孫海龍，魯曉峰，邵 靜，李 靜，徐樹廣

（1 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部園藝作物種質(zhì)資源利用重點實驗室，遼寧興城125100）（2 吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所）

李是薔薇科（Rosaceae）李屬（Prunus）落葉果樹。目前，我國主要的栽培種有中國李（P.salicinaL.）、歐洲李（P.domesticaL.）、杏李（P.simoniiCarr.）和櫻桃李（P.cerasiferaEhrhart.）。據(jù)FAO 統(tǒng)計，2018 年我國李栽培總面積193 萬hm2，總產(chǎn)量680萬t，在北方落葉果樹種類中，面積僅低于蘋果（207萬hm2）[1]，是我國重要的落葉果樹之一。

酚類物質(zhì)是植物主要的次生代謝產(chǎn)物之一，對植物的色澤、果實品質(zhì)、果實風(fēng)味等有較大的影響，其抗氧化[2]、抗癌[3-4]、抗誘變[5]、抗糖尿病[6]、抗炎[7]、抗HIV[8]等藥理活性更是引起廣泛關(guān)注。我國李資源豐富、分布廣泛，遺傳多樣性豐富，其果實中富含維生素、酚類等物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，與其他水果相比，李果實中酚類化合物含量較高[2,9]，且對人類健康大有益處[10-12]。近年來，有關(guān)李果實酚類物質(zhì)的研究越來越多，本課題組對不同李種質(zhì)果實中酚類物質(zhì)組成、含量進(jìn)行了比較[13]，對李果皮中酚含量及其抗氧化活性進(jìn)行了分析[14]，并對李果實中酚類物質(zhì)含量及組成進(jìn)行了系統(tǒng)總結(jié)[15]。目前，有關(guān)李酚類物質(zhì)研究主要集中在果實和果皮，關(guān)于果肉中酚類物質(zhì)研究極少，綜上所述，本研究以21 份李種質(zhì)果肉為試材，對其總酚含量及抗氧化能力進(jìn)行分析，為進(jìn)一步研究李果實酚類物質(zhì)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)，為高酚含量李新品種選育及綜合開發(fā)利用提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以21 份不同類型李種質(zhì)為試驗材料（表1），于2018 年6—9 月果實成熟期間，在樹體東、南、西、北4 個方向高度一致、外圍花束狀短果枝上隨機(jī)采摘無病蟲害、果粒均勻、無裂果、成熟度相對一致的果實，每個品種采摘30 個果實，采摘當(dāng)天運回實驗室。每10 個果實作為1 次重復(fù)，重復(fù)3次，取不同部位果肉于液氮中冷凍，于-80 ℃冰箱中冷凍保存待用。

1.2 試驗方法

1.2.1果肉樣品預(yù)處理

李果肉于冷凍研磨機(jī)中研磨成粉末，稱取果肉粉末10 g，甲醇溶液超聲提取20 min，定容至50 mL，4 ℃過夜培養(yǎng)，10 000 r/min、4 ℃條件下離心20 min，取上清液備用。

1.2.2總酚含量測定

采用Folin-Ciocalteau 法[16]，用沒食子酸作標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，總酚含量結(jié)果以每100 g 鮮果肉中含有的沒食子酸質(zhì)量表示，換算成mg/kg。

表1 試驗材料

1.2.3抗氧化活性測定

（1）DPPH 自由基清除法抗氧化能力測定。參照Thaipong 等[17]的方法加以改進(jìn)，以Trolox 作對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以每克樣品中Trolox 當(dāng)量表示（μmol TE/g）。

（2）ABTs 自由基清除法抗氧化能力測定。參照Thaipong 等[17]的方法加以改進(jìn)，以Trolox 作對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以每克樣品中Trolox 當(dāng)量表示（μmol TE/g）。

（3）FRAP 法抗氧化能力測定。參照Thaipong等[17]的方法加以改進(jìn)，以FeSO4水溶液為對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以每克樣品中FeSO4當(dāng)量表示（μmol Fe2+/g）。

