徐 錦

（浙江省諸暨市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，浙江 諸暨 311800）

綠毛藻（Chlorodesmis Harvey）水鱉科植物，是一種優(yōu)質(zhì)、速生、高產(chǎn)的沉水植物，廣泛分布于我國(guó)淡水水域中，含有許多結(jié)構(gòu)新穎和生理活性顯著的化學(xué)成分。在對(duì)浙江省內(nèi)水藻進(jìn)行的抗腫瘤和抗炎活性篩選中，綠毛藻都表現(xiàn)出良好的生物活性。本文對(duì)采自浙江省諸暨市的綠毛藻70%乙醇提取物化學(xué)成分進(jìn)行了研究，其中分離得到5個(gè)化合物，分別鑒定為β-谷甾醇（A），葉綠醇（B），對(duì)羥基苯甲醛（C），3-吲哚甲醛（D），膽甾-5-烯-3β，7α二醇（E）。應(yīng)用人腫瘤細(xì)胞株HCT-8，Bel-7402，BGc-823，A549和HELA模型對(duì)化合物活性進(jìn)行篩選，本文對(duì)綠毛藻開(kāi)發(fā)抗腫瘤前導(dǎo)化合物提供依據(jù)。

1 材料、儀器及試劑

綠毛藻2019年7月采集于浙江省諸暨市，由浙江農(nóng)林大學(xué)植物學(xué)白尚斌教授鑒定，標(biāo)本編號(hào)：JY2019-152保存在浙江農(nóng)林大學(xué)暨陽(yáng)學(xué)院中藥學(xué)專(zhuān)業(yè)研究室。

顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度未校正）；三用紫外分析儀；傅立葉變換紅外光譜儀（IMPAC-500型）；核磁共振譜儀（TMS為內(nèi)標(biāo)）；質(zhì)譜儀；凝膠SephadexLH- 20；柱色譜硅膠和薄層色譜硅膠GF254。所用試劑為杭州市華東醫(yī)藥試劑廠(chǎng)分析純和色譜純產(chǎn)品。

2 提取分離

干綠毛藻（10 kg）粉碎得干粉，用70%的乙醇水混合溶液回流提取3次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮得浸膏。然后，將浸膏用超聲水浴鍋分散于水中。用3倍量的乙酸乙酯進(jìn)行萃取分離，合并萃取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得到浸膏300 g。用硅膠柱色譜梯度洗脫，以正己烷-乙酸乙酯為流動(dòng)相，TLC檢視合并。應(yīng)用正己烷-丙酮（50∶1）梯度洗脫，重結(jié)晶得單體A（300 mg）和B（50 mg）；正己烷-丙酮（30∶1）洗脫得到單體D（300 mg）。正己烷-丙酮（2∶1）洗脫組分得到單體C（20 mg）。正己烷-丙酮（2∶1）洗脫組分經(jīng)分離得到單體E（100 mg）。

3 確定結(jié)構(gòu)

單體A淡黃色固體（丙酮）；mp:137-139℃；EI-MS m/z[M]+= 414.12；該單體1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）和13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）圖譜與文獻(xiàn)[2]報(bào)道的數(shù)據(jù)相符合，確定為β-谷甾醇。

單體B無(wú)色淺油狀物；EI-MS m/z [M]+= 296.32；該單體1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）和13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）圖譜與文獻(xiàn)[3]報(bào)道的的數(shù)據(jù)相符合，確定為葉綠醇。

單體C黃色晶體（丙酮）；mp 114-116℃，EI-MS m/z[M]+= 122；該單體1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）圖譜與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的數(shù)據(jù)相符合，確定單對(duì)羥基苯甲醛。

單體D針晶（氯仿）；mp 196-198℃；EI-MS m/z [M]+= 145；其1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）和13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）圖譜與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的數(shù)據(jù)相符合，確定為3-吲哚甲醛。

單體E白色晶體（氯仿）；mp:196-198℃；EI-MS m/z [M]+= 402；1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）δ:0.71（3 H，s），0.86（6 H，m），0.95（3 H，d，J = 6.0 Hz），0.98（3H，s），2.99（1 H），3.40（1 H，m），3.68（1 H），3.74（1 H，m），5.52 （1 H，d，J = 5.5Hz）。13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）δ: 37.9 ，32.4，71.3，42.8，145.6，125.4，65.1，38.7，43.2，38.0，21.5，40.2，43.0，50.3，24.8，29.0，57.0，12.0，19.2，36.7，18.6，37.0，24.5，40.3，28.7，23.0，22.8。與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的數(shù)據(jù)相符合，確定化為膽甾-5-烯-3β，7α二醇。

4 抗腫瘤活性篩選

采用MTT法[7]對(duì)從綠毛藻中所得的5個(gè)單體A、B、C、D、E，應(yīng)用人腫瘤細(xì)胞株HCT-8，Bel-7402，BGc-823，A549和HELA模型對(duì)化合物活性進(jìn)行篩選。結(jié)果病名單體E有良好的體外藥理活性，IC50（μg/ml）分別為2.70，3.12，2.5，2.02和2.90。本文研究結(jié)果對(duì)綠毛藻開(kāi)發(fā)抗腫瘤前導(dǎo)化合物提供依據(jù)。