萬建華詹揚楊妮胡旭李穎萌劉文君

江中牌健胃消食片所選用的藥材包含太子參、陳皮、山藥、麥芽（炒）、山楂，具有健胃消食的作用。其上市前的成年大鼠安評實驗方案如下：低、中、高（1.65、3.30、4.95g/kg）3個劑量分別給藥2個月，給藥期間記錄體重變化，給藥結束分別檢測谷丙轉氨酶活性、酚紅排泄率、紅細胞數(shù)量、白細胞數(shù)量，并對肝臟、脾臟、腎臟和胃進行病理分析。由于該產品上市近30年，當時的安評實驗檢測指標現(xiàn)在來看不夠全面[1，2]，同時很多患者服用健胃消食片的劑量和周期超過藥品說明書的規(guī)定，因此有必要補充一個更高劑量更長周期的毒性研究試驗，為臨床安全用藥提供更充分的數(shù)據支撐。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑江中牌健胃消食片（江中藥業(yè)股份有限公司生產，0.8g/片，生藥含量約0.7g/片，生藥含量比例為87.5%，批號：19051026），臨用前使用純化水配制成70%的溶液。

1.2 主要儀器BC-2800vet 全自動血液細胞分析儀（邁瑞醫(yī)療）；Chemray 240 血生化儀（深圳雷杜生命科技）；C3510 全自動凝血分析儀（邁瑞醫(yī)療）。Epoch 酶標檢測儀（BioTeK），Eclipse Ci 病理顯微鏡（Nikon 公司）；RM2126 石蠟切片機（Leica 公司）；石蠟包埋機。

1.3 動物SPF級大鼠80 只，雌雄各半，體重180～220g，購自江西中醫(yī)藥大學，許可證號SCXK（贛）2018-0003。大鼠均飼養(yǎng)于江西中醫(yī)藥大學實驗動物中心的SPF級動物房內，分籠飼養(yǎng)，每籠大鼠不超過5 只，自由攝食飲水，室溫控制在20℃～25℃，相對濕度維持在40%～70%，每天光照12h，黑暗處理12h，每小時通風≥15次。

1.4 劑量設計江中健胃消食片成人臨床用藥劑量約為0.1g·kg-1·d-1，根據體重將大鼠隨機分為高劑量組和對照組，高劑量組給藥劑量約為10g/kg，為臨床劑量的100 倍。

1.5 分組和給藥將大鼠按體重隨機分為對照組和高劑量組（10g/kg），每組40 只，雌雄各半，高劑量組大鼠給予健胃消食片水溶液（70%的濃度）灌胃，對照組給予等量純水，給藥體積均為15ml/kg，每日1次，每天進行1次一般臨床觀察并定期測定體重和攝食量。連續(xù)給藥13 周和26 周后分別剖殺1/4和1/2 的大鼠，經過4 周的恢復期后再剖殺1/4 的大鼠，分別進行血液學、血生化、凝血功能檢測；解剖時稱量主要臟器的濕重并對臟器組織進行病理學檢查。

1.6 觀察與記錄指標生長發(fā)育指標：體重、攝食量、一般臨床特征。血液學指標：白細胞數(shù)目（WBC）、淋巴細胞數(shù)目（Lypmh#）、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、血小板壓積(PCT)。血生化指標：總膽紅素（TBIL）、谷氨酰轉肽酶（r-GT）、總膽汁酸（TBA）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。凝血功能指標：凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、纖維蛋白原（FIB）。不同部位的臟器濕重和臟器系數(shù)：心臟、肝臟、脾臟、肺、腎、大腦、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢；組織病理學檢查部位：心臟、肝臟、脾臟、胃、腎、大腦、皮膚、十二指腸。

