羅君花 張華東 丁 琪 齊向華

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，手術(shù)治療能顯著延長宮頸癌患者的生存時間，但是術(shù)后復(fù)發(fā)率比較高，主要在于宮頸癌組織容易出現(xiàn)侵襲浸潤[1-3]。在腫瘤侵襲浸潤的初始階段，上皮細(xì)胞會向間充質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化，也就是形成上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，但是具體作用的機(jī)制還不明確[4]。同時當(dāng)前宮頸癌早期診斷較為困難，確診時大多數(shù)已為中晚期，多伴隨有浸潤或侵襲，導(dǎo)致患者生存率及預(yù)后均較差[5-6]。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages，TAMs)是腫瘤微環(huán)境中的重要炎性細(xì)胞，與腫瘤進(jìn)展、侵襲、浸潤和不良預(yù)后密切相關(guān)[7-8]。已有研究顯示TAMs可通過上調(diào)腫瘤細(xì)胞促癌基因的表達(dá)，增強(qiáng)其侵襲轉(zhuǎn)移能力[9]。巨噬細(xì)胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)可抑制巨噬細(xì)胞游走并調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，因此惡性腫瘤進(jìn)程中至關(guān)重要[10-11]。本文具體探討了宮頸癌組織中TAMs分布以及MIF的表達(dá)與其侵襲浸潤的相關(guān)性，希望為臨床探索宮頸癌的早期診斷、預(yù)后評估提供新思路?，F(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年8月至2019年2月于本院就診的80例宮頸癌患者作為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：住院手術(shù)治療并經(jīng)病理診斷證實(shí)的宮頸鱗癌組織；原發(fā)于宮頸癌，非其他部位轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的宮頸癌病例；患者簽署了知情同意書；醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究；術(shù)前均未接受放療及化療；無糖尿病、高血壓、腎病等合并癥；年齡30～80歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠孕婦與哺乳期婦女；精神疾病患者；臨床與病理資料缺乏者。

在80例患者中，年齡最小34歲，最大78歲，平均年齡(56.91±3.19)歲；平均體重指數(shù)(22.48±1.38)kg/m2；臨床分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期38例，Ⅲ期10例，Ⅳ期10例；侵襲32例，浸潤28例；分化程度：高分化35例，中分化25例，低分化20例。

1.2 組織取樣

取所有患者的宮頸癌病灶組織標(biāo)本(觀察組)與癌旁組織標(biāo)本(對照組)，所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm切片保存。Anti-MIF由Abcam公司提供，工作濃度為1∶500；鼠抗人CD68單克隆抗體(是巨噬細(xì)胞最可靠的標(biāo)志物，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)，工作濃度1∶200。免疫組化檢測試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供，以PBS液代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組化檢測

所有切片給予免疫組織化學(xué)染色，免疫組化試劑盒由武漢博士德公司提供，步驟按操作說明書進(jìn)行。其中一抗4 ℃濕盒內(nèi)過夜，然后給予再加二抗室溫孵育1 h。MIF染色陽性細(xì)胞以細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為準(zhǔn)，根據(jù)陽性細(xì)胞出現(xiàn)頻率和染色程度綜合評分，兩者相加：0～1分為“-”；2～3分為“+”；4～7分為“++”，“+”與“++”均判斷為陽性。

TAM計(jì)數(shù)：采用CD68標(biāo)記TAM，以細(xì)胞質(zhì)含清晰的黃褐色顆粒狀者為陽性細(xì)胞。在高倍鏡(×400)下隨機(jī)計(jì)數(shù)5個視野的巨噬細(xì)胞。同時調(diào)查與記錄所有患者的一般資料與臨床病理資料。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.00統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，對比采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 TAMs計(jì)數(shù)對比

觀察組的TAMs計(jì)數(shù)平均為(28.42±2.15)，顯著高于對照組(16.72±1.89)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.858，P<0.05)。

2.2 MIF表達(dá)對比

觀察組的 MIF表達(dá)陽性率為56.3%(45/80)，顯著高于對照組的13.8%(11/80),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=31.758，P<0.05)。

