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        胸腺細胞選擇相關高遷移率族蛋白在蕈樣肉芽腫患者中的表達情況及臨床意義

        2020-12-26 01:49:19王艷云姚麗王珊珊
        癌癥進展 2020年21期
        關鍵詞:斑片斑塊陽性

        王艷云,姚麗,王珊珊

        鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院皮膚科,鄭州 450052

        蕈樣肉芽腫(mycosis fungoides,MF)是臨床常見的皮膚惡性腫瘤,占所有皮膚腫瘤的50%[1]。MF分為斑片期、斑塊期和腫瘤期3個時期[2]。斑塊期和腫瘤期在臨床上較容易被明確診斷,因為這兩個時期的患者表現(xiàn)及組織病理學特征具有顯著特點,臨床診斷率高。而斑片期患者無顯著臨床癥狀,病理診斷結(jié)果也無特異性[3-4]。臨床醫(yī)師對MF早期的誤診率較高,斑片期腫瘤細胞數(shù)量較少,容易與其他皮膚疾病混淆,且尚無特異性診斷指標,對MF的早期診斷是一大難題。胸腺細胞選擇相關高遷移率族蛋白(thymocyte selection associated high mobility group box protein,TOX)是一種高遷移率家族蛋白,其作用是對機體的染色體進行修飾[5]。研究報道,TOX幾乎不在正常皮膚中表達,而在CD4+CD8+腫瘤細胞中高表達[6-7]。推測TOX也許能夠作為MF的診斷指標。本研究采用免疫組織化學染色法檢測TOX蛋白在MF和良性炎癥性皮膚病患者中的表達情況,旨在探討TOX蛋白在MF患者中的表達及臨床意義,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2014年1月至2020年1月于鄭州大學附屬鄭州中心醫(yī)院就診的MF患者。納入標準:①經(jīng)病理學檢查確診為MF;②年齡>18歲;③無其他皮膚疾??;④臨床資料完整。排除標準:①合并其他惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、結(jié)締組織疾病等嚴重疾?。虎谌朐呵坝邢嚓P治療史。依據(jù)納入和排除標準,本研究共納入62例MF患者作為觀察組,其中斑片期25例,斑塊期24例,腫瘤期13例。斑片期患者中,男18例,女7例;平均年齡為(44.10±8.12)歲。斑塊期患者中,男16例,女8例;平均年齡為(43.05±9.50)歲。腫瘤期患者中,男9例,女4例;平均年齡為(43.65±9.11)歲。斑片期、斑塊期、腫瘤期患者的性別和年齡比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。選取同期收治的良性炎癥性皮膚病患者30例作為對照組,其中尋常型銀屑病16例,慢性濕疹14例。觀察組中,男43例,女19例;平均年齡為(43.35±7.88)歲。對照組中,男 17例,女 13例;平均年齡為(41.18±8.20)歲。兩組患者的性別和年齡比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

        1.2 檢測方法

        采用免疫組織化學染色法檢測兩組患者中TOX蛋白的表達情況。收集兩組患者的皮膚組織,常規(guī)制作石蠟組織切片。常規(guī)脫蠟和脫水,加入3%過氧化氫溶液,作用20 min以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性,加入0.01 mol/L、pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復,滴加50 μl兔抗人TOX多克隆抗體(稀釋比例為1∶100),于4℃搖床上孵育過夜,第2天洗板,再加入50 μl生物素化的羊抗兔二抗,室溫下孵育1 h。加入辣根過氧化物酶標記的抗生蛋白鏈菌素,室溫下孵育1 h;配制并加入0.04%的二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)溶液,顯色5 min,并在顯微鏡下控制反應時間。依次進行蘇木素復染、梯度乙醇脫水和中性樹膠封片。采用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為空白對照。

        1.3 評價標準

        由兩名病理科醫(yī)師采用雙盲法判定染色結(jié)果。TOX蛋白陽性表達位于細胞核中,呈棕黃色或棕褐色顆粒。隨機觀察5個400倍視野,每個視野選擇100個細胞,陽性細胞所占比例<10%為陰性,≥10%為陽性[8]。

        1.4 統(tǒng)計學方法

        采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,兩組間比較采用t檢驗,多組間比較采用多因素方差分析;計數(shù)資料以例數(shù)和率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組患者中TOX蛋白表達情況的比較

        觀察組患者中TOX蛋白的陽性表達率為91.94%(57/62),明顯高于對照組的30.00%(9/30),差異有統(tǒng)計學意義(χ2=38.253,P<0.01)。

        2.2 不同分期MF患者中TOX蛋白表達情況的比較

        斑片期、斑塊期、腫瘤期MF患者中TOX蛋白的陽性表達率分別為80.00%(20/25)、100%(24/24)、100%(13/13),差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.298,P<0.05);但兩兩比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

