王艷楠 孔德娟

內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 通遼 028000

古固樂丸是呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑，由乳香、草決明、苘麻子、五靈脂、木香、瞿麥、訶子、川楝子、梔子、苦參、沒藥十一味藥組成的復方制劑。功能：燥“協(xié)日烏素”，止痛。用于游痛癥，風濕性關(guān)節(jié)疼痛。川楝子屬理氣藥，具有舒肝、行氣、止痛、驅(qū)蟲的功效[1]，對本方的臨床療效有重要作用。川楝子的藥理作用機制為阻斷神經(jīng)肌肉接頭間的傳遞，驅(qū)蟲，抑菌[2]。市場上發(fā)現(xiàn)川楝子質(zhì)量參差不齊，為確保制劑藥效，以川楝子中主要有效成分川楝素為定量監(jiān)控指標可有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本文采用HPLC-MS/MS法測定其中川楝素的含量，方法穩(wěn)定、準確性好?？勺鳛橘|(zhì)量控制的方法。

1 儀器和材料

1.1 儀器 LCMS-8030三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀(島津公司)；甲醇為色譜純，水為高純水，乙腈為色譜純。川楝素(批號：111842-201804，含量以96.9%計，購自中國食品藥品檢定研究院)，古固樂丸(批號:20190821、20190916、20191104，呼倫貝爾市人民醫(yī)院制劑室)。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜、質(zhì)譜條件 色譜柱：Waters XBridge C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm)，流動相為乙腈-0.01%甲酸溶液(31∶69), 質(zhì)譜使用電噴霧電離源(ESI)負離子模式[3],多反應檢測(MRM)掃描方式檢測, 離子對分別為(m/z) 573/531和(m/z) 573/425,進樣量2 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取川楝素對照品0.01117 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成每1 mL含川楝素0.2165 mg的對照品貯備液；精密量取1 mL對照品貯備液，置100 mL量瓶中,加甲醇稀釋并定容至刻度，制成每1 mL含川楝素2.165 μg的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取古固樂丸，研細(過三號篩)，取粉末1.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按照古固樂丸的制備工藝制備不含川楝子的陰性對照樣品，并按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各2 μL進行測定，結(jié)果：陰性對照色譜在川楝素兩個峰保留時間處無干擾。結(jié)果見圖1。

圖1 古固樂丸的色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取配制好的對照品溶液1、2、4、6、8、10 μL分別進樣。以川楝素兩個峰面積之和為縱坐標，以對照品進樣量X(μg)為橫坐標，繪制標準曲線。川楝素進樣量在0.002165～0.02165 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為:Y=71727773.74X+1660.41，r=0.9997。

2.5 精密度試驗 取“2.2.1”項下的對照品溶液2 μL，重復進樣6次，測得川楝素兩個峰面積之和平均值為319063.5, RSD為0.6%。

2.6 重復性試驗 取供試品(20190821)古固樂丸供試品6份, 按“2.2.2”項下方法操作，測定含量。結(jié)果川楝素含量的平均值(n=6)為0.13 mg·g-1，RSD為0.4%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批號(20190821)古固樂丸供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24 h按上述色譜條件測定。測得川楝素峰面積的RSD(n=6)為0.9%。結(jié)果表明供試品溶液室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品約0.6 g，共9份，分別精密加入一定量的川楝素對照品貯備液，按“2.2.2”項下方法操作，測定含量，并計算回收率。結(jié)果見表1。川楝素平均回收率(n=9)為99.7%。

2.9 樣品測定 取古固樂丸，按上述供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜、質(zhì)譜條件測定，結(jié)果見表2。

表1 古固樂丸中川楝素的回收率

表2 古固樂丸中川楝素的含量測定結(jié)果

3 討論

本方法參考《中國藥典》2015年版一部川楝子的含量測定方法中的樣品制備及色譜條件對古固樂丸中川楝素進行分析。

質(zhì)譜條件方面，《中國藥典》2015年版一部采用的是單級四極桿質(zhì)譜檢測器，選擇性反應監(jiān)測方式，即只掃描一次母離子(m/z) 573；而本方法使用的是LCMS-8030三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀(島津公司)，多反應監(jiān)測(MRM)模式，即同時檢測兩個母離子/子離子對，分別為(m/z) 573/531和(m/z)573/425，進行含量測定，可排除更多的干擾離子，測定更為精準。

本方法樣品前處理簡單、回收率高、專屬性強，可作為古固樂丸的質(zhì)量標準，能夠有效控制樣品的質(zhì)量。