石 雪, 高宏宇, 楊 威

(中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院 血液科, 遼寧 沈陽, 110020)

長鏈非編碼 RNA(lncRNA)是一類長度大于200個核苷酸，不具有編碼蛋白質(zhì)功能的RNA, 其表達(dá)異常與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[1]。肌動蛋白纖維相關(guān)蛋白1-反義RNA 1(AFAP1-AS1)最初在食管腺癌中被WU W等[2]發(fā)現(xiàn)。AFAP1-AS1在多種惡性腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，并在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要作用?，F(xiàn)將AFAP1-AS1作為綜述對象，深入探討其在惡性腫瘤中的臨床意義、生物學(xué)功能和作用機(jī)制。

1 AFAP1-AS1概述

AFAP1-AS1屬于反義lncRNA, 長度6 810 bp, 位于4號染色體4p16.1區(qū)域，由AFAP1基因的反義鏈轉(zhuǎn)錄。AFAP1-AS1基因的第2外顯子與AFAP1基因的第14～16外顯子區(qū)域重疊、互補(bǔ)。有研究表明AFAP1-AS1在多種腫瘤組織和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，如食管癌[2-4]、胰腺癌[5-6]、鼻咽癌[7-9]、肝細(xì)胞癌[10-11]和肺癌[12-15]等。此外, AFAP1-AS1過表達(dá)與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、TNM分期和不良預(yù)后等臨床病理特征相關(guān)[5, 7, 10]。沉默AFAP1-AS1可調(diào)控相關(guān)基因和信號通路，抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡[10, 16-17]。

2 AFAP1-AS1與惡性腫瘤

2.1 食管癌

食管癌是全球最常見的癌癥類型之一，也是全球第六大與腫瘤相關(guān)的死亡原因[18]。食管癌有2種主要的組織學(xué)亞型，包括食管腺癌(OAC)和食管鱗狀細(xì)胞癌(OSCC), 且食管癌的長期生存率非常低。食管癌發(fā)病率逐年上升，預(yù)后較差，迫切需要尋找新的腫瘤標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，以對食管癌患者進(jìn)行早期診斷和精準(zhǔn)治療。

WU W等[2]應(yīng)用HELP-seq技術(shù)對巴雷特食管和OAC組織的全基因組甲基化譜進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在這兩種疾病組織中低甲基化且呈過表達(dá)。沉默AFAP1-AS1可抑制食管腺癌細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移和侵襲，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，但對AFAP1的表達(dá)無影響[2]。AFAP1-AS1在OAC中發(fā)揮促癌作用，且其過表達(dá)與低甲基化相關(guān)。

ZHOU XL等[3]研究發(fā)現(xiàn)OSCC組織中AFAP1-AS1表達(dá)上調(diào)，且AFAP1-AS1過表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期以及針對性放療、化療反應(yīng)相關(guān)。此外, AFAP1-AS1過表達(dá)的食管鱗狀細(xì)胞癌患者的無進(jìn)展生存期(PFS)和總生存期(OS)較均短，多因素分析表明AFAP1-AS1過表達(dá)是該病預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測因子。LUO HL等[4]通過細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)沉默AFAP1-AS1可抑制OSCC細(xì)胞增殖、克隆形成和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。AFAP1-AS1可能成為食管癌新的預(yù)后標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)。

2.2 胰腺癌

胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)是胰腺癌(PC)的主要病理類型，是全球第四大最常見的癌癥致死原因[19]。PDAC是一種早期轉(zhuǎn)移的致命性疾病，PDAC患者的5年生存率只有5%～7%[20]。因此，確定用于PDAC患者早期診斷的生物標(biāo)志物至關(guān)重要。

YE Y等[5]通過芯片技術(shù)和實時熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在胰腺導(dǎo)管細(xì)胞癌組織中表達(dá)上調(diào)，且其過表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、周圍神經(jīng)侵襲和較短的PFS和OS相關(guān)。細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)沉默AFAP1-AS1可抑制胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞增殖，使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，并通過調(diào)控上皮標(biāo)志物(E-cadherin)、間充質(zhì)標(biāo)志物(Vimentin 和 N-cadherin)、Slug和Snail1等上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)基因的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲。裸鼠實驗表明沉默AFAP1-AS1會導(dǎo)致胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞成瘤能力減弱。

