劉 敏，何孟璐，梅 瑜，陳新泉，王繼華

（1. 廣東省農(nóng)作物遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所，廣東 廣州 510640；2. 廣東羅浮山國藥股份有限公司，廣東 惠州 516100）

小葉榕（Ficus microcarpa）為?？崎艑俪＞G闊葉喬木，異名落地金線，廣泛分布在熱帶、亞熱帶地區(qū)，包括印度、緬甸和馬來西亞等東南亞國家以及我國廣西、廣東、福建、臺灣、浙江南部、云南和貴州等地區(qū)。小葉榕喜暖熱多雨氣候及酸性土壤，自然界中常生長于村邊或山林中［1］。小葉榕是我國常用的傳統(tǒng)中草藥，民間早有使用，以葉入藥，味淡、性涼，具有清熱解表、解毒消腫和祛濕止痛的功效，可用于治療流感、慢性支氣管炎、扁桃體炎、目赤、牙痛和跌打損傷等［2］。用小葉榕浸膏作為主要成分的哮喘和慢性支氣管炎治療藥咳特靈膠囊已收載在部頒標(biāo)準(zhǔn)中?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，小葉榕干浸膏及西藥馬來酸氯苯那敏共同組成的中西復(fù)方制劑咳特靈多年來一直占據(jù)同類藥的絕大部分市場份額［3］。

隨著技術(shù)的發(fā)展，小葉榕的功效逐漸被開發(fā)，具有廣闊的應(yīng)用前景。但目前對小葉榕的研究以栽培和繁育居多，藥用還是以小葉榕浸膏為主要產(chǎn)品，對其深加工及技術(shù)開發(fā)的研究并不多見。同時(shí)，小葉榕浸膏的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)尚不夠完善、藥效成分及其發(fā)揮機(jī)制不明確、優(yōu)良種質(zhì)資源評價(jià)體系缺乏等一系列問題均會影響小葉榕后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)和利用。對小葉榕亟需開展的研究內(nèi)容較多，涉及種植、園林應(yīng)用、中藥質(zhì)量工藝和藥效機(jī)制等。本文主要圍繞生藥學(xué)、化學(xué)成分、質(zhì)量工藝、藥理活性及臨床應(yīng)用等方面的研究進(jìn)行綜述。

1 小葉榕生藥學(xué)研究

1.1 生物學(xué)特性

小葉榕為常綠小喬木，樹冠傘形或圓形。葉狹橢圓形，長5～10 cm，寬1.5～4 cm，全緣，先端短尖至漸尖，基部楔形，兩面光滑無毛，干后灰綠色，基生側(cè)脈短，側(cè)脈4～8對，小脈在表面明顯；葉柄短，長1～2 cm；托葉披針形，無毛，長約1 cm。榕果成對腋生或3～4個(gè)簇生于無葉小枝葉腋，球形，直徑4～5 mm；雄花、癭花、雌花同生于一榕果內(nèi)壁；極少數(shù)雄花生于榕果內(nèi)壁近口部，花被片2，披針形，子房斜卵形，花柱側(cè)生，柱頭圓形；癭花與雌花相似，花柱線形而短；榕果無總?；虿怀^0.5 mm?；ü?—6月［4-5］。

1.2 藥學(xué)特性

小葉榕具有清熱祛濕、止咳化痰、活血散瘀的功效。研究表明，小葉榕所含化學(xué)成分非常豐富，主要包括三萜類、黃酮類、酚酸類等化合物［6-9］，這些化合物的生物活性主要表現(xiàn)在止咳平喘、治療心血管疾病、抗炎抑菌、抗腫瘤等方面［10］。因此近年來對小葉榕的研究主要集中在根、葉化學(xué)成分的提取、藥效鑒定、有效成分確定等方面，但對其藥效發(fā)揮機(jī)制的認(rèn)識依然很匱乏。隨著中藥學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到小葉榕藥效并不是單一成分作用，也不是多種成分簡單相加，而是多個(gè)功能組分的整體表現(xiàn)，是多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的結(jié)果［11］。因此，對小葉榕藥學(xué)特性的研究熱點(diǎn)應(yīng)集中在多組分藥效之間的協(xié)同作用機(jī)制上，這也更加符合現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)的要求。

