王 鋒 皮百木 張洪陽 任艷竹

眼表鱗狀細(xì)胞癌為一種發(fā)病率比較低的原發(fā)性惡性腫瘤，多見于60歲左右男性，其病因還不明確，不過與戶外勞動(dòng)、灰塵、風(fēng)沙刺激、眼外傷、遺傳等多種因素有關(guān)[1]。眼表鱗狀細(xì)胞癌的惡性程度高、預(yù)后差，常可發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而危及生命[2]。手術(shù)為該病的主要治療方法，但是對(duì)于機(jī)體特別是眼睛的損傷比較大，易造成外觀和功能的雙重缺陷[3]。為此對(duì)眼表鱗狀細(xì)胞癌的早期診斷、早期治療，是改善患者生活質(zhì)量和生存率的有效途徑，特別是準(zhǔn)確的腫瘤組織病理學(xué)診斷，對(duì)于臨床醫(yī)生選擇合適的治療方案具有重要價(jià)值[4]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNAs)是一種不具有蛋白質(zhì)編碼能力的長(zhǎng)鏈RNA，其是由≥200個(gè)nt的RNA轉(zhuǎn)錄本組成，具有進(jìn)化保守性、復(fù)雜性、多樣性等特點(diǎn)[5]。LncRNAs可通過招募組蛋白修飾復(fù)合物到基因組的特定區(qū)域，從而調(diào)控基因的表達(dá)。已有研究顯示LncRNAs在調(diào)控腫瘤發(fā)生與發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，如增殖、抑制凋亡和轉(zhuǎn)移。LncRNA BANCR是一種腫瘤促進(jìn)因子，能激活白介素-6/stat3信號(hào)通路，LncRNA BANCR的肝癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移都顯著提高[6]。臨床研究證實(shí)BANCR在人類惡性腫瘤中呈現(xiàn)顯著性差異表達(dá)，在主要惡性腫瘤中都作為致癌基因，發(fā)揮誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖、激活自噬、抑制凋亡等多種作用[7]。本文具體探討了LncRNA BANCR在眼表鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義，以明確LncRNA BANCR的作用機(jī)制。現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)與所有入選患者的知情同意。2010年8月到2018年8月選擇在本院診治的眼表鱗狀細(xì)胞癌患者82例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡30～70歲；符合眼表鱗狀細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；臨床與病理資料完整；首次發(fā)??；術(shù)前無經(jīng)歷任何治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料缺乏者；妊娠與哺乳期婦女；嚴(yán)重心、肝、腎功能異?；颊摺?/p>

在82例患者中，男性50例，女性32例；年齡最小37歲，最大68歲，平均年齡(58.67±2.81)歲；平均病程(4.23±0.12)年；平均體重指數(shù)(21.47±2.90)kg/m2；臨床分期：Ⅰ期39例、Ⅱ期25例、Ⅲ期18例；組織學(xué)分化：高分化46例，中分化22例，低分化14例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移37例；病變部位：球結(jié)膜40例，角膜緣42例；吸煙37例，飲酒41例。

1.2 LncRNA BANCR表達(dá)檢測(cè)

取所有患者的病灶組織標(biāo)本(觀察組)與癌旁組織標(biāo)本(對(duì)照組)，所有標(biāo)本暫存于液氮中，于-80 ℃冰箱或液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。qRT-PCR試劑盒購自大連TAKARA公司，檢測(cè)探針購自上海生工公司，各稀釋液、生化試劑等均購自中衫公司。提取總組織標(biāo)本的RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。LncRNA BANCR檢測(cè)引物：正向引物：5'-TGCGAAGGATTCCCTGGTCGAAAGC-3'，反向引物：5'-AATCGAGCCAGGGTATT-3'。PCR程序：預(yù)變性：95 ℃ 30 s，PCR反應(yīng)：95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)，以2-ΔΔCt作為檢測(cè)值，2-ΔΔCt≥2作為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 調(diào)查資料

調(diào)查所有患者的一般資料，包括性別、年齡、體重指數(shù)、病程、臨床分期、組織學(xué)分化、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病變部位、生活行為(吸煙、飲酒)等。從病檢確診日期開始，到患者死亡或隨訪截止日期為止，隨訪截止日期為2020年2月1日。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

在統(tǒng)計(jì)分析時(shí)應(yīng)用的軟件是SPSS 22.00，通過百分比以及均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示計(jì)量數(shù)據(jù)與計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，χ2檢驗(yàn)和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)來進(jìn)行對(duì)比，通過單因素方差分析來進(jìn)行組間對(duì)比，相關(guān)性分析應(yīng)用的是直線相關(guān)分析，多因素采用COX回歸分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α<0.05。

2 結(jié)果

2.1 LncRNA BANCR表達(dá)陽性率對(duì)比

觀察組的LncRNA BANCR表達(dá)陽性率為54.9%(45/82)，顯著高于對(duì)照組的2.4%(2/82)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=55.144，P=0.000)。

2.2 不同病理特征眼表鱗狀細(xì)胞癌患者的LncRNA BANCR表達(dá)陽性率

在82例患者中，不同組織學(xué)分化、臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、吸煙患者的LncRNA BANCR表達(dá)陽性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同病理特征眼表鱗狀細(xì)胞癌患者的LncRNA BANCR表達(dá)陽性率(例，%)

