董霞 許興路 彭靜 賈浩楠 張辰蔚 王麗茹

復(fù)發(fā)性阿弗他口炎是臨床常見(jiàn)的口腔疾病，且其在口腔黏膜疾病的發(fā)病率中占據(jù)首位，其誘因較多，很多情況都會(huì)引起該疾病，如精神緊張、情緒不佳、消化不良、感冒等好發(fā)于唇、頰、舌緣等，在黏膜的任何部位均能出現(xiàn)[1-3]。發(fā)病年齡一般在10～30歲，女性較多，一年四季均能發(fā)生，具有周期性、復(fù)發(fā)性及自限性等特點(diǎn)。復(fù)發(fā)性阿弗他口炎屬于結(jié)締組織病中的系統(tǒng)性血管炎，為變異性血管炎，可累及大、中、小靜脈和動(dòng)脈，除皮膚黏膜外可累及消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、心血管、呼吸道、泌尿系統(tǒng)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡[4]。對(duì)于反復(fù)口腔潰瘍而高度懷疑復(fù)發(fā)性阿弗他口炎的患者因不滿足診斷標(biāo)準(zhǔn)而無(wú)法明確診斷，并且該病沒(méi)有特異的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)和實(shí)驗(yàn)室特異抗體，大部分患者從出現(xiàn)臨床癥狀到明確診斷3～4年，因此該病的診斷比較團(tuán)難，從而影響早期的治療，部分患者病情反復(fù)導(dǎo)致出現(xiàn)嚴(yán)重的內(nèi)臟損害或不可逆的視力障礙，因此特異的實(shí)驗(yàn)室抗體檢測(cè)對(duì)于疾病的早期診斷意義重大。筆者總結(jié)國(guó)內(nèi)外近些年的相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)抗小腸杯狀細(xì)胞抗體（antibody to goblet epithelium of small intestine，GBA）可用于該病的早期診斷，現(xiàn)總結(jié)研究具體情況并匯報(bào)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2018年2月—2019年2月本醫(yī)院收治的復(fù)發(fā)性阿弗他口炎患者102例作為研究組，其中男30例，女72例，年齡10～30歲，平均年齡（20±10）歲。同時(shí)選擇健康志愿者102例作為對(duì)照組，其中男32例，女70例，年齡在10～29歲，平均年齡（20±9）歲。本研究經(jīng)研究對(duì)象同意，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

目前的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用的是1990年白塞病的國(guó)際分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[5]（敏感性為81.2%，特異性為95.9%），有下述5項(xiàng)中至少3項(xiàng)陽(yáng)性者：（1）反復(fù)口腔潰瘍；（2）反復(fù)外陰潰瘍；（3）皮膚病變；（4）眼病變；（5）針刺試驗(yàn)陽(yáng)性。

1.3 方法

采用ELISA方法測(cè)定GBA-IgG型和GBA-IgA型。具體措施如下：（1）將加樣板放置于泡沫板上，在加樣板的所有反應(yīng)區(qū)位置均滴加稀釋后的血清，劑量為25 U，避免出現(xiàn)氣泡。（2）將載片放置于加樣板凹槽中，保證其沒(méi)有生物薄片的一面朝上，其反應(yīng)會(huì)馬上開(kāi)始。需保證所有樣品均接觸生物玻片，同時(shí)樣品與樣品不能接觸。放在室溫中溫育半個(gè)小時(shí)，即18～25℃。（3）將磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）吐溫緩沖液放置于燒杯中，對(duì)玻片進(jìn)行流水快速?zèng)_洗，然后馬上將其放置到磷酸緩沖鹽溶液吐溫緩沖液中進(jìn)行浸泡超過(guò)5 min，操作旋轉(zhuǎn)搖床開(kāi)始震蕩處理。（4）于加樣板反應(yīng)區(qū)位置滴加熒光二抗，共計(jì)20 mL，操作連續(xù)加樣器將全部熒光二抗滴加完，可在前一個(gè)加樣板進(jìn)行溫育期間將熒光二抗滴加到下一個(gè)加樣板上，以此縮短操作時(shí)間。（5）將載片從洗杯中取出，使用吸水紙將載片邊緣及背面的水分擦干，保證該操作于5 s中完成，然后馬上將其放置到加樣板凹槽中，不可對(duì)反應(yīng)區(qū)間隙進(jìn)行擦拭，以免基質(zhì)遭到破壞。在確定液滴和生物玻片良好接觸后可對(duì)下一個(gè)玻片進(jìn)行上述操作，在室溫中進(jìn)行0.5 h溫育，期間注意載片被陽(yáng)光直射。（6）將磷酸緩沖鹽溶液吐溫緩沖液放置于燒杯中，對(duì)玻片進(jìn)行流水快速?zèng)_洗，然后馬上將其放置到磷酸緩沖鹽溶液吐溫緩沖液中進(jìn)行浸泡超過(guò)5 min，操作旋轉(zhuǎn)搖床開(kāi)始震蕩處理。（7）將蓋玻片放置于泡沫板凹槽內(nèi)，于蓋玻片上滴加甘油/磷酸緩沖鹽溶液，一個(gè)反應(yīng)區(qū)的滴加劑量為10 μL左右。將載片從洗杯中取出，使用吸水紙將載片邊緣及背面的水分擦干，不可對(duì)反應(yīng)區(qū)間隙進(jìn)行擦拭，以免基質(zhì)遭到破壞。將載片放置于蓋薄片中，保證其沒(méi)有生物玻片的一面朝上，馬上進(jìn)行查看，同時(shí)對(duì)蓋玻片進(jìn)行調(diào)整，使其嵌入進(jìn)載片凹槽。（8）使用顯微鏡對(duì)熒光模型進(jìn)行觀察。

