馬 麗 張繼紅 閆 昊 張 睿

（新疆維吾爾自治區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊 830000）

1 材料

動物SPF級、雄性 SD 獸體，6～7周齡，體重 200～250g，購自浙江維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（浙）2019-0001。藥品與試劑 藥物乳狀注射液，規(guī)格：每支100mg/10ml，批號：201905091，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20010368，西安立邦制藥有限公司生產(chǎn)；脂肪乳注射液（C14～24），規(guī)格：500ml：50g（大豆油）：6g（卵磷脂），批號：80MM028。

2 方法

2.1 實驗動物分組及處理

選擇45只SD獸體，將其隨機分為對照組與低、高劑量實驗組，各15只。對照組獸體腹腔注射脂肪乳注射液（C14～24）；低、高劑量實驗組分別腹腔注射100，300mg·kg-1藥物注射液（10mg·ml-1）。整個實驗過程中密切觀察獸體呼吸情況并記錄。

2.2 以TUNEL法檢測獸體海馬神經(jīng)元凋亡情況

海馬組織采集與石蠟切片制作同2.3，取海馬組織石蠟切片，按照TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書進行操作。每個標(biāo)本隨機選擇3個視野，細(xì)胞核染為棕黃色為凋亡細(xì)胞，于光學(xué)顯微鏡下觀察并計數(shù)凋亡陽性細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞凋亡指數(shù)=陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

2.3 以高效液相色譜法測定海馬組織Glu和GABA含量

海馬組織采集同2.3，參照文獻進行，檢測樣品中Glu和GABA濃度。Glu和GABA含量（μg·g-1）=[樣品濃度（μg·ml-1）×樣品溶解體積（ml）]/樣品重量（g）。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料用x珋±s表示，多組間比較用單因素方差分析，符合正態(tài)分布而且方差齊時，2組間數(shù)據(jù)采用Dunnett＇st檢驗；不符合正態(tài)分布時，用秩和檢驗分析。計數(shù)資料用率（%）表示，用χ2檢驗比較。

4 結(jié)果

4.1 逃逸潛伏期比較

整個實驗過程中密切觀察獸體呼吸情況，其中低、高劑量實驗組分別有1，3只獸體死亡，對照組無獸體死亡。定位航行實驗第1～4天，3組獸體的逃逸潛伏期均逐漸縮短。與對照組比較，低、高劑量實驗組獸體在1～4d的逃逸潛伏期均明顯延長，且高劑量實驗組長于低劑量實驗組（均P＜0.05）。

4.2 空間探索實驗比較

對照組與低、高劑量實驗組獸體穿越原平臺的次數(shù)分別為（5.93±2.48），（3.24±1.57），（1.06±0.23）次；空間探索時間分別為（32.42±5.63），（23.51±4.48），（19.86±4.73）s。與對照組比較，低、高劑量實驗組獸體穿越原平臺的次數(shù)減少，且高劑量實驗組少于低劑量實驗組；空間探索時間縮短，且高劑量實驗組短于低劑量實驗組（均P＜0.05）。

4.3 各組獸體海馬組織病理學(xué)變化

對照組獸體海馬神經(jīng)元形態(tài)正常，排列緊密、整齊；低、高劑量實驗組獸體海馬神經(jīng)元形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂、疏松，胞間距較大，且胞核固縮或碎裂，深染。上述海馬神經(jīng)元的異常現(xiàn)象以高劑量實驗組最明顯。

4.4 各組獸體海馬神經(jīng)元凋亡情況

對照組與低、高劑量實驗組獸體海馬神經(jīng)元的凋亡指數(shù)分別為（18.21±3.42）%，（37.34±6.16）%，（51.56±4.37）%。與對照組比較，低、高劑量實驗組獸體海馬神經(jīng)元的凋亡指數(shù)明顯升高，且高劑量實驗組高于低劑量實驗組（均P＜0.05）。

5 討論

通過化學(xué)麻醉技術(shù)對獸體獸體進行有效的殘留麻醉，再與相關(guān)技術(shù)質(zhì)量標(biāo)注和管理規(guī)范要求相對比，保證其處理結(jié)果和應(yīng)用模型符合預(yù)期。本文通過對獸體獸體殘留麻醉中化學(xué)麻醉技術(shù)起到的作用和實際的應(yīng)用方式進行客觀分析，對于今后麻醉技術(shù)的發(fā)展具有一定的參考作用。藥物因具有起效快、誘導(dǎo)平穩(wěn)、蘇醒快且恢復(fù)完善等優(yōu)點而作為臨床常用的鎮(zhèn)靜、麻醉藥物，但其使用后可增加認(rèn)知功能障礙的發(fā)生風(fēng)險。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，低、高劑量實驗組獸體在1～4d的逃逸潛伏期均明顯延長；穿越原平臺的次數(shù)減少，空間探索時間縮短，同時海馬神經(jīng)元的凋亡指數(shù)升高，且以上指標(biāo)以高劑量實驗組的變化最明顯，表明藥物可導(dǎo)致獸體空間學(xué)習(xí)、記憶能力降低，促進海馬神經(jīng)元凋亡，從而損傷神經(jīng)功能，導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙。產(chǎn)生抑制性突觸后電位，抑制長時程增強，故對學(xué)習(xí)記憶的形成具有抑制作用。本研究結(jié)果顯示，低、高劑量實驗組獸體海馬組織Glu含量與Glu/GABA明顯降低，GABA含量升高，提示藥物可降低海馬組織Glu含量，而升高GABA含量，使Glu/GABA下降，從而損傷學(xué)習(xí)、記憶能力，導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相應(yīng)的麻醉技術(shù)也越來越精準(zhǔn)和有效，現(xiàn)代化的技術(shù)模型已經(jīng)逐漸得到完善，進入了現(xiàn)實的應(yīng)用階段。通過對色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)以及超臨界流體色譜技術(shù)的良好運用，可以將各種麻醉手段實現(xiàn)全面的升級和優(yōu)化，對麻醉的靈敏度以及整體的技術(shù)提升。