楊 靜安 康 王樹凱劉軍輝

（1河北省張家口市林業(yè)和草原局濕地和野生動物保護管理中心，河北張家口 075000；2河北北方學院醫(yī)學檢驗學院，河北張家口 075000）

非洲豬瘟（African swine fever,ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起豬的一種急性、烈性、高致死性的傳染病。臨床上以病豬發(fā)熱、皮膚發(fā)紺為主要特征，剖檢可見脾臟顯著腫大，顏色變暗，質(zhì)地變脆，淋巴結(jié)、腎、胃腸黏膜等多個器官組織明顯出血。非洲豬瘟主要感染家豬和野豬，發(fā)病豬和帶毒豬是非洲豬瘟病毒的主要傳播宿主。軟蜱是主要的傳播媒介和貯存宿主。非洲豬瘟可通過直接接觸感染豬或采食被污染的飼料、泔水、豬產(chǎn)品，接觸污染的糞便、墊料等進行傳播，也可經(jīng)軟蜱傳播。

1 我國野豬非洲豬瘟疫情發(fā)生情況

2018年11月16日，吉林省白山市渾江區(qū)一頭病死野豬的非洲豬瘟病毒核酸檢測結(jié)果呈陽性，這是我國發(fā)現(xiàn)的第1例野豬感染非洲豬瘟病毒后的疫情。2018年12月2日，黑龍江省農(nóng)墾總局北安管理局野豬養(yǎng)殖場發(fā)生非洲豬瘟疫情，存欄野豬375頭，死亡77頭。2019年2月24日，大興安嶺重點國有林管局桑都爾林場野豬養(yǎng)殖戶的豬群發(fā)生非洲豬瘟疫情，發(fā)病222頭，死亡210頭。2019年8—9月采自湖南常德地區(qū)的2頭野外野豬的血液樣品經(jīng)檢測，非洲豬瘟病毒核酸為陽性。2019年12月11日，陜西佛坪縣在3頭死亡野豬中檢出非洲豬瘟病毒。2020年3月3日，湖北省神農(nóng)架林區(qū)陽日鎮(zhèn)、松柏鎮(zhèn)發(fā)生野豬非洲豬瘟疫情，共發(fā)現(xiàn)死亡野豬7頭。

2 野豬媒介傳播非洲豬瘟病毒的模式

野豬作為野生動物宿主和傳播媒介在非洲豬瘟疫情散播中起著至關(guān)重要的作用，野豬參與非洲豬瘟病毒的傳播有以下2種方式，第一，為“野豬—軟蜱”的森林循環(huán)，在非洲，非洲豬瘟病毒感染軟蜱后，軟蜱中的病毒含量可使新生疣豬感染，新生疣豬感染后可發(fā)生短暫的病毒血癥，大約持續(xù)2～3周，期間蜱吸食新生疣豬血液后，疣豬血液中病毒的量足以使蜱感染。蜱通過叮咬再去感染其他野豬，從而形成“野豬—軟蜱”的森林循環(huán)[1]。第二，為森林循環(huán)和家豬之間的傳播方式，疣豬能否將ASFV傳染給家豬，軟蜱起到了至關(guān)重要的作用，成年疣豬可將感染的軟蜱攜帶到家豬活動區(qū)域，“疣豬—家豬”之間非洲豬瘟病毒的傳播很可能是因為家豬受到軟蜱的叮咬或采食了感染病毒的軟蜱而發(fā)生的[1]。

3 防控野豬發(fā)生非洲豬瘟疫情的措施

3.1 開展科普宣傳引導

積極開展科普宣傳，堅持正面宣傳，科學引導，多渠道、全方位廣泛宣傳非洲豬瘟的防控知識，讓群眾相信非洲豬瘟可防可控，引導公眾科學認知非洲豬瘟，營造非洲豬瘟群防群控的氛圍。

3.2 強化野豬日常監(jiān)測

野豬主要活動地點在山區(qū)，活動區(qū)域一般是以一座山頭為中心向外擴散20～30 km范圍內(nèi)，由于山區(qū)人員活動較少，野豬一旦發(fā)病很難被及時發(fā)現(xiàn)，因此，加強日常監(jiān)測對預(yù)防和控制野豬非洲豬瘟疫情至關(guān)重要。各國家級和省級陸生、野生動物疫源疫病監(jiān)測站、林場、自然保護區(qū)應(yīng)切實負起責任，安排部署監(jiān)測人員，做好野豬資源分布本底調(diào)查，對野豬出現(xiàn)頻次較高區(qū)域、野豬與散養(yǎng)家豬存在交叉接觸區(qū)域、與疫點距離不足50 km的淺山區(qū)作為重大防控風險區(qū)，加強對重大防控風險區(qū)的日常監(jiān)測。要采取人員野外巡護與儀器設(shè)備定點監(jiān)測相結(jié)合的方式，對野豬棲息地、采食點及往返路線進行嚴密監(jiān)測，細化落實各級監(jiān)測人員崗位職責，增加巡查時間，確保第一時間發(fā)現(xiàn)野豬異常情況，第一時間上報。