1.4 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn)

測(cè)定GBA-IgG型和GBA-IgA型陽(yáng)性率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)對(duì)比以SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，（±s）為計(jì)量資料的表示形式，通過(guò)t檢驗(yàn)；率（%）為計(jì)數(shù)資料的表示形式，通過(guò)χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組102例復(fù)發(fā)性阿弗他口炎患者中GBA-IgG型陽(yáng)性患者45例（44.12%），GBA-IgA型陽(yáng)性56例（54.90%）；對(duì)照組102例健康志愿者中GBA-IgG型陽(yáng)性7例（6.86%），GBA-IgA型陽(yáng)性8例（7.84%）。研究組GBA-IgG型與GBAIgA型陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 GBA-IgG型和GBA-IgA型陽(yáng)性情況比較[例（%）]

3 討論

貝赫切特?。˙ehcet's disease，BD）又名白塞病，其屬于慢性疾病，其臨床特征為皮膚損害、外陰潰瘍、口腔潰瘍、眼炎等，且會(huì)對(duì)患者的多個(gè)系統(tǒng)造成影響[6-7]。本病有較強(qiáng)的地區(qū)分布：又稱(chēng)絲綢之路病，因?yàn)樵诮z綢之路上的國(guó)家多發(fā)，東亞、中東、地中海發(fā)病率高，我國(guó)北方高于南方。筆者總結(jié)國(guó)內(nèi)外近些年關(guān)于白塞病的相關(guān)研究[8-9]，發(fā)現(xiàn)黏膜相關(guān)抗體在國(guó)外已經(jīng)用于白塞病的早期診斷的報(bào)告，相關(guān)研究證實(shí)其在白塞病的診斷中具有特異性，可用于白塞病的診斷。黏膜相關(guān)抗體包括抗釀酒酵母抗體（anti-saccharomces cerevisiae antibody，ASCA）、GBA、抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（antineutrophil cytoplasmic antibody，p-ANCA）。ASCA最早發(fā)現(xiàn)于炎性腸病患者的血清中，后來(lái)在臨床中用于黏膜相關(guān)疾病的診斷，尤其在炎性腸病、原發(fā)性硬化性膽管炎等疾病的診治中已開(kāi)展，省內(nèi)、國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道ASCA在貝赫切特病中的應(yīng)用[10]。在臨床上開(kāi)展黏膜相關(guān)抗體應(yīng)用于貝赫切特病的診治應(yīng)用部分患者的臨床診斷，得到了陽(yáng)性結(jié)果，提示該抗體在我國(guó)白塞病患者具有診斷意義。因此對(duì)于臨床標(biāo)準(zhǔn)尚不符合白塞病的患者，ASCA抗體陽(yáng)性有利于復(fù)發(fā)性阿氟他口炎的早期診斷，從而指導(dǎo)臨床治療。

GBA被認(rèn)為是潰瘍性結(jié)腸炎的特異性抗體，在前期的臨床研究中發(fā)現(xiàn)在復(fù)發(fā)性阿氟他口炎、結(jié)節(jié)性紅斑、白塞病、自身免疫性肝炎等多種自身免性疾病中GBA均有表達(dá)，可見(jiàn)GBA-IgG型和GBA-IgA型陽(yáng)性，關(guān)于兩種類(lèi)型的抗體表達(dá)在相關(guān)疾病中的意義需進(jìn)一步研究[11-13]。

本研究表明，研究組中GBA-IgG型陽(yáng)性45例，GBA-IgA型陽(yáng)性56例，陽(yáng)性率分別為44.12%、54.90%。對(duì)照組中GBA-IgG型陽(yáng)性7例，GBA-IgA型陽(yáng)性8例，陽(yáng)性率分別為6.86%、7.84%。研究組GBA-IgG型、GBA-IgA型陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，抗小腸杯狀細(xì)胞抗體可用復(fù)發(fā)性阿弗他口炎患者的早期診斷，尤其是對(duì)于存在黏膜損傷的患者更加有意義。本研究的樣本量不足，在擴(kuò)大樣本量后尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。