2 小葉榕化學(xué)成分研究

2.1 三萜類化合物

小葉榕作為傳統(tǒng)中藥對鎮(zhèn)咳、抗炎等相關(guān)疾病具有較好效果，但其有效成分早期并不明確。直到1986年，有國外學(xué)者首次從小葉榕提取物中分離出了表木栓醇等三萜類化學(xué)成分，1998—2005年間又陸續(xù)分離出更多的三萜類化合物。通過藥效活性實(shí)驗(yàn)證明，其中的一些三萜類有明顯的抗腫瘤活性［10］。隨著技術(shù)的進(jìn)步和研究的深入，截至2019年，國內(nèi)外學(xué)者從小葉榕中分離得到的三萜類化合物多達(dá)100多種，主要可分為蒲公英烷型三萜、烏蘇烷型三萜、齊墩果烷型三萜、羊毛脂甾烷型三萜、羽扇豆烷型三萜、木栓烷型三萜、環(huán)菠蘿密烷型三萜及其他類型三萜，歸納起來主要有如下代表化合物：表木栓醇、馬斯里酸、β-香樹酯醇乙酸醇、β-香樹酯醇、羽扇豆醇乙酸酯、羽扇豆醇、β-香樹酯酮、β-谷甾醇［12］、3β-羥基-11-羰基-烏蘇烷-12-烯、3β-乙酸酯-11-羰基-烏蘇烷-12-烯、齊墩果酸、3β-羥基-齊墩果烷-11,13（18） -二烯-28 酸、白樺酸、Pyracrenic acid、Platanic acid［13］等。

2.2 黃酮類化合物

小葉榕含有豐富的化學(xué)成分，其中黃酮類化合物是最早被研究證實(shí)具有抗炎和抗氧化作用的有效成分之一［14-15］。國內(nèi)對于小葉榕的研究起步較晚，因此大多數(shù)熱點(diǎn)研究都集中在對小葉榕總黃酮提取工藝的改進(jìn)方面，并未真正分離純化出有效的單體成分。直到2008年，李彥文［13］采用多種色譜技術(shù)對小葉榕提取物進(jìn)行分離，提取出17個(gè)單體化合物，且抗炎藥效活性實(shí)驗(yàn)顯示，主要物質(zhì)為黃酮類化合物的醇提物作用強(qiáng)于水提物。截至2019年，國內(nèi)外學(xué)者從小葉榕中分離得到的黃酮類化合物達(dá)50多種，根據(jù)這些化合物結(jié)構(gòu)的不同，可分為黃酮、黃酮醇、黃烷醇、異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇等六大類，主要有如下幾種代表化合物：Isowigtheone、Myrsininone A、Derrone、Alpinumisoflavone、牡荊素、葒草苷、異牡荊苷、胡蘿卜苷［12,16］等。

2.3 其他化合物

小葉榕的氣味是民間藥農(nóng)用來判斷其品質(zhì)好壞的常用標(biāo)準(zhǔn)，因此小葉榕的揮發(fā)油成分、酚酸類、酯類等化合物也具有極高的研究價(jià)值，而且相關(guān)研究表明這些化合物對抗炎、抗氧化也具有一定作用。目前在小葉榕提取物中還分離出一些醇、酸、酯類等化合物，主要為香豆素、甾醇、木脂素、生物堿等，主要有如下幾種代表化合物：十八烷酸、十五烷酸、三十二烷醇、二十八烷醇、二十六烷酸、原兒茶酸甲酯［12,16］、苯甲酸、水楊酸、對羥基苯乙酸、3',5'-二甲氧基-4'-羥基苯甲酸、領(lǐng)羥基苯丙酸、對羥基苯丙酸、2-羥基-3-甲基丁酸、3',5'-二甲氧基-4'-羥基苯乙酮、對羥基苯甲酸仲丁酯［17］等。