3.3 加強野豬人工繁育場所的監(jiān)管

開展野豬人工繁育場所檢查活動，對轄區(qū)內(nèi)野豬養(yǎng)殖企業(yè)進行普查核實登記，對野豬人工繁育場的地點、養(yǎng)殖數(shù)量、養(yǎng)殖方式（散養(yǎng)、半散養(yǎng)、圈養(yǎng)）、野外引種來源、飼喂方式、食物來源、防疫措施以及是否存在雜交親本等情況進行全面調(diào)查和登記，加強對野豬人工繁育場所的監(jiān)管，養(yǎng)豬戶應(yīng)加強飼養(yǎng)管理，提高生物安全水平，嚴禁使用泔水喂豬，禁止野豬野外散養(yǎng)與野外引種，阻斷人工繁育野豬與野生野豬接觸途徑，同時應(yīng)防止軟蜱等吸血昆蟲的叮咬，強化防疫、消毒措施，嚴防疫情傳播擴散。

3.4 做好聯(lián)防聯(lián)控工作

林業(yè)、農(nóng)業(yè)農(nóng)村、海關(guān)、市場監(jiān)管、邊防等部門應(yīng)加強協(xié)作，及時向地方政府通報轄區(qū)內(nèi)野豬監(jiān)測動態(tài)，完善聯(lián)防聯(lián)控機制。

3.5 研制安全有效的疫苗

非洲豬瘟病毒早在20世紀初已被發(fā)現(xiàn)，但是直到現(xiàn)在，還沒有研制出安全有效的疫苗來防控該病毒，主要仍是對非洲豬瘟病毒免疫保護機制的研究還不夠深入透徹。非洲豬瘟病毒粒子復(fù)雜，其基因組編碼的多種蛋白抑制宿主的免疫應(yīng)答，且編碼蛋白擁有多種免疫逃避機制，是阻礙疫苗研發(fā)的重要因素。目前研發(fā)的用于非洲豬瘟防控的主要有滅活疫苗、弱毒活疫苗、核酸疫苗、亞單位疫苗、病毒活載體疫苗等。

3.5.1 滅活疫苗

滅活疫苗指通過物理或化學方式使病原微生物喪失感染性和毒性，但保留其抗原性的一種疫苗，科研人員最先也想研制滅活疫苗來防控非洲豬瘟病毒，但大多數(shù)疫苗無免疫保護效果，利用感染ASFV的豬肺泡巨噬細胞制備的滅活疫苗，不能起到免疫保護作用[2]。Blome等[3]使用新型佐劑PolygenTM或Emulsigen?-D與滅活疫苗聯(lián)用，仍然不能產(chǎn)生中和抗體，無法提供有效的免疫保護。非洲豬瘟病毒粒子復(fù)雜，編碼眾多參與免疫調(diào)控的蛋白質(zhì)，以及病毒具有細胞內(nèi)和細胞外2種不同的感染模式，這些都可能是滅活疫苗免疫失敗的原因[4]。

3.5.2 弱毒活疫苗

弱毒活疫苗因免疫效果好、免疫期長的特點一直是科學家研究的重點。將天然弱毒株OURT 88/3免疫豬后再接種毒株OURT 88/1，可對異源毒株提供交叉保護[5]，但是接種天然弱毒株也可能使接種豬出現(xiàn)發(fā)燒、病毒血癥等副作用[6]。為了獲得免疫效果好的弱毒株，近年來，基因缺失疫苗一直是研究的重點?；蛉笔б呙缰傅氖菓?yīng)用基因操作技術(shù)，將病原微生物中與致病力有關(guān)的毒力基因敲除，使其毒力減弱，但是仍保留抗原性的一類疫苗。通過敲除與病毒毒力相關(guān)基因或者阻礙宿主免疫應(yīng)答的基因而使病毒毒力減弱是制備基因缺失疫苗的關(guān)鍵，缺失CD2v（EP402R）基因可使有毒力的BA71株毒力減弱，接種缺失BA71ΔCD2基因的病毒，不僅能抵抗親本BA71株的攻擊，也能抵抗異源性E75株的攻擊，進一步的試驗證明，這種弱毒株也可抵抗ASFV基因Ⅱ型毒株的攻擊，這提示該弱毒疫苗株對不同ASFV毒株存在交叉保護作用[7]。這為科學家研制可抵抗多種毒株感染的ASFV疫苗株提供了新的思路。有研究發(fā)現(xiàn)多基因缺失可能比單基因缺失具有更好的安全性和保護效果。同時缺失9GL和DP96R/UK的毒株相比只缺失9GL的毒株表現(xiàn)出更好的安全性和保護效果[8]。但是，也有研究表明，多基因缺失苗相對于單基因缺失苗，并不能提供更好的保護效果，例如單獨缺失MGF360/505或9GL基因制備的弱毒活疫苗，都可以很好抵抗親本強毒株的感染[9,10]，但同時缺失這2種基因，便不能提供很好的保護作用[11]。