ZHOU J等[6]發(fā)現(xiàn)葫蘆素B(CuB)可通過下調(diào)AFAP1-AS1的表達(dá)來抑制PC細(xì)胞增殖，并使細(xì)胞周期停滯于G2/M期。生物信息學(xué)分析和雙熒光素酶報告基因檢測發(fā)現(xiàn)表皮生長因子受體(EGFR)和AFAP1-AS1與miR-146b-5p直接競爭結(jié)合，假設(shè)AFAP1-AS1可作為競爭性內(nèi)源RNA(ceRNA)，有效作為miR-146b-5p的分子海綿，激活EGFR的表達(dá)。CuB誘導(dǎo)miR-146b-5p高表達(dá)，抑制AFAP1-AS1表達(dá)。體內(nèi)實驗證實CuB通過破壞AFAP1-AS1/miR-146b-5p/EGFR軸來抑制PC細(xì)胞的增殖。AFAP1-AS1可調(diào)控PC的進(jìn)展，并有潛力作為PC早期檢測和個體化治療的生物標(biāo)志物。

2.3 鼻咽癌

鼻咽癌(NPC)是東南亞特有的一種疾病，與EB病毒感染有關(guān)[21]。75%～90%的NPC患者因早期癥狀無特異性和體檢不便等原因，被診斷時已為晚期。NPC主要采用放療，但復(fù)發(fā)率、死亡率較高[22]。因此，為早期確診高危人群和評估NPC治療效果，尋找NPC的治療靶點(diǎn)和預(yù)后生物標(biāo)志物至關(guān)重要。

BO H等[7]通過芯片分析發(fā)現(xiàn)NPC組織中AFAP1-AS1表達(dá)上調(diào)，且其過表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)，隨后對石蠟包埋的NPC組織樣本進(jìn)行原位雜交驗證，發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1過表達(dá)與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及較短的PFS和OS相關(guān)，而與腫瘤分期無關(guān)。細(xì)胞實驗表明沉默AFAP1-AS1可下調(diào)AFAP1蛋白表達(dá)，調(diào)控應(yīng)力纖維的完整性以及小GTP酶信號Rho/Rac通路中多種蛋白的表達(dá)，促進(jìn)NPC細(xì)胞遷移和侵襲，但對細(xì)胞增殖、凋亡無影響。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示下調(diào)AFAP1-AS1后，RhoA、Rac2、Rab10、Rab11a、Rhogdi和Pfn1表達(dá)上調(diào)，而RhoC、Rab11b和Lasp1表達(dá)下調(diào)。此外，裸鼠實驗也證實沉默AFAP1-AS1會使NPC細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的能力受到抑制。

TANG Y等[8]對96例石蠟包埋的NPC組織中AFAP1-AS1和PD-1進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NPC組織的浸潤淋巴細(xì)胞中AFAP1-AS1和PD-1呈現(xiàn)共表達(dá)。浸潤淋巴細(xì)胞中AFAP1-AS1或PD1過表達(dá)的患者更易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，并且AFAP1-AS1和PD1雙過表達(dá)的NPC患者預(yù)后不良。此外，HE B等[9]通過受試者工作曲線分析發(fā)現(xiàn)血清中3種循環(huán)lncRNA MALAT1、AFAP1-AS1和AL359062有助于診斷早期NPC, 且三者過表達(dá)與TNM分期和EB病毒感染密切相關(guān)。這些結(jié)果表明, AFAP1-AS1可能是NPC的促癌基因和潛在的治療靶點(diǎn)。

2.4 肺癌

肺癌是全球最常見的癌癥相關(guān)死亡原因[19]。目前非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的化療和分子靶向治療取得了一定進(jìn)展，但由于治療方案有限、腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，NSCLC的5年生存率低于15%[23]。因此，為肺癌的早期診斷和轉(zhuǎn)移識別找到合適的生物標(biāo)志物非常重要。

YU H[12]通過芯片技術(shù)鑒定出NSCLC組織中有551條lncRNA表達(dá)上調(diào)，其中AFAP1-AS1上調(diào)最顯著。DENG J等[15]研究表明AFAP1-AS1過表達(dá)與NSCLC患者的臨床分期、吸煙史、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床特征相關(guān)。通過Kaplan-Meier分析AFAP1-AS1不同表達(dá)水平的NSCLC患者與OS的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1過表達(dá)的患者生存期較短, Cox回歸分析表明AFAP1-AS1是NSCLC的獨(dú)立預(yù)后因素。