1.7 統(tǒng)計學分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，兩組計量資料用±s表示，比較采用t檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 健胃消食片對SD 大鼠一般狀況、體質量、攝食量的影響給藥期間各組大鼠的自主活動、飲水、攝食及二便均正常，精神狀態(tài)良好；毛色有光澤，口、鼻、眼未出現(xiàn)異常分泌物，皮膚也未出現(xiàn)過敏現(xiàn)象。各組成年大鼠在給藥后體重均保持穩(wěn)定增長。從給藥第1 周至恢復期結束，給藥組雄性大鼠的體重低于對照組（P＜0.05 或P＜0.01）；從給藥第5 周至恢復期結束，給藥組雌性大鼠的體重低于對照組（P＜0.05 或P＜0.01），見圖1、2。

圖1 雄性SD 大鼠體重變化

圖2 雌性SD 大鼠體重變化

2.2 健胃消食片對SD大鼠血液學指標的影響與對照組相比，在給藥中期，高劑量組雄性和雌性大鼠血常規(guī)指標差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；給藥末期，高劑量組雄性大鼠WBC和Lymph#降低（P＜0.05），MCV和MCH 升高（P＜0.05）；雌性大鼠PCT 升高（P＜0.05）?；謴推诮Y束時，指標均恢復至正常水平，結果見表1、2。

2.3 健胃消食片對SD大鼠血生化及凝血功能的影響與對照組相比，在給藥中期，高劑量組雄性和雌性大鼠血生化和凝血指標無明顯差異（P＞0.05）；給藥末期，高劑量組雄性大鼠TBA、HDL-C和APTT 降低（P＜0.05）；雌性大鼠TBIL、r-GT和FIB降低（P＜0.05），APTT 升高（P＜0.01）；恢復期結束，雌性大鼠TBIL 降低（P＜0.01），其它指標均恢復至正常水平，見表3、4。

2.4 健胃消食片對SD大鼠臟器濕重和臟器系數(shù)的影響與對照組相比，在給藥中期，高劑量組雄性大鼠肝臟、大腦、腎臟、胸腺和附睪的濕重降低（P＜0.05），大腦和睪丸的臟器系數(shù)升高（P＜0.05）；雌性大鼠心臟、脾臟、胸腺的臟器系數(shù)升高（P＜0.05 或P＜0.01）。給藥末期，高劑量組雄性大鼠肝臟、脾臟、胸腺的濕重降低（P＜0.05 或P＜0.01），心臟、大腦、腎臟、肺、睪丸和附睪的臟器系數(shù)升高（P＜0.05 或P＜0.01）；雌性大鼠心臟和腎臟的臟器系數(shù)升高?；謴推诮Y束，高劑量組雄性大鼠心臟和腎臟的臟器濕重降低（P＜0.05或P＜0.01），大腦的臟器系數(shù)升高（P＜0.05）；雌性大鼠胸腺的濕重降低，大腦、腎臟和卵巢的臟器系數(shù)升高（P＜0.05 或P＜0.01），見表5、6。

表1 各組雄鼠不同時間點血常規(guī)比較（±s）

表1 各組雄鼠不同時間點血常規(guī)比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05

指標 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復期結束（每組5 只）對照組 高劑量組 對照組 高劑量組 對照組 高劑量組WBC（×109/L） 5.11±1.23 5.21±1.50 5.38±1.52 3.50±1.11a 8.13±1.57 9.48±3.85 Lymph#（×109/L） 4.12±0.89 4.56±1.12 4.25±1.34 2.68±0.79a 6.10±1.21 7.25±2.66 MCV（fl） 52.69±2.31 55.69±3.59 51.83±1.63 56.75±1.89a 55.63±3.44 53.85±1.79 MCH（pg） 18.21±0.51 18.11±0.32 16.64±0.65 18.33±0.60a 18.73±0.96 18.08±0.67 PCT（%） 0.40±0.04 0.44±0.07 0.44±0.08 0.44±0.05 0.64±0.06 0.62±0.04