1.3 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用Microsoft Excel 軟件和SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同李種質(zhì)果肉總酚含量比較

不同李種質(zhì)果肉中總酚含量如圖1 所示，總酚含量變幅為81.8～1 104.9 mg/kg，平均含量549.1 mg/kg，不同種質(zhì)間差異明顯，變異系數(shù)為42.58%，其中，‘密山大紫李’含量最高，‘玉皇李’含量最低。高于平均值的李種質(zhì)有9 個，分別為‘密山大紫李’‘布爾班克’‘奉化李’‘普羅達(dá)克特’‘大玫瑰’‘一品丹楓’‘青柰’‘郯城杏梅’和03297。

圖1 不同李種質(zhì)果肉總酚含量

2.2 不同李種質(zhì)果肉DPPH 自由基清除能力比較

供試的21 份李種質(zhì)果肉DPPH 自由基清除能力測定結(jié)果見圖2，不同種質(zhì)間差異明顯，變幅為25.19～270.61 μmol/g，平均值為134.51 μmol/g，變異系數(shù)為44.42%，其中，‘密山大紫李’DPPH 自由基清除能力最強(qiáng)，‘玉皇李’DPPH 自由基清除能力最弱。DPPH 清除能力由強(qiáng)到弱排名前10 的依次為‘密山大紫李’、03297、‘布爾班克’‘奉化李’‘大玫瑰’‘普羅達(dá)克特’‘青柰’‘一品丹楓’‘安哥諾’‘龍園秋李’。

2.3 不同李種質(zhì)果肉FRAP 抗氧化能力比較

供試的21份李種質(zhì)果肉FRAP抗氧化能力測定結(jié)果見圖3，不同種質(zhì)間差異明顯，變幅為80.85～1 096.47 μmol/g，平均值為553.59 μmol/g，變異系數(shù)為42.43%，其中，‘密山大紫李’FRAP 抗氧化能力最強(qiáng)，‘玉皇李’FRAP 抗氧化能力最弱。FRAP抗氧化能力由強(qiáng)到弱排名前10 的依次為‘密山大紫李’、03297、‘大玫瑰’‘布爾班克’‘郯城杏梅’‘普羅達(dá)克特’‘理查德早生’‘一品丹楓’‘龍園秋李’‘新世紀(jì)’。

圖2 不同李種質(zhì)果肉DPPH 自由基清除能力差異分析

圖3 不同李種質(zhì)果肉FRAP 抗氧化能力差異分析

2.4 不同李種質(zhì)果肉ABTs 抗氧化能力比較

供試的21 份李種質(zhì)果肉ABTs 抗氧化能力測定結(jié)果見圖 4，不同種質(zhì)間差異明顯，變幅為74.84～635.59 μmol/g，平均值為333.52 μmol/g，變異系數(shù)為40.27%，其中，03297 ABTs 抗氧化能力最強(qiáng)，‘玉皇李’ABTs 抗氧化能力最弱。ABTs抗氧化能力由強(qiáng)到弱排名前10 的依次為03297、‘布爾班克’‘密山大紫李’‘安哥諾’‘青柰’‘普羅達(dá)克特’‘奉化李’‘一品丹楓’‘秋姬’‘大玫瑰’。

圖4 不同李種質(zhì)果肉ABTs 抗氧化能力差異分析

2.5 果肉總酚含量與抗氧化活性的相關(guān)性分析

21 份李種質(zhì)果肉總酚含量與抗氧化能力相關(guān)性結(jié)果如表2 所示。果肉中總酚含量與DPPH、FRAP和ABTs 法測定的抗氧化能力均呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.977、0.958、0.841，相關(guān)性為DPPH＞FRAP＞ABTs。

