田 偉，高愛紅

近年來，隨著胃癌診治水平逐步提高，早期胃癌篩查率日益增高。 外科手術(shù)是早期胃癌患者有效選擇，但術(shù)前較難判斷患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險，影響患者預(yù)后預(yù)測［1］。 研究表明早期胃癌預(yù)后良好，5 年生存率高于90%，而存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者生存率常低于70%［2］，因此早期準(zhǔn)確判斷胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況對改善患者預(yù)后至為重要。 近期國內(nèi)外學(xué)者一致認為長鏈非編碼RNA（lncRNA）在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和凋亡中發(fā)揮重要作用［3?4］，其中l(wèi)n?cRNAAK093987 目前廣泛應(yīng)用于各類腫瘤研究中。研究證實lncRNAAK093987 在小細胞肺癌組織中呈高表達，且lncRNAAK093987 參與非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展，有望成為肺癌患者預(yù)后評估的有效分子標(biāo)志物［5］。 另有研究表明lncRNAAK093987 在結(jié)腸癌發(fā)病、病情進展中起重要作用［6］。 國內(nèi)關(guān)于ln?cRNAAK093987 表達與胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究尚處于初探階段，為此本研究收集78 例胃癌患者臨床資料，旨在探討lncRNAAK093987 與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017 年1 月—2018 年1 月本院收治的78 例胃癌行手術(shù)治療患者臨床資料。 納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)術(shù)后病理結(jié)果證實為胃癌；臨床資料完整；存在外科手術(shù)治療適應(yīng)證；術(shù)前未接受放化療等輔助治療。 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他類型惡性腫瘤；嚴重并發(fā)癥；合并高血壓病及重要臟器功能損傷；有器官移植史。 78 例均收集癌組織及癌旁（距癌灶邊緣≥5 cm）組織標(biāo)本。 78 例中男46 例，女32 例；年齡49～75（60．09±6．11）歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12 例；病程12～37（25．03±3．01）個月；病理類型：鱗癌53 例，腺癌25 例；分化程度：高分化13 例，中分化38 例，低分化27 例；TNM 分期：I 期12 例，Ⅱ期39 例，Ⅲ期15例，Ⅳ期12 例。1.2研究方法

1.2.1胃癌組織及癌旁組織中l(wèi)ncRNAAK093987表達量：采用實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測ln?cRNAAK093987 表達，具體步驟：RNA 提取→逆轉(zhuǎn)錄合成cRNA→引物設(shè)計→三步法擴增→結(jié)果分析，以β?Actin 為內(nèi)參基因，每個樣本測3 次取平均Ct 值（相差0．5 個Ct 值舍棄）。 lncRNAAK093987正向引物序列為5＇?ACG?GAGGAGAGAGAGAATGT?3＇，反 向 引 物 序 列 為5＇?TACATGGGGAGACAAG?GATT?3＇。 讀取目的基因和內(nèi)參基因的Ct 值，采用2?△△CT 法 計 算 lncRNAAK093987mRNA 表 達水平。

1.2.2胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響因素：收集78 例性別、年齡、病理分期、分化程度、lncRNAAK093987 表達量等臨床資料，以手術(shù)病理結(jié)果將患者分為轉(zhuǎn)移組、無轉(zhuǎn)移組，應(yīng)用二元Logistic 回歸分析尋找胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素。

1.2.3lncRNAAK093987 表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性：78 例依據(jù)lncRNAAK093987 表達量中位數(shù)（7．35）為截點分為高表達組、低表達組，比較兩組術(shù)后2 年總生存率、無進展生存率，分析患者ln?cRNAAK093987 表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性。 術(shù)后2 年以電話或復(fù)診形式進行隨訪，末次隨訪時間為2020 年1 月。 無進展生存率指患者從接受治療開始到觀察到疾病進展或因任何原因發(fā)生死亡的這段時間內(nèi)的生存率。

1.3主要試劑 免疫印跡有關(guān)試劑、 ln?cRNAAK093987 序列購自上海百信生物科技公司，實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑盒購自廣州銳博生物科技有限公司。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20．0 軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。 采用Spearman 分析進行相關(guān)性分析。 以α ＝0．05 為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1胃癌組織及癌旁組織中l(wèi)ncRNAAK093987 表達量比較 胃癌組織中l(wèi)ncRNAAK093987 表達量為（7．35±0．79）明顯高于癌旁組織中的（1．09±0.11），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝69．315，P＜0.001）。