表2 各組雌鼠不同時間點血常規(guī)比較（±s）

表2 各組雌鼠不同時間點血常規(guī)比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05

指標 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復期結束（每組5 只）對照組 高劑量組 對照組 高劑量組 對照組 高劑量組WBC（×109/L） 4.15±1.21 4.35±0.69 3.69±1.16 4.05±0.76 5.48±1.14 6.03±1.31 Lymph#（×109/L） 3.21±0.51 3.11±0.42 3.00±0.96 3.18±0.55 4.33±0.70 4.83±0.85 MCV（fl） 54.23±2.11 57.10±4.20 58.04±1.72 54.2±2.30 57.53±3.35 58.53±2.40 MCH（pg） 17.89±0.22 17.66±1.20 18.74±0.53 17.38±0.66 19.58±1.47 19.95±0.84 PCT（%） 0.41±0.04 0.39±0.05 0.40±0.06 0.42±0.06a 0.60±0.07 0.59±0.05

表3 各組雄鼠不同時間點血生化與凝血功能比較（±s）

表3 各組雄鼠不同時間點血生化與凝血功能比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05

指標 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復期結束（每組5 只）對照組 高劑量組 對照組 高劑量組 對照組 高劑量組TBA(μmol/L) 11.62±3.49 13.94±3.86 47.00±21.32 24.02±6.23a 30.75±11.59 27.43±10.63 TBIL(μmol/L) 12.84±1.90 11.71±1.55 10.30±1.47 10.39±1.07 10.68±2.02 10.40±1.82 HDL-C(mmol/L) 0.34±0.08 0.29±0.02 0.33±0.03 0.22±0.10a 0.24±0.12 0.19±0.70 r-GT(U/L) 2.26±0.51 2.61±1.30 3.78±1.07 4.32±0.38 3.73±0.48 3.98±0.47 APTT（s） 26.56±1.19 30.33±5.46 35.70±7.98 27.73±1.26a 30.32±3.96 30.88±3.89 FIB（g/L） 1.70±0.20 1.90±0.50 1.55±0.19 1.48±0.30 1.49±0.40 1.45±0.40

表4 各組雌鼠不同時間點血生化與凝血功能比較（±s）

表4 各組雌鼠不同時間點血生化與凝血功能比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05，bP＜0.01

指標 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復期結束（每組5 只）對照組 高劑量組 對照組 高劑量組 對照組 高劑量組TBA(μmol/L) 27.93±16.93 26.45±7.45 28.65±15.32 58.85±29.73 36.50±18.35 29.83±6.62 TBIL(μmol/L) 15.33±3.46 12.30±2.43 10.96±2.88 10.89±0.92a 10.40±0.83 8.97±1.00b HDL-C(mmol/L) 0.46±0.08 0.41±0.16 0.43±0.19 0.31±0.18 0.34±0.09 0.33±0.18 r-GT(U/L) 1.94±0.96 2.75±1.20 4.04±0.51 3.63±0.71a 5.28±2.05 5.89±2.59 APTT（s） 28.43±1.71 28.63±1.40 29.65±3.79 34.83±2.82a 25.59±3.89 28.67±3.68 FIB（g/L） 1.25±0.30 1.13±0.13 1.15±0.13 0.90±0.08b 1.20±0.18 1.27±0.45

表5 各組雄鼠不同時間點臟器重量和系數(shù)比較（±s）

表5 各組雄鼠不同時間點臟器重量和系數(shù)比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05，bP＜0.01

