劉 影，沈景剛，劉 倩，張學(xué)玲，孫大鵬

白癜風(fēng)是由于局限性或廣泛性黑素細(xì)胞功能障礙而表現(xiàn)出的全身色素脫落斑的一種常見(jiàn)的色素脫落性皮膚病[1]。目前其在中國(guó)的發(fā)病率為0.17%～1.00%，且以青少年居多[2]。關(guān)于白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制目前尚無(wú)完善的機(jī)制闡明，但大量報(bào)道表明白癜風(fēng)作為一種自身免疫性疾病，其發(fā)病及進(jìn)展可能與機(jī)體免疫功能、遺傳等因素相關(guān)[3-5]。以CD3+為共有標(biāo)志的一類T細(xì)胞及以CD4+、CD8+為特有標(biāo)志的另一類T細(xì)胞是免疫細(xì)胞的主要成分，通過(guò)與T細(xì)胞亞群相互作用穩(wěn)定免疫系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡，上述指標(biāo)的變化可能影響自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展[6]。另外，有學(xué)者指出將近20%的白癜風(fēng)患者繼發(fā)自身免疫性甲狀腺疾病[7]。本研究選取2016年1月至2019年6月在連云港市第二人民醫(yī)院治療的白癜風(fēng)患者177例作為觀察組，同時(shí)選取健康志愿者100例作為對(duì)照組，對(duì)比分析2組可溶性白細(xì)胞介素-2受體(sIL-2R)、CD3+、CD4+、CD8+、游離三碘甲腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)和促甲狀腺素(TSH)水平的差異，旨在確定白癜風(fēng)與自身免疫性甲狀腺疾病的關(guān)系，為白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制的深入研究提供指導(dǎo)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2019年6月在連云港市第二人民醫(yī)院治療的白癜風(fēng)患者177例(觀察組)，其中分期：進(jìn)展期93例，穩(wěn)定期84例；分型：尋常型156例，節(jié)段型21例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)診斷符合《白癜風(fēng)臨床分型及療效標(biāo)準(zhǔn)》中的標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡在18歲以上；(3)患者及家屬知情同意并通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤等其他基礎(chǔ)性疾病；(2)合并有人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)等感染。同時(shí)選取健康志愿者100例作為對(duì)照組。觀察組和對(duì)照組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞免疫功能檢測(cè) 空腹采集所有受檢者外周靜脈血3～4 ml于BD Vacutainer EDTA采血管中，混勻加入20 μl的BDMultitest CD3/CD8/CD4和BD Multitest CD3/CD16+56/CD19，與50 μl的抗凝全血充分混合并振蕩混勻，室溫條件下避光孵育15 min。再向試管中加入450 μl BD溶血素，振蕩混勻后同上條件孵育15 min待檢。采用由美國(guó)BD公司購(gòu)入的BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3+、CD4+、CD8+，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

表1 觀察組和對(duì)照組一般資料比較

1.2.2 FT3、FT4、TSH檢測(cè) 空腹采集所有受檢者外周靜脈血3～4 ml置于未加抗凝劑的真空采血管中，室溫下4 000 r/min離心分離得到血清，離心半徑r=30 cm，放置到-20 ℃凍存待測(cè)。采用羅氏Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析利用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)FT3、FT4、TSH水平，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.3 sIL-2R測(cè)定 采用雙抗體夾心ELISA法。試劑盒由北京邦定生物醫(yī)學(xué)公司提供。操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)或百分比表示，組間比較使用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組和對(duì)照組sIL-2R、免疫功能、甲狀腺功能比較

觀察組CD4+T淋巴細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，而sIL-2R、CD8+T淋巴細(xì)胞和TSH水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.2 觀察組不同分期患者sIL-2R、免疫功能、甲狀腺功能比較

觀察組進(jìn)展期患者CD4+T淋巴細(xì)胞水平明顯低于穩(wěn)定期患者(P<0.05)，而sIL-2R水平明顯高于穩(wěn)定期患者(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 觀察組和對(duì)照組sIL-2R、免疫功能、甲狀腺功能比較(x±s)

表3 觀察組不同分期患者sIL-2R、免疫功能、甲狀腺功能比較(x±s)

2.3 觀察組不同分型患者sIL-2R、免疫功能、甲狀腺功能比較

觀察組尋常型患者sIL-2R 、TSH水平明顯高于節(jié)段型患者(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 觀察組不同分型患者sIL-2R、免疫功能、甲狀腺功能比較(x±s)