2.2胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析 78 例胃癌出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12 例，無轉(zhuǎn)移66 例。 兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；兩組在病理分期、 分 化 程 度、 瘤 灶 大 小、 深 層 浸 潤 及 ln?cRNAAK093987 表達量方面比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

表1 78 例胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析

2.3胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的二元Logistic 回歸分析 以胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為應(yīng)變量（有轉(zhuǎn)移＝1、無轉(zhuǎn)移＝0），以上述有統(tǒng)計學(xué)意義的單因素［分化程度：低分化＝1、中，高分化＝0；深層浸潤：有＝1、無＝0；lncRNAAK093987 表達量：＞7．99 ＝1、≤7.99 ＝0）］為自變量進行賦值，代入二元Logistic 回歸模型中進行分析，結(jié)果顯示低分化程度、有深層浸潤、ln?cRNAAK093987 表達量＞7．99 是胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素（P＜0.05 或P＜0.01），見表2。2.4lncRNAAK093987 表達量與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系 低表達組術(shù)后2 年總生存率、無進展生存率明顯高于高表達組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05 或P＜0.01），見表3。

表2 78 例胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的二元Logistic 回歸分析

表3 lncRNAAK093987 表達量與78 例胃癌預(yù)后的關(guān)系［例（%）］

2.5胃癌患者lncRNAAK093987 表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示：ln?cRNAAK093987 表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)，而與患者預(yù)后呈明顯負相關(guān)，見表4。

表4 78 例胃癌lncRNAAK093987表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性分析

3 討論

淋巴結(jié)是胃癌轉(zhuǎn)移的重要途徑，早期胃癌有10%～15%的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率［7］。 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后密切相關(guān)，盡管根治術(shù)是目前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者有效治療手段，但對無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期胃癌患者，貿(mào)然采取胃癌根治術(shù)會造成過度治療，因此早期預(yù)測胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險至為重要。 早期主要采用超聲內(nèi)鏡、CT 等影像學(xué)技術(shù)對胃癌進行輔助檢查，但這些檢查手段無法在早期準(zhǔn)確判斷患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 研究表明lncRNAs 可通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控、mRNA 加工等參與腫瘤的生理、病理過程，lncRNAs表達水平與多種腫瘤病理特征和預(yù)后密切相關(guān)［8?10］，在腫瘤診治方面具備良好的臨床應(yīng)用前景。相關(guān)研究表明lncRNAAK093987 在彌漫大B 細胞淋巴瘤患者中呈高表達，lncRNAAK093987 或可作為反映彌漫大B 細胞淋巴瘤預(yù)后的標(biāo)志物［11］。 另有研究指出lncRNAAK093987 在胃癌組織中呈高表達，其表達水平與胃癌惡性程度存在明顯正相關(guān)［12］，提示lncRNAAK093987 可能參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

本結(jié)果顯示，胃癌組織中l(wèi)ncRNAAK093987 表達量較癌旁組織中顯著增高，與Liu 等［13］研究結(jié)果大體類似，提示lncRNAAK093987 在癌組織中呈高表達。 本結(jié)果還顯示，低分化程度、有深層浸潤、ln?cRNAAK093987 表達量＞7．99 是胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素。 深層浸潤、分化程度一定程度反映了腫瘤的惡性程度，腫瘤分化程度越低、存在深層浸潤表示癌灶侵襲性越強，腫瘤惡性程度就越高，故而推測存在深層浸潤且分化程度低的患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險也越高，與權(quán)蕊良等［14］結(jié)論基本相符。研究表明lncRNAAK093987 轉(zhuǎn)錄水平低于蛋白質(zhì)編碼基因，且其表達存在高度的組織特異性，可精密調(diào)控并參與機體組織及細胞功能，參與腫瘤細胞的存活、增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為［15］。

此外，本結(jié)果同時顯示lncRNAAK093987 低表達胃癌患者術(shù)后2 年總生存率、無進展生存率較高表達患者顯著增高，lncRNAAK093987 表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)，而與患者預(yù)后呈明顯負相關(guān)，初步說明lncRNAAK093987 表達量與胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。 盡管具體機制尚未明確，但是提示在胃癌患者治療期間動態(tài)監(jiān)測ln?cRNAAK093987 表達，能夠為患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險的早期預(yù)警和預(yù)后判斷提供一定參考。

綜 上， 本 文 初 步 證 實 胃 癌 患 者 ln?cRNAAK093987 表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，其有望成為胃癌新型分子標(biāo)志物。