ZENG Z等[13]也證實AFAP1-AS1在肺癌組織中上調(diào)最顯著，且與不良預(yù)后有關(guān)。細(xì)胞實驗表明沉默AFAP1-AS1可促進(jìn)AFAP1蛋白表達(dá)，調(diào)控小GTP酶家族信號Rho/Rac通路和肌動蛋白角蛋白通路抑制肺癌細(xì)胞遷移和侵襲。AFAP1-AS1僅影響AFAP1蛋白水平的表達(dá)，對其mRNA水平的表達(dá)無影響。此外, ZHUANG Y等[14]報道AFAP1-AS1在肺腺癌組織中過表達(dá)，且其過表達(dá)與較短的DFS相關(guān)。細(xì)胞實驗表明沉默AFAP1-AS1后可抑制肺腺癌細(xì)胞增殖和侵襲，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

YIN D等[24]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在NSCLC組織中表達(dá)上調(diào)，且與腫瘤大小和TNM分期有關(guān)。Kaplan-Meier分析和log-rank 檢驗表明在NSCLC患者中AFAP1-AS1過表達(dá)預(yù)示著預(yù)后不良，單變量和多變量分析顯示AFAP1-AS1的表達(dá)水平可以作為NSCLC患者OS的獨(dú)立預(yù)測因子。體外實驗證實敲減AFAP1-AS1可抑制細(xì)胞增殖，阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期。裸鼠成瘤實驗也證實敲減AFAP1-AS1可抑制腫瘤形成。質(zhì)核分離提示AFAP1-AS1大部分存在于NSCLC細(xì)胞的細(xì)胞核中。AFAP1-AS1通過與zeste基因增強(qiáng)子同源物2(EZH2)結(jié)合，表觀沉默p21基因，從而促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖。

HE J等[25]通過高通量RNA測序發(fā)現(xiàn)在NSCLC組織中AFAP1-AS1表達(dá)明顯上調(diào)，實時熒光定量PCR也證實了AFAP1-AS1在NSCLC組織和細(xì)胞系中表達(dá)顯著升高。質(zhì)核分離和熒光原位雜交(FISH)提示AFAP1-AS1大部分存在于NSCLC細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。體外實驗發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)AFAP1-AS1明顯提高細(xì)胞遷移和侵襲能力，敲減AFAP1-AS1明顯抑制細(xì)胞遷移和侵襲能力。此外, Kaplan-Meier曲線分析顯示AFAP1高表達(dá)與NSCLC患者OS較差有關(guān); Cox回歸分析表明AFAP1的高表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌、宮頸腺癌的DFS較差有關(guān)。通過RNA測序篩選差異表達(dá)基因及生信分析發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1通過上調(diào)PPP1R13L、VASP和SPTAN1的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞侵襲，并通過下調(diào)STAT1、NF1、FBN2的表達(dá)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。AFAP1-AS1過表達(dá)促進(jìn)AFAP1在mRNA和蛋白水平的升高來促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移, AFAP1-AS1啟動子區(qū)CpG低甲基化導(dǎo)致NSCLC中AFAP1-AS1表達(dá)增加。

TANG XD等[26]發(fā)現(xiàn)在NSCLC患者外周血中AFAP1-AS1表達(dá)升高，白細(xì)胞介素-12表達(dá)下降，白細(xì)胞介素-10和γ干擾素表達(dá)升高。AFAP1-AS1異常表達(dá)與NSCLC的病理分級，TNM分期和轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。過表達(dá)AFAP1-AS1促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖，侵襲和轉(zhuǎn)移，并抑制細(xì)胞凋亡。體外實驗證實AFAP1-AS1過表達(dá)能夠激活干擾素調(diào)節(jié)因子7(IRF7)、維甲酸誘導(dǎo)基因蛋白I(RIG-I)樣受體信號通路和Bcl-2, 從而促進(jìn)NSCLC侵襲和轉(zhuǎn)移。