臟器 指標 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復期（每組5 只）對照組 高劑量組 對照組 高劑量組 對照組 高劑量組心臟 臟器重量 1.89±0.54 1.51±0.22 1.61±0.21 1.54±0.19 1.90±0.26 1.57±0.14a臟器系數(shù) 0.33±0.07 0.35±0.04 0.28±0.03 0.33±0.03b 0.33±0.04 0.32±0.02肝臟 臟器重量 14.93±2.94 10.47±1.61a 12.78±1.52 10.29±1.68b 12.29±1.63 11.79±1.70臟器系數(shù) 2.55±0.14 2.42±0.32 2.26±0.13 2.21±0.19 2.10±0.16 2.36±0.18a脾臟 臟器重量 1.15±0.18 0.97±0.32 1.03±0.14 0.80±0.11b 0.87±0.03 0.80±0.14臟器系數(shù) 0.20±0.01 0.22±0.06 0.18±0.03 0.17±0.01 0.15±0.01 0.16±0.02大腦 臟器重量 2.24±0.05 2.17±0.05a 2.11±0.11 2.02±0.24 2.17±0.18 2.18±0.08臟器系數(shù) 0.39±0.07 0.50±0.04a 0.37±0.03 0.44±0.04b 0.37±0.04 0.44±0.02a腎臟 臟器重量 1.86±0.31 1.46±0.24a 1.70±0.15 1.58±0.16 1.66±0.09 1.45±0.19a臟器系數(shù) 0.32±0.02 0.34±0.04 0.30±0.03 0.34±0.02b 0.29±0.02 0.29±0.03肺 臟器重量 2.23±0.28 1.95±0.70 2.08±0.19 2.00±0.24 2.25±0.09 1.86±0.16b臟器系數(shù) 0.39±0.06 0.45±0.14 0.37±0.02 0.43±0.04b 0.39±0.03 0.37±0.02胸腺 臟器重量 0.63±0.09 0.41±0.09a 0.35±0.13 0.24±0.04a 0.33±0.09 0.27±0.10臟器系數(shù) 0.09±0.05 0.09±0.02 0.06±0.03 0.05±0.01 0.06±0.02 0.05±0.02腎上腺 臟器重量 0.09±0.06 0.07±0.01 0.04±0.01 0.04±0.01 0.03±0.02 0.04±0.01臟器系數(shù) 0.02±0.01 0.02±0.00 0.01±0.00 0.01±0.00a 0.01±0.00 0.01±0.00睪丸 臟器重量 3.50±0.50 3.71±0.58 3.43±0.72 3.71±0.42 3.76±0.24 3.69±0.24臟器系數(shù) 0.62±0.16 0.86±0.10a 0.61±0.13 0.80±0.07b 0.65±0.07 0.74±0.08附睪 臟器重量 0.93±0.15 0.70±0.04a 0.85±0.06 0.83±0.09 0.85±0.09 0.78±0.12臟器系數(shù) 0.17±0.05 0.16±0.01 0.15±0.02 0.18±0.02b 0.15±0.02 0.16±0.03

表6 各組雌鼠不同時間點臟器重量和系數(shù)比較（±s）

表6 各組雌鼠不同時間點臟器重量和系數(shù)比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05，bP＜0.01

臟器 指標 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復期（每組5 只）對照組 高劑量組 對照組 高劑量組 對照組 高劑量組心臟 臟器重量 0.96±0.12 1.02±0.11 1.10±0.09 1.08±0.14 1.28±0.13 1.15±0.16臟器系數(shù) 0.35±0.02 0.38±0.02a 0.33±0.02 0.37±0.04b 0.36±0.04 0.36±0.04肝臟 臟器重量 7.85±0.74 7.74±1.46 8.35±1.02 7.50±0.95 9.16±0.59 8.39±1.08臟器系數(shù) 2.84±0.07 2.90±0.32 2.49±0.25 2.54±0.14 2.59±0.21 2.67±0.40脾臟 臟器重量 0.62±0.03 0.67±0.08 0.68±0.11 0.61±0.08 0.67±0.08 0.65±0.04臟器系數(shù) 0.19±0.00 0.25±0.02b 0.20±0.03 0.21±0.03 0.19±0.02 0.21±0.02大腦 臟器重量 2.02±0.19 1.99±0.18 1.94±0.11 1.85±0.10 2.01±0.13 1.97±0.06臟器系數(shù) 0.73±0.06 0.75±0.07 0.58±0.05 0.63±0.08 0.57±0.04 0.63±0.04a肺 臟器重量 1.33±0.11 1.40±0.15 1.69±0.22 1.52±0.31 1.86±0.31 1.86±0.32臟器系數(shù) 0.48±0.09 0.53±0.02 0.51±0.07 0.52±0.13 0.53±0.08 0.59±0.08腎臟 臟器重量 0.96±0.12 0.94±0.13 1.08±0.11 1.02±0.12 1.13±0.11 1.14±0.08臟器系數(shù) 0.35±0.02 0.35±0.02 0.32±0.02 0.35±0.01b 0.32±0.03 0.36±0.01a胸腺 臟器重量 0.25±0.08 0.25±0.08 0.29±0.12 0.24±0.04 0.26±0.01 0.18±0.06a臟器系數(shù) 0.09±0.04 0.12±0.04a 0.09±0.03 0.08±0.01 0.07±0.00 0.06±0.02腎上腺 臟器重量 0.06±0.02 0.09±0.03 0.04±0.01 0.04±0.01 0.03±0.01 0.04±0.01臟器系數(shù) 0.02±0.00 0.03±0.02 0.01±0.00 0.01±0.00 0.01±0.00 0.01±0.00卵巢 臟器重量 0.28±0.08 0.22±0.09 0.22±0.09 0.23±0.08 0.24±0.01 0.25±0.01臟器系數(shù) 0.10±0.02 0.08±0.04 0.07±0.03 0.08±0.02 0.07±0.00 0.08±0.01b子宮 臟器重量 0.73±0.17 1.17±0.67 0.79±0.18 0.82±0.41 0.89±0.31 0.79±0.30臟器系數(shù) 0.26±0.05 0.46±0.30 0.23±0.05 0.30±0.15 0.25±0.09 0.25±0.09