        3 討論

        TOX基因編碼TOX蛋白,它是一種由一個氨基酸組成的DNA結(jié)合蛋白,它與雙鏈DNA結(jié)合并使DNA解旋,充當轉(zhuǎn)錄因子,參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[9]。TOX蛋白在所有脊椎動物中的結(jié)構(gòu)都非常相似,并與多種腫瘤有關,如肺癌、乳腺癌、淋巴瘤和白血病[10-11]。TOX蛋白包含一個DNA結(jié)合域,該結(jié)構(gòu)域可以通過修飾局部染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)各種蛋白質(zhì)復合物來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄。盡管確切的機制尚不清楚,但研究表明TOX在胸腺細胞中的表達水平很高,離開胸腺并進入周圍組織后,成熟的CD4+T細胞中TOX的表達水平很低[12-13]。

        正常情況下,TOX蛋白在皮膚組織中不表達或表達水平很低,主要在淋巴組織和胃腸道腺細胞中表達[14]。胸腺中的TOX主要抑制CD4+前體細胞的降解,外周淋巴瘤中TOX mRNA和蛋白很少表達。研究表明,TOX基因在許多腫瘤中異常表達,如肺癌、乳腺癌和白血病[15-16]。另有研究表明,相對于良性炎癥性皮膚病患者,MF患者中TOX基因呈高表達,并且隨著疾病的發(fā)展,TOX基因的表達水平越來越高[17]。表明TOX基因異常表達可能與MF有關,但該研究結(jié)果仍有許多爭議。

        本研究探討了TOX蛋白在MF患者中的表達情況及臨床意義,結(jié)果表明,觀察組中TOX蛋白的陽性表達率明顯高于對照組,說明TOX可能參與了MF的發(fā)生和發(fā)展。有研究表明,TOX的過表達刺激了蛋白激酶 B(protein kinase B,PKB,又稱AKT)的磷酸化,而AKT抑制劑能夠抑制TOX引起的增殖促進作用[18]。推測TOX可能通過激活磷脂酰肌醇3-羥激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase,PI3K)/AKT信號通路來促進細胞增殖和遷移。以上結(jié)果證實了TOX在MF患者中的過表達以及TOX與MF疾病進展的關系。此外,TOX可能成為MF診斷及治療的重點靶基因。據(jù)報道,TOX可以誘導Myla細胞的增殖和遷移,通過干擾小RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制TOX還可減少Myla細胞的增殖和遷移[19]。

        DNA異常甲基化時常導致腫瘤細胞增殖,誘發(fā)腫瘤產(chǎn)生,而且在腫瘤細胞中會進一步出現(xiàn)抑癌基因和凋亡基因的表達異常。在基因突變及抑癌基因失活中,DNA異常甲基化發(fā)揮了很大的作用。異常甲基化決定多種類型腫瘤的表觀遺傳特點。研究表明,TOX基因的甲基化水平在肺癌和乳腺癌患者中顯著增加,基因決定蛋白表達,TOX蛋白通過促進細胞增殖和遷移而在MF中發(fā)揮致病作用[20]。在某些腫瘤患者中,出現(xiàn)TOX基因缺失的現(xiàn)象,基因缺失可使抑癌基因失活,從而使其不能對相關基因進行調(diào)節(jié),影響了細胞的增殖等過程,破壞了細胞的穩(wěn)定性。本研究結(jié)果顯示,TOX蛋白在MF患者中的表達水平較高,說明TOX蛋白的表達出現(xiàn)了異常。

        本研究結(jié)果還顯示,斑片期MF患者中TOX蛋白的陽性表達率為80.00%,低于斑塊期和腫瘤期MF患者的100%,但差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。分析原因可能是病例數(shù)較少。TOX蛋白在良性炎癥性皮膚病組織中也出現(xiàn)陽性,說明TOX蛋白并不是腫瘤細胞特有的,可以推斷陽性細胞的來源是淋巴細胞。然而某些炎癥組織中TOX蛋白低表達和腫瘤細胞中TOX蛋白高表達的機制有待于進一步探討。

        目前對于MF的診斷尚無特異性方法,臨床中面臨許多困難,TOX蛋白在一些腫瘤患者的組織中呈高表達。本研究通過免疫組織化學染色法檢測TOX蛋白的表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TOX蛋白在MF患者中的表達水平較高,為臨床診斷提供了參考,但缺乏有關其作用機制的研究,仍需進一步探討。

        綜上所述,TOX蛋白在MF患者中的表達水平較高,可能在疾病進展中具有一定作用,值得進一步研究。

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