LI W等[27]發(fā)現(xiàn)NSCLC患者血清中AFAP1-AS1的表達(dá)水平顯著升高。血清AFAP1-AS1可以用作NSCLC患者的分子標(biāo)志物，其ROC曲線下面積為0.759，AFAP1-AS1與CYFRA21-1結(jié)合的ROC曲線下面積為0.860。血清中AFAP1-AS1過表達(dá)與NSCLC遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床預(yù)后差，腫瘤體積大相關(guān)。血清AFAP1-AS1可以作為NSCLC診斷的理想的聯(lián)合分子標(biāo)志物。這些結(jié)果表明AFAP1-AS1可能作為肺癌的致癌lncRNA和潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

2.5 卵巢癌

卵巢癌(OC)是女性生殖系統(tǒng)中第三大最普遍癌癥[28]。OC的死亡率很高，大多數(shù)患者被診斷時已為晚期[29]。YANG SL等[30]報道AFAP1-AS1在OC組織和細(xì)胞系中過表達(dá)，且其過表達(dá)與侵襲性臨床病理參數(shù)如耐藥反應(yīng)和FIGO分期相關(guān)。沉默AFAP1-AS1可抑制OC細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡。AFAP1-AS1可作為OC的一個新的促癌lncRNA和治療靶點(diǎn)。

2.6 結(jié)直腸癌

結(jié)直腸癌(CRC)是全球第三大最常見的癌癥，也是第二大癌癥致死原因[19]。雖然可以采用手術(shù)、放療、化療和靶向治療相結(jié)合的手段來改善CRC患者的預(yù)后，但CRC的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍不可避免[31-32]。通過篩查早期可治愈的CRC, 可以降低其發(fā)生率和死亡率，因此需要尋找一種新的CRC診斷和預(yù)后指標(biāo)。

研究[17]表明AFAP1-AS1在CRC組織和細(xì)胞系中呈過表達(dá)，提示不良預(yù)后。WANG F等[17]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1過表達(dá)與CRC腫瘤大小、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、較短的OS和DFS密切相關(guān)，單因素和多因素Cox回歸分析表明AFAP1-AS1是該病的獨(dú)立預(yù)后因子。細(xì)胞實驗表明沉默AFAP1-AS1可抑制CRC細(xì)胞增殖、克隆、遷移和侵襲，使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期[17, 33]。HAN X等[33]認(rèn)為AFAP1-AS1抑制E-cadherin表達(dá)和調(diào)控N-cadherin、vimentin、fibronectin和MMP-9等EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)，使CRC細(xì)胞遷移和侵襲。此外，沉默AFAP1-AS1僅調(diào)控AFAP1蛋白水平的表達(dá)，而對其mRNA水平無影響。隨后，裸鼠實驗也證實沉默AFAP1-AS1可抑制CRC細(xì)胞成瘤能力和肝轉(zhuǎn)移。

BO H等[34]從GEO數(shù)據(jù)庫和TCGA數(shù)據(jù)庫中分析lncRNA的RNA-seq數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在結(jié)腸癌(CC)組織中明顯高表達(dá)，且與CC患者較差的DFS和OS相關(guān)。體外實驗表明，敲減AFAP1-AS1顯著抑制了CC細(xì)胞的侵襲和遷移能力。敲減AFAP1-AS1, E-cadherin和ZO-1的表達(dá)升高, Vimentin、MMP9、ZEB1和β-catenin的表達(dá)抑制，說明AFAP1-AS1 參與CC的EMT過程。此外，敲減AFAP1-AS1也影響肌動蛋白-細(xì)胞角蛋白信號通路。AFAP1-AS1有潛力成為CRC一種新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

2.7 膽道癌

膽道癌(BTC)包括膽囊癌(GBC)和膽管癌(CCA)。GBC占BTC的80%～95%, 其余為CCA, CCA分為肝內(nèi)膽管癌和肝外膽管癌[35]。CCA是膽道上皮細(xì)胞中最具侵襲性和致命性的腫瘤之一。GBC是一種高度侵襲性惡性腫瘤，其5年生存率低于5%。由于無癥狀和缺乏敏感的生物標(biāo)志物，早期診斷BTC十分困難。因此，迫切需要尋找早期診斷標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)。