3 小葉榕藥用質(zhì)量工藝研究

3.1 質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

小葉榕具有廣泛的應(yīng)用前景，但如何評價(jià)小葉榕中藥材的質(zhì)量一直沒有固定的標(biāo)準(zhǔn)。民間對中藥材資源的評價(jià)仍以品質(zhì)為主，因此近年來對中藥資源的評價(jià)研究主要集中在品質(zhì)研究上［18］。黃酮類化合物作為小葉榕的有效成分之一，早期采用分光光度計(jì)比色法對小葉榕中的黃酮類成分含量進(jìn)行定量，建立的小葉榕質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)得到了中藥學(xué)領(lǐng)域的認(rèn)可［19］。目前小葉榕浸膏仍然執(zhí)行《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》第14冊“咳特靈片”項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。但中藥及其制劑為多組分復(fù)雜體系，藥理活性及其發(fā)揮機(jī)制均不能單一而論，并且隨著研究的進(jìn)步，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)缺乏有效化學(xué)成分含量控制指標(biāo)、水溶性無機(jī)鹽類雜質(zhì)控制水平較低、薄層層析控制指標(biāo)不夠準(zhǔn)確等缺陷逐漸被放大，早已與中藥學(xué)的發(fā)展不相匹配［19］。因此，單一的顯微鑒別、理化鑒別和含量測定等方法都不足以成為評價(jià)小葉榕質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)，而中藥指紋圖譜的建立則解決了這一難題。中藥指紋圖譜能較為全面地反映中藥中所含化學(xué)成分的種類、數(shù)量及含量，進(jìn)而對藥品質(zhì)量進(jìn)行整體評價(jià)［20］。李彥文［13］、戴臻等［21］采用HPLC指紋圖譜法確定小葉榕葉中牡荊素、異牡荊苷為有效成分，并以此建立了小葉榕對應(yīng)的指紋圖譜，為小葉榕質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制打下了基礎(chǔ)。隨后黃洋等［11］在證明藥效活性的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對苯甲酸、對羥基苯乙酸、3,5二甲氧基-4-羥基苯乙酮3種化合物建立指紋圖譜，完善了小葉榕質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。他們的研究均顯示秋冬季的小葉榕中牡荊素含量較高、夏季較低，而夏秋兩季的小葉榕中總黃酮含量最高。這表明小葉榕的品質(zhì)最佳時(shí)期為10—12月，為小葉榕質(zhì)量控制提供了時(shí)間節(jié)點(diǎn)。除此以外，中草藥中微量元素的種類和含量也對其有效成分發(fā)揮功能起著重要作用［22-24］。付金娥等［25］建立了一種微波消解-ICP-OES-法測定小葉榕藥材中微量元素的體系，將微量元素也納入到質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步完善了小葉榕質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。但小葉榕的品質(zhì)再好，如果產(chǎn)量低，也無法得到廣大藥農(nóng)的認(rèn)可。據(jù)此，韋樹根等［18］開展了小葉榕種質(zhì)資源綜合指數(shù)定量評價(jià)研究，從小葉榕的藥材品質(zhì)、產(chǎn)量等方面建立了一套更加完善的綜合評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。綜上所述，小葉榕質(zhì)量的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，并不能僅以某單一有效成分的含量來界定，而要將品質(zhì)、產(chǎn)量等多方面全部納入考量范圍，建立更加完善的綜合評價(jià)體系。

3.2 提取工藝

研究表明，黃酮類物質(zhì)是小葉榕的有效成分之一，因此對小葉榕的工藝研究多以小葉榕總黃酮提取率為主要考察指標(biāo)。目前對小葉榕葉中黃酮的提取分離主要采用水提醇沉工藝、超聲波提取工藝及大孔吸附樹脂吸附法等3種。葉榮科等［26］使用水提醇沉法提取小葉榕中總黃酮的含量，以烘干葉50%～60%乙醇沉淀后含量最高，自然干燥葉以35%～50%醇沉最高。因此，在生產(chǎn)中采用自然干燥葉時(shí)，使用35%～50%的乙醇沉淀能保證出膏率高、產(chǎn)率穩(wěn)定，并且能降低成本、減少環(huán)境污染、保證安全。黃濤等［27-28］采用超頻震動膜過濾法替代傳統(tǒng)的醇沉分離和加熱濃縮中總黃酮的分離、濃縮工藝，極大地減少了提取工序，提高了效率，縮短了周期，降低了成本，提高了安全指數(shù)。陳化等［29］采用超聲波乙醇浸提法從小葉榕中提取總黃酮類物質(zhì)，結(jié)果顯示此法的回收率為100.16%，且得到的黃酮類物質(zhì)純度較高。目前雖然水提醇沉法和超聲波提取法對小葉榕總黃酮類物質(zhì)的提取率能達(dá)到4.12%，但由于成本高昂，因此工業(yè)化前景較差。馮丹丹等［30］、劉力恒等［31］通過使用大孔吸附樹脂純化小葉榕總黃酮類物質(zhì)，結(jié)果顯示大孔吸附樹脂能有效提高小葉榕葉水提物浸膏的黃酮含量，是一種性能優(yōu)良、價(jià)格低廉、可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的吸附劑。因此，在小葉榕工業(yè)化生產(chǎn)中可將3種不同提取工藝相結(jié)合，以大幅提高小葉榕黃酮提取率，降低生產(chǎn)成本。

