負(fù)擔(dān)減輕，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程幾乎無(wú)不良事件［23］。

2.4 基因治療

2.4.1 慢病毒載體慢病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒的一個(gè)屬，具有逆轉(zhuǎn)錄和整合功能?，F(xiàn)實(shí)驗(yàn)室和臨床研究的慢病毒載體（lentiviral vector，LV）以HIV-1來(lái)源為主。LV 能夠更有效的轉(zhuǎn)導(dǎo)非增殖或者緩慢增殖的細(xì)胞，縮短培養(yǎng)時(shí)間而保證轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中造血干細(xì)胞的活力，而反轉(zhuǎn)錄病毒載體不能感染非增殖的細(xì)胞；且第三代自滅活LV 增加了整合的安全性，成為了現(xiàn)在最有效的載體工具［24］。

首個(gè)利用LV 治療地貧的實(shí)驗(yàn)是由MAY 等［25］完成的，其將人β-珠蛋白基因準(zhǔn)確、有效地整合到宿主DNA 中高效表達(dá)，并合成正常的血紅蛋白。正是基于HIV-1 衍生的LV 的開(kāi)發(fā)，LCR HS 促進(jìn)β-樣珠蛋白表達(dá)的發(fā)現(xiàn)。后來(lái)的多個(gè)實(shí)驗(yàn)室證明，在β-珠蛋白啟動(dòng)子和LCR 元件的控制下，攜帶人β-或γ-珠蛋白基因的LV 能夠挽救小鼠和人β-地貧及SCD 表型，使利用LV 挽救β-血紅蛋白病成為一種現(xiàn)實(shí)［26］。

在基因治療發(fā)展的這幾十年中，慢病毒系統(tǒng)結(jié)構(gòu)在不斷的優(yōu)化。在第一階段1∕2 臨床實(shí)驗(yàn)中（LG001 于2006年在法國(guó)啟動(dòng)），MARINA 等［26］測(cè)試了HPV569 LV，該載體攜帶一個(gè)最小的β-珠蛋白啟動(dòng)子以及來(lái)自LCR 的HS2、HS3 和HS4 元素。將雞β-珠蛋白HS4（cHS4）核染色質(zhì)絕緣體的兩個(gè)拷貝插入病毒LTR 中，但最終結(jié)果為載體滴度低、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低、載體重排列且絕緣子元件丟失。基于這些原因，后來(lái)又經(jīng)過(guò)基因整合設(shè)計(jì)了一個(gè)新載體（BB305），BB305 與HPV569 完全相同，只是缺少了cHS4 絕緣體。載體并進(jìn)一步優(yōu)化，包括用CMV 啟動(dòng)子替換50 個(gè)LTR 啟動(dòng)子，以驅(qū)動(dòng)病毒RNA 生產(chǎn)，來(lái)提高載體效價(jià)，提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。2018年，THOMPSON 等［7］利用編碼HbAT87Q 的BB305載體治療（HGB-204 和HGB-205）22 例TDT 患者，其輸血量明顯降低，有3 例患者完全擺脫輸血，均未發(fā)生藥品相關(guān)的嚴(yán)重不良事件。第三階段實(shí)驗(yàn)（HGB-207）評(píng)估LentiGlobin BB305 在輸血依賴(lài)性地貧受試者中的有效性和安全性，目前正在進(jìn)行中（https：∕∕www.clinicaltrials.gov∕ct2∕show∕record∕NCT 02906202）。

2.4.2 CRISPR/Cas9 技術(shù)成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列及CRISPR 相關(guān)蛋白（CRISPR∕Cas）［27］是該領(lǐng)域的最新參與者，因其簡(jiǎn)單、高效和多功能性而被認(rèn)為是靶向和修飾基因組DNA 最有效和最先進(jìn)的工具。

CRISPR∕Cas 系統(tǒng)［27］有三種類(lèi)型，其中Ⅰ型和Ⅲ型系統(tǒng)由專(zhuān)門(mén)的核酸內(nèi)切酶加工CRISPR-RNA（crRNA）前體（pre-crRNA）并使之成熟，每一個(gè)成熟的crRNA 會(huì)組裝成一個(gè)大型的多Cas 蛋白復(fù)合物，能夠識(shí)別和切割與crRNA 互補(bǔ)的核酸。而在Ⅱ型CRISPR∕Cas9 系統(tǒng)中，當(dāng)外源的DNA 進(jìn)入細(xì)胞時(shí)，就會(huì)引起細(xì)菌的RNaseⅢ即催化pre-crRNA的成熟，成熟的crRNA 只有與tracrRNA 配對(duì)后形成雙鏈RNA，才能指導(dǎo)Cas9 在crRNA 引導(dǎo)序列靶標(biāo)的特定位點(diǎn)剪切雙鏈DNA。Cas9 是一種通用的核酸內(nèi)切酶，含有HNH 和RuvC 兩個(gè)核酸酶結(jié)構(gòu)域，前者剪切互補(bǔ)鏈，后者剪切非互補(bǔ)鏈。要實(shí)現(xiàn)Cas9 對(duì)目標(biāo)序列的切割，其不僅要完成crRNA 與tracrRNA 堿基配對(duì)，還依賴(lài)于原型間隔區(qū)相鄰基序（protospacer adjacent motif，PAM）的存在。只要根據(jù)目標(biāo)DNA 特異性重新設(shè)計(jì)sgRNA 序列，就可以將該技術(shù)應(yīng)用于多種細(xì)胞類(lèi)型的DNA 位點(diǎn)，最終改變基因的表達(dá)，從而CRISPR∕Cas9 技術(shù)是迄今為止最強(qiáng)大的基因編輯工具［28］。