2.3 眼表鱗狀細(xì)胞癌患者LncRNA BANCR表達(dá)與其他指標(biāo)的相關(guān)性

直線相關(guān)分析顯示患者的LncRNA BANCR表達(dá)與組織學(xué)分化、臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、吸煙存在顯著相關(guān)性(P<0.05)。見表2。

表2 眼表鱗狀細(xì)胞癌患者LncRNA BANCR表達(dá)與其他指標(biāo)的相關(guān)性(n=82)

2.4 預(yù)后情況

所有患者隨訪到2020年2月1日，平均隨訪時(shí)間(31.72±2.28)個(gè)月。82例患者中死亡30例，死亡率為36.6%。

2.5 影響因素分析

在82例患者中，以患者隨訪預(yù)后死亡作為因變量，COX回歸分析顯示LncRNA BANCR、組織學(xué)分化、臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、吸煙都為影響患者預(yù)后死亡的主要因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響眼表鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后死亡的因素(n=82)

3 討論

眼球表面組織主要為薄層上皮組織，包括角膜、角膜緣、球結(jié)膜等部位。眼表腫瘤類型繁多，其中良性以囊腫、乳頭狀瘤、色素痣、囊腫為主，而惡性腫瘤以鱗狀細(xì)胞癌為主[8]。眼表鱗狀細(xì)胞癌是一種原發(fā)性上皮惡性腫瘤，也可由上皮內(nèi)上皮癌遷延多年惡變而來。該病多數(shù)起源于瞼裂區(qū)的球結(jié)膜或角膜緣，在發(fā)病早期表現(xiàn)為無痛性的、不規(guī)則的粉紅色結(jié)節(jié)狀隆起，生長(zhǎng)緩慢。該病的發(fā)病病因還不明確，在男性中的發(fā)病人數(shù)遠(yuǎn)高于女性，可能與男性從事戶外活動(dòng)和田間勞動(dòng)明顯多于女性有關(guān)[9]。

當(dāng)前眼表鱗狀細(xì)胞乳頭狀瘤-上皮內(nèi)瘤變-鱗狀細(xì)胞癌這一過程的發(fā)生機(jī)制還不明確，不過有多種基因?qū)?xì)胞的增殖和凋亡起到調(diào)控作用。LncRNA屬于非編碼RNA的一種，是一類不編碼蛋白的RNA分子，具有更高的組織器官特異性，缺少或缺乏開放閱讀編碼框[10]。LncRNA具有保守的二級(jí)結(jié)構(gòu)，可通過lncRNA-蛋白相互作用、mRNA剪接、表觀遺傳沉默、lncRNA-miRNA相互作用等，參與細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡等多個(gè)腫瘤發(fā)生等多種生物學(xué)過程的調(diào)控[11]。BANCR是9號(hào)染色體上的轉(zhuǎn)錄物，其通過改變細(xì)胞遷移、增殖來影響腫瘤的發(fā)生[12]。BANCR在多種惡性腫瘤組織與細(xì)胞系中的表達(dá)上升，為一種促癌因子。本研究顯示觀察組的LncRNA BANCR表達(dá)陽性率為54.9%，顯著高于對(duì)照組的2.4%(P<0.05)；在82例患者中，不同組織學(xué)分化、臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、吸煙患者的LncRNA BANCR表達(dá)陽性率對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；直線相關(guān)分析顯示患者的LncRNA BANCR表達(dá)與組織學(xué)分化、臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、吸煙存在顯著相關(guān)性(P<0.05)。從機(jī)制上分析，LncRNA BANCR表達(dá)上調(diào)與腫瘤病理特征、生活行為密切相關(guān)。當(dāng)前也有研究顯示LncRNA BANCR表達(dá)上調(diào)可提高惡性腫瘤細(xì)胞的惡性程度，也可降低惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的藥物敏感性，可作為骨肉瘤預(yù)后評(píng)估和治療靶點(diǎn)的潛在生物標(biāo)志物[13]。

眼球表面惡性腫瘤是眼科常見的腫瘤，其中鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生率占80%以上，在病理特征上有明顯的異型性，呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，排列成不規(guī)則的乳頭狀，巢中央可見癌株。LncRNAs被認(rèn)為是腫瘤基因表達(dá)的重要調(diào)節(jié)因子，涉及到表觀遺傳轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控等，并且部分LncRNAs通過影響基因增強(qiáng)子的活性來促進(jìn)基因調(diào)控[14]。本研究所有患者隨訪到2020年2月1日，平均隨訪時(shí)間(31.72±2.28)個(gè)月，82例患者中死亡30例，死亡率為36.6%；COX回歸分析顯示LncRNA BANCR、組織學(xué)分化、臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、吸煙都為影響患者預(yù)后死亡的主要因素(P<0.05)。從機(jī)制上分析，LncRNA BANCR高表達(dá)可影響腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、遷移，還可能直接或通過其他途徑影響腫瘤細(xì)胞增殖活性，從而影響患者的預(yù)后[15]。本研究也存在一定的不足，所收集的樣本量較少，雖然證明了LncRNA BANCR與病理特征、預(yù)后之間的關(guān)系，但相互之間具體的作用機(jī)制尚未研究清楚。

綜上所述，LncRNA BANCR在眼表鱗狀細(xì)胞癌中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與患者的病理特征與預(yù)后顯著相關(guān)，可作為眼表鱗狀細(xì)胞癌病情與預(yù)后評(píng)估的潛在生物標(biāo)志靶點(diǎn)。