4 小葉榕藥理活性及臨床應(yīng)用研究

4.1 鎮(zhèn)咳平喘

小葉榕干浸膏對鎮(zhèn)咳具有獨(dú)特的療效，是我國著名中藥“咳特靈”的主要原料。張靜等［3］通過小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)表明小葉榕干浸膏具有止咳、祛痰、抗炎、平喘等藥效；陳艷芬等［32］分別比較小葉榕水提物和醇提物的鎮(zhèn)咳和祛痰作用，結(jié)果顯示二者均有明顯的鎮(zhèn)咳祛痰作用；韋錦斌等［33］、陳路等［34］、李彥文等［35］觀察小葉榕水提物、醇提物鎮(zhèn)咳平喘作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，小葉榕水提物和醇提物低、中、高3組劑量均能明顯延長咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)及延長豚鼠哮喘的潛伏期，但醇提物的作用稍強(qiáng)于水提物；黃濤陽［36］采用血清藥物化學(xué)法對含藥血清進(jìn)行檢測顯示血清中有7個(gè)入血的成分，大致確定其入血成分的極性部位主要位于乙酸乙酯層，正丁醇層也有5個(gè)入血成分，這與小葉榕醇提物的藥效作用強(qiáng)于水提物的研究結(jié)論相吻合，但出現(xiàn)這種結(jié)果的機(jī)制卻并不清楚。小葉榕提取物鎮(zhèn)咳平喘的有效成分及發(fā)揮機(jī)制一直未見有報(bào)道。直到2017年，黃華花等［37］通過UHPLC-MS對小葉榕止咳化痰有效部位的成分進(jìn)行分析，從中分析鑒定出可能起作用的6種成分，分別為阿福豆素、表阿夫兒茶精、platanic acid、牡荊素、異牡荊苷、β-香樹酯酮；胡海榮等［38］通過檢測引咳小鼠體內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸粒細(xì)胞（EOS） 百分率、血清中白細(xì)胞介素5（IL-5）、白細(xì)胞介素4（IL-4）、血清免疫球蛋白E（IgE） 含量，結(jié)果顯示用藥后的白細(xì)胞總數(shù)和EOS百分率、血清中IL- 5、IL-4、IgE含量明顯降低；秦飛等［39］通過小葉榕干浸膏給藥治療慢性支氣管炎小鼠的研究，同樣顯示給藥后小鼠體內(nèi)腫瘤壞死因子（TNF-α）降低，白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）水平升高。上述研究均表明小葉榕的鎮(zhèn)咳平喘作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子IL-4、IL-5以及血清中IgE和EOS減少有關(guān)，而更加明確的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

4.2 抗炎抑菌

在抗炎研究方面，方道碩［40］通過二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹模型、角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹模型研究顯示小葉榕葉總黃酮具有抗炎鎮(zhèn)痛作用；陳路等［34］的研究表明小葉榕水提物、水提醇沉物對二甲苯及棉球肉芽腫致腫大鼠動物模型的炎癥均有抑制效果；張靜等［3］、李彥文等［35］分別采用小葉榕水提物、醇提物低、中、高3種劑量對小鼠耳腫脹、足趾腫脹進(jìn)行抗炎試驗(yàn)，結(jié)果顯示小葉榕不同部位提取物的不同劑量均具有抗炎效果，且其對劑量有一定依賴性。上述研究均表明小葉榕對炎癥具有一定的抑制作用，但目前還未見其抑制炎癥的機(jī)制研究報(bào)道。

