王賽楠

（北京北方生物技術研究所有限公司，北京 100076）

《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》已經(jīng)于2011年3月1日實施，GMP第七章 第一百四十三條規(guī)定：制藥企業(yè)的生產(chǎn)設備應制定詳細的使用和清潔操作規(guī)程，清潔操作規(guī)程應當規(guī)定具體而完整的清潔方法、清潔用設備或工具、清潔劑的名稱和配制方法。清潔方法應當經(jīng)過驗證，證實其清潔效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗證應當綜合考慮設備使用情況，所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置，殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗方法的靈敏度等因素[1]。

體外診斷試劑現(xiàn)有的清潔驗證方法，大多采用化藥的清潔驗證模式，既將抗原或抗體作為目標殘留物。但是體外診斷試劑的基質(zhì)多數(shù)為小牛血清或含有牛血清白蛋白的緩沖液，這兩種基質(zhì)成分具有多樣性、未知性，而且抗原抗體的成分含量低等特點，只單一的測定抗原抗體的殘留量并不能體現(xiàn)出清潔的程度。現(xiàn)有的體外診斷試劑清潔驗證目前主要存在兩大問題:第一，只檢測殘留物中的抗原抗體等含量，該方法只能證明檢測成分清潔程度，不能證明設備上未知成分的清潔程度；第二，現(xiàn)有的檢測方法達不到所需的精度要求，誤差較大。考慮到體外診斷試劑主要成分都是有機物，因此將標準品凍干粉末做為活性成分，采用TOC法完成清潔驗證。

1 “C”碳含量的測定

在我單位某產(chǎn)品中，其主要成分為抗原，牛血清白蛋白，以及無機鹽等，我們無法根據(jù)分子式計算出其中”C”碳含量的百分比。通過查詢資料，發(fā)現(xiàn)目標物的濃度和TOC值之間的關系，公式為:A = (XTOC － 4σ)/C。式中，A 代表目標物質(zhì)碳百分含量;XTOC 為 TOC 結(jié)果平均值;σ 標準偏差;為保證清潔驗證結(jié)果可靠，選取較為嚴格的 4σ 下線區(qū)間進行計算;C 為目標物質(zhì)濃度。[2]通過測量多份產(chǎn)品的TOC值，可以根據(jù)上面的公式計算出其中碳含量。

2 確定殘留物的可接受標準

在驗證清洗過程時，要核實確保對沖洗水中的殘留物或污染物進行直接測量。只是簡單檢測沖洗水的質(zhì)量而不檢測潛在的污染物的做法是不被認可的[3]。

（一）目前制藥業(yè)普遍接受的限度標準[4]：①微粒濃度：以目檢為依據(jù)的限度，如不得有可見的殘留物。（4 ug/ cm2的結(jié)果是可接受的）；②分析檢測濃度：10ppm (1/1000 000) ；③生物活性的限度：正常治療劑量的1/1000。

（二）因體外診斷試劑不會進入人體內(nèi)，所以確定可接受標準為10ppm，既待清除產(chǎn)品（X）在后續(xù)產(chǎn)品中（Y）出現(xiàn)不超過 10mg·kg-1。假設，我們下一批產(chǎn)品為Y，產(chǎn)量為4kg，則在下一批產(chǎn)品中的X的含量不能超過40mg。采取棉簽擦拭法取樣，殘留限度（C）=總殘留/總接觸面積，單位為(mg/100cm2)。每100cm2的面積上殘留物用VL純化水溶解，得到最低殘留限度D=C/V。

（三）根據(jù)目標物質(zhì)碳百分含量，即可得到清潔驗證TOC 限度值E（mg/L）= D*A 。式中:E代表清潔驗證 TOC限度值；A 代表目標物質(zhì)碳百分含量。

3 棉簽擦拭法回收率的計算

操作方法：將已知濃度的殘留物溶液以受控的方式涂布在材質(zhì)試樣上，自然晾干，采用清潔驗證方案中的相同的擦拭方法進行取樣。選用合適的溶劑提取拭子上的殘留，然后檢測提取液中殘留物的數(shù)量。回收量與材質(zhì)試樣上的加入量之比就是取樣百分回收率。

實施次數(shù)：至少需要兩個人進行，每人需要重復三次。

結(jié)果：任意一個擦拭取樣人員的最低平均回收率最為棉簽擦拭法的回收率。

可接受標準：回收率≥50%，重現(xiàn)性RSD≤20%。

因為 TOC法屬于非專屬性檢測法，通過檢測水中有機碳的含量來推測水中有機物雜質(zhì)的含量，這種方法被廣泛應用于清潔驗證中，而且 TOC 檢測方法具有省時，省力，節(jié)能減排的優(yōu)勢。它表征所有有機物的污染程度，為清潔驗證提供了有力的安全性和可靠性保障。