有研究者利用CRISPR∕Cas9 技術(shù)直接修復(fù)突變的β-珠蛋白基因，恢復(fù)正常β-珠蛋白基因的表達(dá)［29-30］。研究發(fā)現(xiàn)，臨床上僅患HPFH 的患者沒(méi)有貧血癥狀，表明高水平的HbF 沒(méi)有不良后果，故利用CRISPR∕Cas9 技術(shù)模擬自然發(fā)生的HPFH 相關(guān)突變作為一種治療疾病的手段，如γ-珠蛋白啟動(dòng)子區(qū)-198T＞C HPFH 突變可與紅系轉(zhuǎn)錄因子KLF1結(jié)合［31］、-113A＞G 為類(lèi)紅細(xì)胞調(diào)節(jié)劑GATA1 創(chuàng)建了從頭結(jié)合位點(diǎn)［32］、-115 和-200 bp 處突變分別破壞γ-珠蛋白阻遏蛋白BCL11A 和ZBTB7A 的結(jié)合、刪除β-珠蛋白基因中的13kb，模仿西西里人的HPFH 基因型［33］、刪除包含δ-和β-珠蛋白基因以及BCL11A 結(jié)合位點(diǎn)在內(nèi)的13.6kb 基因組區(qū)，均能誘導(dǎo)重型β-地貧患者表達(dá)更多γ-珠蛋白，甚至由成人期的≤1%達(dá)到5%～20%的HbF 水平［31］。

靶向γ-β珠蛋白基因轉(zhuǎn)換的調(diào)節(jié)因子也可誘導(dǎo)HbF 的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BCL11A 通過(guò)其C 端ZnF簇在體內(nèi)和體外以序列特異性方式結(jié)合γ-珠蛋白啟動(dòng)子中的DNA 基序（TGACCA），利用CRISPR∕Cas9 技術(shù)在體外編輯TGACCA 可防止BCL11A 結(jié)合并重新激活γ-珠蛋白表達(dá)。刪除BCL11A 增強(qiáng)子內(nèi)小基因組（200 bp）可以激活成人向胎兒血紅蛋白的反向轉(zhuǎn)換和HbF 的合成［34］。“核心”DRED復(fù)合物（由TR2、TR4、DNMT1 和LSD1 組成）其特異性結(jié)合人胚胎ε-珠蛋白和胎兒γ-珠蛋白DR1 啟動(dòng)子元件上，抑制γ-珠蛋白轉(zhuǎn)錄為成人紅細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)核受體輔阻遏物-1（NCoR1）和BRCA1相關(guān)蛋白1（BAP1）也是DRED 的重要組成部分，減少BAP1 表達(dá)明顯誘導(dǎo)γ-珠蛋白轉(zhuǎn)錄。目前用CRISPR∕Cas9 修飾BCL11A 基因紅系特異性增強(qiáng)子（CTX001）的早期臨床實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行安全性和有效性評(píng)估，及對(duì)受試者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，其是首例重型β-地貧患者接受CTX001 實(shí)現(xiàn)治療目的，減少輸血 量 的 研究（https：∕∕www.clinicaltrials.gov∕ct2∕show∕NCT03655678；https：∕∕www.clinicaltrials.gov∕ct2∕show∕NCT04208529）。

在α-地貧患者中，單個(gè)α-珠蛋白基因缺失和2個(gè)α-珠蛋白基因缺失分別對(duì)應(yīng)于mRNA水平和蛋白水平上α-珠蛋白輸出減少25%和50%，這些水平可以被認(rèn)為是β-地貧合理的治療目標(biāo)。但是其面臨2 個(gè)挑戰(zhàn)：第一，α-珠蛋白的損失不應(yīng)該是完全的，任何超過(guò)75%的下降都將產(chǎn)生相反的效果，因失去大量α-珠蛋白鏈來(lái)產(chǎn)生血紅蛋白而導(dǎo)致貧血惡化。第二，β-珠蛋白的產(chǎn)生不應(yīng)受到影響。利用CRISPR∕Cas9 基因組編輯在人類(lèi)造血干∕祖細(xì)胞（CD34+）上模擬自然突變，刪除α-珠蛋白增強(qiáng)子MCS-R2 并造成α-地貧發(fā)現(xiàn)，患者α-珠蛋白減少且修正了珠蛋白的失衡，其實(shí)驗(yàn)并不影響CD34+的分化。

3 總結(jié)

β-地貧是一個(gè)涉及全球的遺傳性疾病，盡管目前對(duì)地貧的宣傳普及和管理得到了很大的改善，但是仍然有很多患者是未被發(fā)現(xiàn)的，以及針對(duì)已經(jīng)診斷的患者的治療也是并未完全受益到每一位患者。為此，全球也在不斷探索研究更多新的方法能夠普及每一位患者，改善其生活質(zhì)量。目前在治療上面，輸血和鐵螯合治療對(duì)重型地貧患者來(lái)說(shuō)仍是不可或缺的，而異體造血干細(xì)胞移植是根治地貧患者的唯一方法，利用自體造血干細(xì)胞進(jìn)行基因治療后再重新輸回患者體內(nèi)發(fā)揮治療性作用，目前取得的鼓舞性成果為患者帶來(lái)了更多希望。