謝主蘭等［41］對小葉榕的醇提物進(jìn)行了多種病菌的抑菌試驗(yàn)，結(jié)果顯示小葉榕醇提物對青霉、黑曲霉和面包酵母菌的生長均具有一定的抑制作用。謝冬惠等［42］通對小葉榕不同部位提取物的抗氧化活性進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果顯示，小葉榕抗氧化活性與總酚酸含量之間存在著顯著的線性相關(guān)，與黃酮類物質(zhì)含量間也有一定的相關(guān)性，以酚酸類成分的抗氧化活性最強(qiáng)。劉力恒等［43］的研究也指出，隨著小葉榕提取液總黃酮含量的增加，對羥自由基的清除能力也逐漸增強(qiáng)。胡英杰等［44］還從小葉榕提取液中分離到（+）（2R,3S）阿夫兒茶素、（-）（2R，3R）表阿夫兒茶素2種黃烷化合物，經(jīng)鑒定它們對單純皰疹病毒（HSV-2）具有抑制作用。這些研究均顯示小葉榕提取物具有抑致病菌和病毒、抗氧化的作用，但其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。鄧雪萍等［45］從小葉榕內(nèi)篩選得到一種內(nèi)生真菌，其培養(yǎng)液對革蘭氏陰性菌銅綠假單胞菌、大腸埃希菌及黑曲霉菌具有很強(qiáng)的抑制作用。王平等［46］將小葉榕氣生根水提液加入大花蕙蘭組織培養(yǎng)基中，結(jié)果顯示其能誘導(dǎo)或提高原球莖增值率、分化生根率。而有研究表明健康植物體內(nèi)存在一些植物內(nèi)生菌，它們能產(chǎn)生抗腫瘤、抗菌、抗氧化、促進(jìn)植物生長等多種活性成分［47］。這表明小葉榕具有抗炎抑菌效果可能與其體內(nèi)的內(nèi)生真菌產(chǎn)生活性物質(zhì)有關(guān)。

4.3 臨床應(yīng)用進(jìn)展

小葉榕在我國具有悠久的使用歷史和明確的臨床療效。目前小葉榕已被制成膠囊、片劑、顆粒劑等多種劑型供臨床使用［35］，同時(shí)市場上也已開發(fā)出多種小葉榕的藥品和保健食品［10］。

現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)用“咳特靈”治療慢性氣管炎，結(jié)果顯示對咳、痰、喘三癥均有效，治療顯效率為83.85%，治療有效率為96.56%，主要臨床副作用是口干、口苦、頭暈、倦睡等，部分患者轉(zhuǎn)氨酶有所升高，但原因尚不明確［48］。

其次，口服小葉榕葉片水煎煮液，治療急性細(xì)菌性痢疾，治愈（臨床癥狀消失，細(xì)菌培養(yǎng)與膿細(xì)胞轉(zhuǎn)陰）率達(dá)90%，好轉(zhuǎn)（臨床癥狀減輕，但仍有較多膿細(xì)胞）率為4.5%，無效（臨床癥狀無改善，膿細(xì)胞雖減少，但細(xì)菌培養(yǎng)仍呈陽性）率為5.5%，無效者均為小兒患者，可能與年齡過小有關(guān)［49］。

5 展望

小葉榕在我國南方地區(qū)資源極其豐富，其葉片、氣生根入藥治療相關(guān)疾病的歷史悠久。相關(guān)研究表明小葉榕含有豐富的藥用化學(xué)成分，至今已從小葉榕中獲得多達(dá)200多種化學(xué)單體，但大部分藥理活性試驗(yàn)還停留在粗提物水平，化學(xué)成分和藥理活性相結(jié)合的研究還不多，這也是現(xiàn)行的小葉榕浸膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能準(zhǔn)確反映其量效關(guān)系的根本原因。因此，有必要深入對其化學(xué)成分藥理毒理作用進(jìn)行研究，系統(tǒng)的建立小葉榕有效成分及指紋圖譜。

目前小葉榕的繁殖方式主要有種子繁殖和扦插繁殖。小葉榕用種子繁殖容易獲得大量整齊的苗，且成本較低，但小葉榕的果期長，種子小，采收困難，且種子繁殖生長慢，不能快速育成達(dá)到采收標(biāo)準(zhǔn)的藥用植株；扦插繁殖為快速化、規(guī)?；呐嘤幱眯∪~榕提供了捷徑，但其難點(diǎn)在于插穗生根困難，必須輔助以植物生長調(diào)節(jié)劑才能保證存活率。而隨著小葉榕經(jīng)濟(jì)效益被發(fā)掘，要滿足國內(nèi)市場需求，估計(jì)每年需要60多萬t小葉榕鮮葉原料，按每667 m2產(chǎn)量3 t鮮葉計(jì)，種植面積需要逾1.4萬hm2［50］。因此，若要填補(bǔ)這巨大市場需求的空缺，開發(fā)小葉榕資源的快速繁育手段，非常有必要建立GAP種植基地，這也將為后續(xù)小葉榕的深入研究及深加工、開發(fā)與利用提供基礎(chǔ)。