鄧衛(wèi)華，黃苑君，王敏，高路

江西省遂川縣人民醫(yī)院 （江西吉安 343900）

原發(fā)性肝癌是目前臨床上常見的惡性腫瘤，而肝細(xì)胞癌（liver cell carcinoma，LCC）是原發(fā)性肝癌中最為高發(fā)的類型[1]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國LCC 每年新發(fā)病例占全球范圍內(nèi)新發(fā)病例的50%，該病嚴(yán)重威脅我國居民的健康與安全[2]。LCC 的發(fā)生受多種因素的影響，如遺傳、病毒性肝炎、肝硬化、中毒等，近年來的高發(fā)趨勢還與環(huán)境及飲食行為的改變等相關(guān)[3]。該病早期多缺乏特異性表現(xiàn)，但隨著我國預(yù)防醫(yī)學(xué)的發(fā)展與健康體檢的推廣，在一定程度提高了該病的早期發(fā)現(xiàn)率。多層螺旋CT（multislice spiral computed tomography，MSCT）是目前診斷與評估LCC 的主要影像學(xué)手段，能夠無創(chuàng)、直觀地反映腫瘤的形態(tài)特征，同時(shí)能夠明確腫瘤病灶血管情況、病灶侵襲轉(zhuǎn)移情況等生物學(xué)特性，為診療工作的開展提供依據(jù)。本研究主要結(jié)合臨床實(shí)際病例分析LCC 64排128層螺旋CT 征象與環(huán)加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）表達(dá)和預(yù)后的相關(guān)性，以期為LCC 的診斷、治療和預(yù)后評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 取2 0 1 9 年1—6 月 我 院 收 治 的8 0 例L C C 患 者 作為研究對象，其中男51例，女29例；年齡49～71歲，平均（57.92±4.48）歲；腫瘤直徑2.1～5.3 cm，平均（3.7±0.6）cm。

納入標(biāo)準(zhǔn)：接受手術(shù)切除并經(jīng)由病理證實(shí)為LCC；術(shù)前開展螺旋CT 平掃與多期增強(qiáng)掃描檢查；未接受化學(xué)、介入等抗腫瘤治療；病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并自身免疫性疾病、感染性或傳染性疾??；患有其他類型惡性腫瘤；凝血機(jī)制異常。

1.2 方法

術(shù)中獲取患者的病理組織標(biāo)本，術(shù)后所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性緩沖甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，行連續(xù)切片，分別行病理分級、免疫組織化學(xué)染色等處理。

1.2.1 病理分級

采用Edmondson-Steiner 分級法將癌細(xì)胞分化程度分為Ⅰ～Ⅳ級，見表1。

表1 LCC 病理分級

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色

利用免疫組化Elivison 二步法，開展常規(guī)免疫組化染色，具體如下：將標(biāo)本制成切片，厚度3 μm，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；各切片加1滴3%過氧化氫溶液，于室溫環(huán)境下孵育25 min 后利用蒸餾水沖洗，置入枸櫞酸鹽乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）緩沖液中進(jìn)行高壓抗原修復(fù)，時(shí)間為5～10 min，0.01M 磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗3 次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴一抗（HIF-1α/VEGF/CD31），室溫孵育2 h，0.01M PBS 沖洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑，恒溫箱37 ℃孵育20 min，PBS 沖洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，室溫孵育30 min，PBS 沖洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴新鮮配置二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，利用顯微鏡進(jìn)行顯色控制，自來水沖洗；利用蘇木素復(fù)染，返藍(lán)，脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片、鏡檢。

對照組設(shè)計(jì)：陽性對照以LCC 陽性切片（染色結(jié)果示陽性）；陰性對照以0.01 mol/L PBS 液（染色結(jié)果示陰性）。

1.2.3 螺旋CT 檢查

由影像科工作經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師采用螺旋CT（GE 公司，型號：64排Optima660）進(jìn)行檢查，患者檢查前6 h 禁食，檢查前30 min 經(jīng)口飲用800 ml 溫水，檢查前再次飲用200 ml 溫水以充盈胃腸道，在此基礎(chǔ)上開展CT 檢查，具體如下。（1）平掃：掃描參數(shù)設(shè)置為120 kV、250～300 mA，層厚、層間隔為5～10 mm，其中層厚可結(jié)合患者具體情況調(diào)整，螺距為1.0，從膈下至髂嵴上緣進(jìn)行掃描。（2）增強(qiáng)掃描：靜脈注射800～100 ml 的非離子碘對比劑碘海醇，速度控制在3.0～4.0 ml/s，于動脈期（25～30 s）、門脈期（50～60 s）和實(shí)質(zhì)期（90～120 s）進(jìn)行三期掃描。

1.3 臨床評價(jià)