MA F等[36]研究發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在GBC組織和細(xì)胞系中表達(dá)顯著上調(diào)，與腫瘤大小和不良預(yù)后相關(guān)。細(xì)胞實驗表明沉默AFAP1-AS1可抑制GBC細(xì)胞增殖和侵襲，并下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Twist1和vimentin的表達(dá)以及上調(diào)E-cadherin的表達(dá)阻礙EMT進(jìn)程, AFAP1-AS1可能通過促進(jìn)EMT進(jìn)程促進(jìn)GBC細(xì)胞侵襲。

SHI X等[37]研究發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在CCA組織樣本和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，沉默AFAP1-AS1會抑制CCA細(xì)胞增殖、克隆，誘導(dǎo)G0/G1期阻滯和抑制S-G2/M期轉(zhuǎn)化。此外，沉默AFAP1-AS1可促進(jìn)AFAP1的表達(dá)，使應(yīng)力纖維完整性缺失，導(dǎo)致CCA細(xì)胞的遷移和侵襲能力減弱。LU X等[38]研究發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1過表達(dá)與CCA腫瘤大小、血管侵襲、TNM分期和較短的OS相關(guān)。細(xì)胞實驗表明AFAP1-AS1通過上調(diào)C-Myc和CYCLIN D1蛋白表達(dá)促進(jìn)CCA細(xì)胞增殖，通過上調(diào)MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移。此外，裸鼠實驗也證實沉默AFAP1-AS1可抑制CCA細(xì)胞的成瘤能力。

這些結(jié)果表明AFAP1-AS1在BTC中發(fā)揮致癌作用，可能成為BTC一種有效的診斷和治療靶點(diǎn)。

2.8 胃癌

胃癌(GC)是世界上第四大最常見的癌癥，也是第二大癌癥致死原因[39]。晚期GC患者預(yù)后很差, 5年生存率極低[40]。因此，迫切需要尋找一種新的GC診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物。

GUO JQ等[16]報道AFAP1-AS1在GC組織和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞實驗表明AFAP1-AS1可調(diào)控PTEN/p-AKT通路促進(jìn)GC細(xì)胞增殖，沉默AFAP1-AS1后p-AKT蛋白表達(dá)降低、PTEN蛋白表達(dá)升高。此外，沉默AFAP1-AS1可抑制Bcl-2表達(dá)和調(diào)控PARP、caspase-3、caspase-9和Bax的表達(dá)促進(jìn)GC細(xì)胞凋亡。

FENG Y等[41]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在GC組織和細(xì)胞中表達(dá)顯著上升，且AFAP1-AS1的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和更短的OS成正相關(guān)。多變量回歸分析顯示AFAP1-AS1表達(dá)水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期是GC患者OS的獨(dú)立預(yù)后因子。敲減AFAP1-AS1顯著抑制細(xì)胞增殖，EMT標(biāo)志物E-cadherin上調(diào)和vimentin下調(diào)，進(jìn)而抑制細(xì)胞侵襲能力。這些結(jié)論表明AFAP1-AS1可作為GC的一個潛在治療靶點(diǎn)。

YE F等[42]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1 在GC組織中表達(dá)升高，并且與腫瘤大小，臨床分期和腫瘤分化明顯相關(guān)。多變量回歸分析提示AFAP1-AS1表達(dá)水平可作為GC患者的獨(dú)立預(yù)后因子。體外實驗表明敲減AFAP1-AS1可顯著抑制GC細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力。裸鼠成瘤實驗表明敲減AFAP1-AS1可抑制腫瘤在體內(nèi)生長。AFAP1-AS1可作為GC的預(yù)后因子和治療靶點(diǎn)。

ZHAO H等[43]通過檢測80對原發(fā)性GC組織和鄰近正常組織，發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在GC組織中表達(dá)顯著上升，且與TNM分期(Ⅲ期或Ⅳ期)和更短的生存時間相關(guān)。ROC曲線分析表明AFAP1-AS1在截斷值為0.504時，能區(qū)分GC組織和鄰近正常組織，曲線下面積(AUC)為 0.880, 敏感性為81.25%, 特異性83.75%。體外實驗證實，敲減AFAP1-AS1可顯著抑制GC細(xì)胞增殖和侵襲能力，上調(diào)E-cadherin蛋白表達(dá)水平、下調(diào)N-cadherin和vimentin 蛋白表達(dá)水平，抑制GC細(xì)胞轉(zhuǎn)移[43]。AFAP1-AS1可作為GC診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物。