2.5 健胃消食片對SD大鼠臟器組織病理的影響在給藥中期、給藥末期和恢復期結束時分別剖殺大鼠，對其主要臟器進行病理分析發(fā)現(xiàn)，高劑量組和對照組胃和十二指腸均出現(xiàn)了輕微上皮細胞脫落，脾臟局部可見脾小結擴張，肝臟膽管輕度增生等，上述病變表現(xiàn)的程度均較輕微，在各時期出現(xiàn)病變大鼠的數(shù)量和病變程度也未見明顯差異。

3 討論

研究結果顯示，從給藥開始，高劑量組大鼠體重增長相對于對照組明顯減緩，認為長期高劑量服用健胃消食片可延緩實驗大鼠的體重增長。

給藥中期，高劑量組和對照組的血常規(guī)、血生化和凝血功能相比較，均無異常波動；給藥末期，高劑量組的血常規(guī)、血生化和凝血功能中的少數(shù)指標出現(xiàn)了輕微波動；恢復期結束，高劑量組所有血常規(guī)、凝血功能及生化指標絕大多數(shù)恢復正常。這提示長期高劑量服用健胃消食片可對大鼠血常規(guī)、血生化和凝血功能產生影響，但幅度較輕微，且大多未偏離文獻報道的同齡大鼠數(shù)值范圍[3～7]，同時這種影響在停藥后大多可逆，不構成永久性機體損傷。

同時在整個實驗的不同時期發(fā)現(xiàn)大鼠多個臟器的濕重和臟器系數(shù)出現(xiàn)異常波動[8，9]，但呈現(xiàn)一個共同的規(guī)律，即高劑量組相對于對照組臟器濕重降低，臟器系數(shù)升高。已有研究表明一些影響動物食欲或消化吸收的藥物可導致實驗動物體重增長明顯減緩，同時臟器濕重增加也會減緩，但體重增長減緩的幅度要比臟器濕重減緩的幅度大許多，這時相關的臟器系數(shù)統(tǒng)計學檢驗會出現(xiàn)不能準確反映檢驗者目的的顯著性差異[10，11]。結合本次實驗高劑量組大鼠體重增長明顯減緩，因此推斷這次實驗臟器濕重降低和臟器系數(shù)升高多是由此導致的。而且主要臟器的病理分析顯示，高劑量組大鼠主要臟器的病理檢查未發(fā)現(xiàn)異常，多為自發(fā)性病變[12～15]，基本可判定臟器濕重和臟器系數(shù)的異常波動無毒性意義。

綜上，10g/kg 高劑量健胃消食片灌胃26 周對幼齡期SD 大鼠的肝功能指標和凝血指標具有輕微影響，但無明顯毒性反應；同時未對臟器產生實質性的損傷。故認為健胃消食片的無毒性反應劑量（no observed adverse effect level, NOAEL）不低于10g/kg，相當于臨床成人劑量的100 倍。