2.3 TAMs分布以及MIF的表達(dá)與其侵襲浸潤的相關(guān)性

觀察組中，不同侵襲浸潤患者的TAMs分布以及MIF的表達(dá)對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

Spearman等級相關(guān)分析顯示侵襲浸潤與TAMs分布、MIF表達(dá)都有顯著正相關(guān)性(P<0.05)。見表2。

表1 不同侵襲浸潤患者的TAMs分布以及MIF的表達(dá)對比

3 討論

宮頸癌發(fā)病趨勢逐漸年輕化，早期篩查和手術(shù)根治能有效改善患者的預(yù)后，但是侵襲浸潤仍然是宮頸癌診治的難點(diǎn)，也是患者死亡的主要原因[12]。巨噬細(xì)胞在腫瘤的免疫反應(yīng)中起著重要作用，根據(jù)其表型不同可分為經(jīng)典激活型和替代激活型[13]，其中后者一類免疫抑制細(xì)胞，在腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移中起著核心作用，可促進(jìn)腫瘤的生長[14-15]。TAMs為與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的巨噬細(xì)胞，占炎癥細(xì)胞總數(shù)的40%左右。巨噬細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，刺激淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，促進(jìn)淋巴管的新生[16]。本研究顯示觀察組的TAMs計(jì)數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。有研究顯示TAMs激活后可發(fā)揮免疫抑制的作用，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和進(jìn)展，且可吸引更多的TAMs浸潤到腫瘤中，并產(chǎn)生相關(guān)細(xì)胞因子、生長因子、蛋白酶等，有利于腫瘤侵襲浸潤[17]。

表2 TAMs分布以及MIF的表達(dá)與其侵襲浸潤的相關(guān)性(n=80)

MIF是許多炎癥和免疫性疾病的重要介質(zhì)，具有促炎作用，可參與機(jī)體免疫及炎癥反應(yīng)[18]。相關(guān)研究表明：肺癌組織中MIF的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，且可促進(jìn)炎性因子分泌以及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[19]。本研究顯示觀察組的 MIF表達(dá)陽性率為56.3%，顯著高于對照組的13.8%(P<0.05)。相關(guān)研究顯示MIF能通過PIK/Akt 通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃逸，還可參與影響腫瘤細(xì)胞的化療耐藥過程[20]。

腫瘤的侵襲浸潤與相關(guān)基因的異常表達(dá)有關(guān)，宮頸癌的發(fā)生歸因于基因一環(huán)境的相互作用，從而影響不同個體對環(huán)境因素作用的敏感性。TAMs浸潤增多及其伴隨的炎性反應(yīng)微環(huán)境加重可能參與宮頸癌病變的發(fā)生發(fā)展。MIF是調(diào)節(jié)固有和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的激動子，能夠激活T細(xì)胞與巨噬細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡和抑癌基因的表達(dá)[21]。本研究顯示在宮頸癌患者中，不同侵襲浸潤患者的TAMs分布以及MIF的表達(dá)對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Spearman等級相關(guān)分析顯示侵襲浸潤與TAMs分布、MIF表達(dá)都有顯著正相關(guān)性(P<0.05)。從機(jī)制上分析，炎癥細(xì)胞是腫瘤間質(zhì)的重要組成部分，腫瘤的間質(zhì)是一個慢性炎癥的環(huán)境。TAMs可將腫瘤細(xì)胞或間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的生長因子、細(xì)胞因子等招募到腫瘤處，從而促進(jìn)細(xì)胞侵襲浸潤[22]。同時TAMs可促進(jìn)MIF分泌，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移[23-24]。本研究也存在一定的不足，實(shí)驗(yàn)樣本量少，時間短，病理指標(biāo)比較少，還需要后續(xù)進(jìn)一步大樣本的臨床研究。

總之，宮頸癌組織中TAMs呈現(xiàn)高密度分布，并伴隨有MIF表達(dá)陽性率增加，且與其侵襲浸潤有顯著正相關(guān)性。