2.9 肝細(xì)胞癌

肝細(xì)胞癌(HCC)是全球第六大最常見的癌癥，也是第三大癌癥致死原因[44]。手術(shù)切除和肝移植是治療HCC的主要方法，但由于HCC患者在診斷時已處于晚期，其5年生存率較低[45]。因此，尋找與腫瘤發(fā)生相關(guān)的基因?qū)τ贖CC患者的診斷、靶向治療、疾病監(jiān)測和臨床結(jié)局具有重要意義。

ZHANG JY等[10]研究發(fā)現(xiàn)HCC中AFAP1-AS1表達(dá)上調(diào)，且與病理分期、淋巴-血管侵襲和較短的OS密切相關(guān)，多因素分析提示AFAP1-AS1可作為HCC的獨(dú)立預(yù)后因子。LU X等[11]研究也證實AFAP1-AS1在HCC組織中高表達(dá)，且與腫瘤大小、TNM分期、血管侵襲和較短的OS和DFS相關(guān)。細(xì)胞實驗表明沉默AFAP1-AS1可通過抑制RhoA/Rac2信號通路和調(diào)控Bcl-2、Bax、MMP-9、Ki67的表達(dá)，抑制HCC細(xì)胞增殖和侵襲，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞周期阻滯于S期。此外，裸鼠實驗也證實沉默AFAP1-AS1可顯著抑制HCC細(xì)胞的成瘤能力[10-11]。AFAP1-AS1有潛力成為HCC新的治療靶點(diǎn)。

2.10 乳腺癌

ZHANG K等[46]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在三陰性乳腺癌(TNBC)組織細(xì)胞中高表達(dá)，并且與TNBC的不良預(yù)后相關(guān)。體外實驗表明上調(diào)AFAP1-AS1促進(jìn)TNBC細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，抑制細(xì)胞凋亡; 體內(nèi)實驗表明, AFAP1-AS1過表達(dá)促進(jìn)腫瘤生長。上調(diào)AFAP1-AS1通過激活Wnt/β-catenin通路，使TNBC中C-myc和EMT相關(guān)基因高表達(dá)，促進(jìn)腫瘤發(fā)生和細(xì)胞侵襲。AFAP1-AS1可作為TNBC的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志物和有效治療靶點(diǎn)。

DIANATPOUR A等[47]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在乳腺癌細(xì)胞組織中表達(dá)顯著上升，其反義蛋白編碼基因AFAP1在腫瘤組織和鄰近的非癌組織(ANCTs)的表達(dá)水平無明顯區(qū)別。在腫瘤組織或ANCTs中, AFAP1-AS1和AFAP1的表達(dá)水平無顯著相關(guān)性，并且它們的表達(dá)水平與乳腺癌患者的臨床特征無顯著相關(guān)性，但AFAP1-AS1、AFAP1在Ki-67陰性腫瘤組織中表達(dá)顯著下調(diào)。

MA D等[48]發(fā)現(xiàn) AFAP1-AS1在乳腺癌組織細(xì)胞中上調(diào)并且與乳腺癌的惡性程度相關(guān), AFAP1-AS1高表達(dá)預(yù)示著不良預(yù)后。體外實驗發(fā)現(xiàn)，敲減AFAP1-AS1能抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，但不影響AFAP1的表達(dá)和肌動蛋白絲的完整性。AFAP1-AS1可能參與乳腺癌的發(fā)病過程，并有潛力成為一種生物標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)。

2.11 舌鱗狀細(xì)胞癌

WANG ZY等[49]研究發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在舌鱗狀細(xì)胞癌(TSCC)組織中高表達(dá)，且與腫瘤分化、T分級、臨床分期、浸潤深度、復(fù)發(fā)和較短的OS密切相關(guān)。敲減AFAP1-AS1可顯著抑制TSCC細(xì)胞的增殖并使細(xì)胞周期停滯于G0/G1期，部分抑制TSCC細(xì)胞的遷移和侵襲。體外實驗證實，在TSCC細(xì)胞中敲減AFAP1-AS1, 可降低Wnt/β-catenin通路的活性并抑制EMT相關(guān)基因(SLUG、SNAIL1、VIM、CADN、ZEB1、ZEB2、SMAD2和TWIST1)的表達(dá)。裸鼠成瘤實驗發(fā)現(xiàn)，敲減AFAP1-AS1可抑制腫瘤生長和EMT相關(guān)基因(SLUG、SNIAL1、VIM、ZEB1、NANOG、SMAD2、NESTIN 和 SOX2)的表達(dá)。AFAP1-AS1有潛力成為TSCC的新的治療靶點(diǎn)。