（1）不同病理分級LCC 患者VEGF、COX-2表達(dá)情況分析。由實(shí)驗(yàn)者及兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師按統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)完成，陽性染色即胞漿出現(xiàn)棕色顆粒，采用×400高倍鏡隨機(jī)選擇染色密集區(qū)的5個(gè)視野進(jìn)行觀察，各視野計(jì)分為陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞率各得分之和。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度分值范圍0～3分，其中0分表示無染色，3分表示強(qiáng)染色；陽性細(xì)胞率分值范圍0～3分，0分為<5%，1分為5%～25%，2分為26%～50%，3分為>50%。最終評分為5個(gè)視野的均值，其中陰性為0～2分，陽性為3～6分（依據(jù)分值劃分輕度、中度、重度）。（2）LCC 患者CT 征象與總生存時(shí)間（overall survival，OS）及VEGF、COX-2表達(dá)情況分析。螺旋CT 檢查結(jié)果由兩名放射科醫(yī)師判定，兩人意見一致的情況下有效，主要就腫瘤直徑、假包膜情況、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及強(qiáng)化類型等進(jìn)行觀察，其中依據(jù)平掃基礎(chǔ)CT 值增加幅度進(jìn)行強(qiáng)化程度評估，輕度為<20 HU，一般為20～40 HU，明顯為>40 HU，同時(shí)對所有患者進(jìn)行臨床隨訪，明確OS，即確診至死亡或末次隨診時(shí)間，遺漏值為至末次隨訪時(shí)死亡患者或隨訪期間失訪者。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 不同病理分級LCC 患者VEGF、COX-2表達(dá)情況分析

80例LCC 患 者 中，VEGF 陽 性 表 達(dá) 患 者44例（55.00%），陽性表達(dá)的標(biāo)本細(xì)胞漿中可見棕黃色顆粒；COX-2陽性表達(dá)患者58例（72.50%），陽性表達(dá)的標(biāo)本胞核無著色，細(xì)胞漿呈現(xiàn)黃褐色斑片狀或顆粒狀。Ⅰ、Ⅱ級病理分級患者VEGF 及COX-2陽性率與Ⅲ、Ⅳ級比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 LCC 患者CT 征象與OS 及VEGF、COX-2表達(dá)情況分析

CT 掃描結(jié)果中腫瘤形態(tài)不規(guī)則、CT 增強(qiáng)掃描明顯強(qiáng)化、合并侵襲轉(zhuǎn)移及病理分級Ⅲ、Ⅳ級患者的COX-2及VEGF陽性率高于腫瘤形態(tài)規(guī)則、CT 增強(qiáng)掃描輕度/不均勻強(qiáng)化、無侵襲轉(zhuǎn)移及病理分期Ⅰ、Ⅱ級，且前者OS 短于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表1 不同病理分級LCC 患者VEGF、COX-2表達(dá)情況分析[例（%）]

表2 LCC 患者CT 征象與OS 及VEGF、COX-2表達(dá)情況分析

3 討論

近年來，LCC 的發(fā)病率逐漸升高，臨床上針對該病患者的治療以手術(shù)為主，輔以放化療、基因療法、生物療法等干預(yù)，通過開展符合患者個(gè)體化特征的綜合療法治療，以降低腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，改善預(yù)后，從而延長患者的生存期[4-5]。由于LCC 是實(shí)體腫瘤，內(nèi)部血管豐富，而豐富的血管組織為腫瘤細(xì)胞的生成、增殖與轉(zhuǎn)移過程提供了基礎(chǔ)，所以LCC 具有較高的致死風(fēng)險(xiǎn)[6]。VEGF 為特異度、作用效果均最強(qiáng)的促血管生長因子，通過促進(jìn)血管生長，為腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移提供充足的血液供應(yīng)，誘發(fā)惡性腫瘤的復(fù)發(fā)，是目前公認(rèn)大部分惡性腫瘤的誘發(fā)因子[7]。COX主要參與機(jī)體炎性改變的調(diào)節(jié)，COX-2是其亞型之一，活躍度較高，會因生長因子、細(xì)胞因子等刺激作用呈現(xiàn)高表達(dá)，而COX-2及產(chǎn)物會通過VEGF 蛋白造成血管生成因子的高表達(dá)，繼而對腫瘤病灶的血管、淋巴管的生成發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[8]。因此，部分專家認(rèn)為COX-2、VEGF 的表達(dá)與LCC 的發(fā)展及預(yù)后直接相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，Ⅰ、Ⅱ級病理分級患者VEGF 及COX-2陽性率與Ⅲ、Ⅳ級比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；CT 掃描結(jié)果中腫瘤形態(tài)不規(guī)則、CT 增強(qiáng)掃描明顯強(qiáng)化、合并侵襲轉(zhuǎn)移及病理分級Ⅲ、Ⅳ級患者的COX-2及VEGF 陽性率高于腫瘤形態(tài)規(guī)則、CT 增強(qiáng)掃描輕度/不均勻強(qiáng)化、無侵襲轉(zhuǎn)移及病理分期Ⅰ、Ⅱ級，且前者OS 短于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述，MSCT 征象進(jìn)行腫瘤形態(tài)、強(qiáng)化、侵襲轉(zhuǎn)移、病理分期的評估結(jié)果，與VEGF、COX-2表達(dá)情況及OS 時(shí)間存在顯著相關(guān)性，能夠?yàn)樵\療及預(yù)后評估提供可靠依據(jù)。