2.6 抗氧化能力評價方法相關(guān)性

表2 果肉中總酚含量和抗氧化能力相關(guān)性

對3 種抗氧化評價方法測定的果肉抗氧化能力結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果如表3 所示。DPPH、FRAP 和ABTs 3 種評價方法兩兩間的相關(guān)性均達(dá)到極顯著水平，DPPH 與FRAP、DPPH 與ABTs、FRAP與ABTs 相關(guān)系數(shù)分別為0.943、0.882、0.821。

表3 抗氧化活性評價方法的相關(guān)性

3 討論與結(jié)論

酚類物質(zhì)是植物主要的次生代謝產(chǎn)物之一，廣泛分布于蔬菜、水果、谷物等中[18]。酚類物質(zhì)對植物的色澤、品質(zhì)和風(fēng)味等有一定的影響，其抗氧化功能更是引起廣泛關(guān)注[19]。本研究對21 份李種質(zhì)果肉總酚含量及其抗氧化能力進(jìn)行了分析，研究結(jié)果表明，21 份李種質(zhì)果肉總酚含量變幅范圍介于81.8～1 104.9 mg/kg，說明不同李種質(zhì)間果肉總酚含量存在明顯差異，與周丹蓉等[20]研究結(jié)果一致，但本研究中‘黑寶石’和‘秋姬’總酚含量與周丹蓉等[20]報道的2 個品種總酚含量差異較大，分析可能是受測定方法、栽培環(huán)境和栽培技術(shù)等因素的影響。而本研究中所有試材均栽植于同一試驗區(qū)，管理條件一致，因此推斷，果肉總酚含量的差異主要受品種因素和品種間次生代謝產(chǎn)物合成能力差異的影響。這與其他學(xué)者在李果肉總酚含量方面研究結(jié)果一致[21]。

“抗氧化能力”一直是食品科學(xué)領(lǐng)域研究的重點，“富含抗氧化劑”也成為了“健康”的商業(yè)標(biāo)簽[22]。然而關(guān)于水果抗氧化能力的評價目前還沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)方法，因此，一般采用2 種或2 種以上方法對水果抗氧化能力進(jìn)行分析[23-25]。本研究采用3種評價方法來測定不同李種質(zhì)果肉的抗氧化能力，能較全面地反映出李果肉的抗氧化功效，結(jié)果表明，DPPH 自由基清除能力變幅為25.19～270.61 μmol/g，F(xiàn)RAP 抗氧化能力變幅為80.85～1 096.47 μmol/g，ABTs 抗氧化能力變幅為74.84～635.59 μmol/g，不同種質(zhì)間果肉酚類物質(zhì)的抗氧化能力存在明顯差異，這與前人在黑刺李[26]、櫻桃李[27]、歐洲李[28]和中國李[20]上的研究結(jié)果一致。相關(guān)性分析結(jié)果表明，果肉總酚含量與抗氧化能力呈極顯著正相關(guān)，周丹蓉等[20]對14 個李品種研究發(fā)現(xiàn)，果肉總酚含量與DPPH 和FRAP 法抗氧化能力呈極顯著正相關(guān)，而與ABTs 法抗氧化能力呈顯著正相關(guān)，這與本研究結(jié)果稍有不同，分析原因可能為試驗誤差、品種差異以及品種間多酚組分的種類不同引起的。本研究發(fā)現(xiàn)，‘密山大紫李’、03297、‘布爾班克’3 個李種質(zhì)果肉總酚含量高，且抗氧化能力強(qiáng)，其中03297 是一個商品性優(yōu)異的紅肉李新種質(zhì)，可作為進(jìn)一步開發(fā)利用和功能育種的優(yōu)異種質(zhì)，而DPPH 和FRAP 法能較好地反映李果肉多酚含量與抗氧化性的關(guān)系，可以作為李果肉多酚總抗氧化活性評價方法的主要選擇。本研究為進(jìn)一步研究李種質(zhì)功能活性提供了基礎(chǔ)，為提高李資源綜合開發(fā)利用及李新品種選育提供了方向。