2.12 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤

HAO F等[50]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)升高，并與腫瘤大小、脈絡(luò)膜浸潤和視神經(jīng)浸潤有關(guān)。此外, AFAP1-AS1高表達(dá)是視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者的一個獨(dú)立的不良預(yù)后因素。體外實驗表明，下調(diào)AFAP1-AS1可抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，阻斷細(xì)胞周期于G0/G1期。AFAP1-AS1在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中與致癌密切相關(guān)。

2.13 甲狀腺癌

DAI W等[51]采用實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在甲狀腺癌組織中表達(dá)增加，并與患者較短的OS相關(guān)。MTT比色法檢測表明，下調(diào)AFAP1-AS1可抑制甲狀腺癌細(xì)胞生長。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果證實，敲減AFAP1-AS1可誘導(dǎo)甲狀腺癌細(xì)胞凋亡。Transwell細(xì)胞體外侵襲實驗顯示，下調(diào)AFAP1-AS1可增加E-cadherin以及降低Vimentin、N-cadherin的表達(dá)來抑制甲狀腺癌細(xì)胞遷移。AFAP1-AS1可能成為甲狀腺癌的治療靶點(diǎn)。

2.14 膠質(zhì)瘤

WANG Y等[52]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，其表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤分級及KPS評分有關(guān)，并且AFAP1-AS1高表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者預(yù)后較差。敲減AFAP1-AS1后，膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲能力明顯下降，侵襲相關(guān)蛋白MMP2和MMP9的表達(dá)也明顯下降。AFAP1-AS1可以作為膠質(zhì)瘤惡性程度和預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子，也可作為潛在的治療靶點(diǎn)。

2.15 骨肉瘤

LI R等[53]發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1在骨肉瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)，其表達(dá)水平與骨肉瘤患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。體外實驗表明，敲減AFAP1-AS1可顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲; 體內(nèi)移植瘤實驗顯示，敲減AFAP1-AS1可抑制腫瘤生長。生信分析和熒光素酶報告基因檢測發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1作為分子海綿抑制miR-4695-5p的表達(dá)水平，并且miR-4695-5p靶向Wnt/β-catenin信號通路的核心效應(yīng)因子轉(zhuǎn)錄因子4(TCF4)。過表達(dá)AFAP1-AS1可抑制miR-4695-5p的表達(dá)，而過表達(dá)miR-4695-5p可降低TCF4的表達(dá)并且抑制Wnt/β-catenin信號通路的活性。TCF4表達(dá)的恢復(fù)逆轉(zhuǎn)了AFAP1-AS1敲低或miR-4695-5p過表達(dá)對骨肉瘤細(xì)胞的影響。AFAP1-AS1/miR-4695-5p/TCF4-β-catenin軸在骨肉瘤進(jìn)展過程中發(fā)揮重要作用[53]。

3 結(jié) 論

長鏈非編碼RNA AFAP1-AS1作為一個新發(fā)現(xiàn)的促癌lncRNA, 在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。AFAP1-AS1在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，包括食管癌、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌、膽道癌、胃癌、肝細(xì)胞癌、乳腺癌、舌鱗狀細(xì)胞癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、膠質(zhì)瘤和骨肉瘤等。研究表明AFAP1-AS1與惡性腫瘤的臨床病理特征密切相關(guān)，包括腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期以及較短的生存期等。細(xì)胞功能實驗表明AFAP1-AS1可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，抑制細(xì)胞凋亡。一些與AFAP1-AS1相關(guān)的基因和信號通路已被闡述，如EMT相關(guān)基因、Rho/Rac通路、PTEN/p-AKT通路和Wnt/β-catenin通路等，但其具體調(diào)控機(jī)制尚未闡明。目前對AFAP1-AS1的研究處在早期階段，還需深入，AFAP1-AS1與miRNA、mRNA或蛋白的直接相互作用應(yīng)是今后的研究重點(diǎn)。