弱毒活疫苗可以抵抗同源毒株的感染，有的對異源毒株也起到一定的交叉保護作用，但其產(chǎn)生的副作用嚴重，弱毒株在豬體內(nèi)是否會存在毒力返強，其安全性仍是制約其大規(guī)模生產(chǎn)的重要因素。

3.5.3 亞單位疫苗、核酸疫苗、病毒活載體疫苗

亞單位疫苗是利用微生物的主要保護性免疫原制成不含有核酸、能誘發(fā)機體產(chǎn)生抗體的疫苗。單獨免疫桿狀病毒系統(tǒng)表達的p30蛋白或p54蛋白，雖然可以在體內(nèi)檢測到中和抗體的存在，但是不能抵抗E75毒株的感染，而p30和p54聯(lián)用可以提供部分保護作用[12]。但是，p54、p30、p72三種蛋白聯(lián)用卻不能抵抗Malawi毒株的感染[13]。這些結(jié)果的差異可能與所使用的ASFV毒株有關(guān)。

核酸疫苗是指將含有編碼的某種抗原蛋白基因序列的質(zhì)粒載體注射到宿主體內(nèi)，使抗原蛋白在宿主體內(nèi)表達，從而誘導宿主細胞對該抗原蛋白的免疫應(yīng)答。將p54和p30串聯(lián)后與豬白細胞抗原Ⅱ的抗體可變片段融合，雖然可以誘導特異性T細胞反應(yīng)，但是無法產(chǎn)生中和抗體，也無法針對致死性的ASFV毒株產(chǎn)生保護[14]。將p54、p30及CD2v相融合，雖然在免疫豬體內(nèi)檢測到產(chǎn)生了強烈的體液免疫和細胞免疫，但是仍然不能提供保護。但是，將這3種基因與泛素融合后，卻可以針對致死性ASFV毒株產(chǎn)生部分保護作用，原因是在免疫豬體內(nèi)檢出強烈的CTL反應(yīng)，表明CD8（+）-T細胞在免疫保護中發(fā)揮著重要的作用[15]。包含其他ASFV抗原基因的DNA表達文庫，與泛素融合后制成的核酸疫苗，也只能提供部分保護。這種保護也與特異性的T細胞反應(yīng)有關(guān)[16]。鑒定更多的保護性抗原，增強特異性T細胞反應(yīng)可能是提高核酸疫苗免疫效果的可行思路。

病毒活載體疫苗是利用腺病毒、甲病毒等可以在機體內(nèi)持續(xù)復(fù)制與表達的特性，將ASFV部分抗原基因融合到病毒載體上制成的疫苗。Lokhandwala等[17]構(gòu)建了混合ASFV-P32、P54、PP62和P72抗原的腺病毒載體疫苗，可產(chǎn)生特異性抗體和CTL反應(yīng)，之后又將A151R、 B119L、 B602L、 EP402RΔPRR、 B438L、K205R、A104R等ASFV抗原基因融合到腺病毒載體上，雞尾酒式免疫豬，大量的抗體和IFN-γ+細胞反應(yīng)也被檢測到[18]。但是這些抗原基因還未進行免疫保護試驗，是否可以產(chǎn)生保護效果還需進一步驗證。

4 結(jié)語

非洲豬瘟病毒雖然不傳染人，但是其在國內(nèi)的流行，仍是威脅我國養(yǎng)豬業(yè)的頭號殺手。我國野豬數(shù)量龐大且分散，大都在山區(qū)，應(yīng)加強野豬的日常監(jiān)控，建立隔離區(qū)域，防止患病野豬與家豬接觸，此外發(fā)現(xiàn)野豬疑似病例，除了通過臨床癥狀分辨外，還應(yīng)建立快速準確的實驗室診斷方法，一旦確診，對患病豬群立即采取封鎖、隔離、撲殺、銷毀、消毒、無害化處理等強制性措施，迅速撲滅疫源，防止擴散。

疫苗的研發(fā)仍然是非洲豬瘟病毒防控的重中之重。滅活疫苗因無法產(chǎn)生相應(yīng)的中和抗體而免疫失敗，弱毒活疫苗在不同毒株交叉保護以及安全性方面存在問題，非洲豬瘟疫苗未來研究方向需鑒定更多的ASFV保護性抗原，其保護效果還需進一步驗證。不斷深入研究ASFV與宿主之間的相互作用機制以及開發(fā)疫苗新型技術(shù)，加快疫苗研發(fā)進程。