3 討論

白癜風(fēng)可見(jiàn)于各種族人群發(fā)生，尤以深膚色人種為主，是以廣泛性或局限性皮膚白斑及周圍皮膚比正常皮膚色素增加而呈現(xiàn)的邊界清晰的白斑的常見(jiàn)性色素脫落性皮膚病。其好發(fā)于青少年，約1/4的白癜風(fēng)患者為<14歲的兒童[8]，病程長(zhǎng)，易診斷。目前僅以控制皮損進(jìn)程或范圍為主要治療目的，尚未發(fā)現(xiàn)治愈方法。有研究報(bào)道，近年來(lái)，人們?cè)絹?lái)越重視黑素細(xì)胞的生物學(xué)和免疫學(xué)功能在白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制中的作用[9-10]。白癜風(fēng)發(fā)病因素復(fù)雜，主要包括：黑色素自身破壞、遺傳、環(huán)境、神經(jīng)化學(xué)等。但大量流行病學(xué)和臨床資料支持白癜風(fēng)的自身免疫理論。免疫主要是T淋巴細(xì)胞在體內(nèi)或局部發(fā)揮的特異性免疫效應(yīng)而引起的細(xì)胞損傷或破壞。CD3+是T淋巴細(xì)胞所共有的標(biāo)志，CD4+、CD8+是一類T淋巴細(xì)胞的特有標(biāo)志，以上2種T細(xì)胞共同構(gòu)成細(xì)胞免疫的主要成分，調(diào)節(jié)免疫功能[11]。有研究報(bào)道，穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者及其一級(jí)家屬外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞水平顯著提高，并伴有CD4+/CD8+比值升高[12]。但也有學(xué)者得到相反結(jié)論[13]。本研究結(jié)果顯示，白癜風(fēng)患者外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞水平較健康人顯著下降，而CD8+T淋巴細(xì)胞顯著增多。這說(shuō)明，細(xì)胞免疫的確在白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。有學(xué)者報(bào)道，白癜風(fēng)患者外周血中有針對(duì)T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的相關(guān)物質(zhì)酪氨酸酶等的特異性反應(yīng)，且外周血中黑素細(xì)胞中的CD8+T細(xì)胞以高頻率特異性作用，從而清除破壞黑素細(xì)胞[14]。由此推測(cè)，CD8+T淋巴細(xì)胞水平的異常升高可誘導(dǎo)黑素細(xì)胞的損傷和破壞介導(dǎo)白癜風(fēng)疾病的發(fā)生發(fā)展。本研究進(jìn)一步對(duì)病情不同時(shí)期的白癜風(fēng)患者分型，發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者外周血中CD4+水平顯著低于穩(wěn)定期患者。這說(shuō)明患者細(xì)胞免疫狀況與疾病的進(jìn)展程度密切相關(guān)。其原因可能為，疾病進(jìn)入進(jìn)展期時(shí)，抗原可刺激T細(xì)胞并誘導(dǎo)具有接受抗原信號(hào)的CD4+激活分化為T(mén)h、Td等細(xì)胞，同時(shí)具有抑制T細(xì)胞功能和細(xì)胞標(biāo)記功能的CD8+T淋巴細(xì)胞不斷增殖增加，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值減小，導(dǎo)致免疫功能紊亂，進(jìn)一步刺激Th、Td的大量分泌，誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖，并分泌大量具有抗黑素細(xì)胞功能的自身抗體等，最終導(dǎo)致黑素細(xì)胞的損傷和破壞。

sIL-2R是由活化淋巴細(xì)胞釋放至血液循環(huán)的多肽鏈，可反映某一組織免疫細(xì)胞活性強(qiáng)弱，是循環(huán)中單個(gè)核細(xì)胞活化強(qiáng)度的敏感指標(biāo)。有研究報(bào)道白癜風(fēng)患者治療前及進(jìn)展期血清sIL-2R水平顯著高于健康志愿者[15]。本研究結(jié)果顯示，觀察組sIL-2R水平較對(duì)照組顯著升高，且進(jìn)展期白癜風(fēng)患者血清sIL-2R水平顯著高于穩(wěn)定期患者。與既往研究報(bào)道結(jié)果一致，再次肯定sIL-2R在白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制中的作用。本研究在既往研究報(bào)道的基礎(chǔ)上還發(fā)現(xiàn)尋常型患者sIL-2R明顯高于節(jié)段型患者(P<0.05)，可為白癜風(fēng)臨床病理分型的診斷提供依據(jù)。

大量文獻(xiàn)報(bào)道白癜風(fēng)患者常繼發(fā)自身免疫性甲狀腺疾病[16]，但關(guān)于白癜風(fēng)患者的血清甲狀腺激素水平的報(bào)道結(jié)論不一。有學(xué)者認(rèn)為白癜風(fēng)患者FT3、FT4水平顯著升高，TSH水平顯著下降[17-18]。而另有學(xué)者通過(guò)測(cè)量106例白癜風(fēng)患者甲狀腺激素水平發(fā)現(xiàn)，16例TSH升高，僅有3例TSH下降。TSH是反映甲狀腺功能狀態(tài)的靈敏指標(biāo)，其水平超過(guò)正常值則提示甲狀腺功能損傷。本研究結(jié)果顯示，尋常型TSH水平顯著高于節(jié)段型。這說(shuō)明白癜風(fēng)患者發(fā)病過(guò)程中伴隨甲狀腺功能的改變且尋常型白癜風(fēng)與自身免疫性甲狀腺疾病的關(guān)系更為密切?？赡茉蚴枪?jié)段型以神經(jīng)節(jié)段為特征，其他更可能的原因是與神經(jīng)化學(xué)因素有關(guān)。本研究并未發(fā)現(xiàn)CD3+、CD8+、FT3、FT4水平與白癜風(fēng)類型和病情的關(guān)系。

綜上所述，白癜風(fēng)患者免疫功能及甲狀腺功能明顯紊亂，與疾病分型、分期有一定關(guān)系。本研究創(chuàng)新處在于確定免疫功能和甲狀腺激素水平在白癜風(fēng)自身免疫性機(jī)制中的作用，且明確CD3+T細(xì)胞/游離甲狀腺素水平與疾病嚴(yán)重程度/疾病分型的相關(guān)性，為診斷的精確性提供依據(jù)，深化了白癜風(fēng)的自身免疫理論，具有重要作用。