陳曉雨 ，于學(xué)祥 ，孫 琪 ，庫旭鋼 , ，范盛先 ，何啟蓋 , ＊

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430070；2.農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室，武漢 430070；3.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物疫病診斷中心檢測實驗室，湖北 武漢 430070）

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種急性、熱性和高度接觸性傳染病，俗稱“爛腸瘟”，在自然條件下只感染豬，豬群普遍易感，四季均發(fā)，其中保育豬群春季最為易感，在防疫條件落后的養(yǎng)豬場中有較高的流行趨勢。急性以出血性敗血癥為特征，發(fā)病率和病死率高，慢性以纖維素性壞死性腸炎為特征，發(fā)病周期長且反復(fù)發(fā)作。豬瘟最常見的暴發(fā)原因是引種時引入處于潛伏期的病豬，該病暴發(fā)時致死率極高，給養(yǎng)豬業(yè)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失[1]。

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Hps）引起的一種以多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎為特征的傳染病[2]。副豬嗜血桿菌是正常豬群上呼吸道的一種常在共棲菌，目前至少分為15種血清型，我國以血清4型（Hps-4）和5型（Hps-5）為主。該病原菌可存在于豬群的各個年齡階段，多見于5～8周齡，且發(fā)病率高、死亡率高、傳染性強，與多種細(xì)菌或病毒具有協(xié)同致病作用，常與病毒性疾病、免疫抑制性疾病混合感染，從而加重豬群病情，給治療工作帶來了更多的困難。

豬蛔蟲病是由豬蛔蟲寄生于豬小腸引起的一種線蟲病。蟲卵隨糞便排出后，經(jīng)飼料或飲水被吞食，由胃依次移行至小腸引起腹痛，至肝臟形成蛔蟲斑，至肺和氣管表現(xiàn)為咳嗽，后隨黏液進(jìn)入口腔，再次被咽下到達(dá)小腸，最終隨糞便排出體外，成蟲分泌的毒素可作用于中樞神經(jīng)和血管并引起一系列神經(jīng)癥狀[3]。該病在營養(yǎng)不良的豬群和衛(wèi)生環(huán)境較差的豬場感染率較高，主要危害3～5月齡的仔豬，病情嚴(yán)重時可形成“僵豬”甚至引起死亡，對養(yǎng)豬業(yè)危害極大。

文章就湖北某商品豬場因多批次引種仔豬造成保育豬只發(fā)病的案例進(jìn)行診斷分析，提出了隔離消毒、藥物治療、精細(xì)飼養(yǎng)和科學(xué)管理的防控措施，就加強生物安全建設(shè)，優(yōu)化養(yǎng)殖管理，實現(xiàn)生產(chǎn)質(zhì)量可控提供了可操作性的建議，并為豬場豬瘟病毒和副豬嗜血桿菌混合感染的防控提供一定的參考依據(jù)。

1 病例基本情況

1.1 豬場背景

2019年11月底，湖北省某商品豬場前后引種不同批次仔豬，引種后部分保育豬只采食量下降有厭食或者不食現(xiàn)象，逐漸消瘦，被毛粗亂無光澤；臥地不起，有劃水樣神經(jīng)癥狀；伴有呼吸困難，咳喘等呼吸道癥狀，出現(xiàn)癥狀后幾天死亡，損失約100頭。

1.2 剖檢變化

選取2頭典型發(fā)病豬剖檢，剖檢可見回盲瓣腸壁不光滑，有結(jié)節(jié)，呈紐扣狀腫（圖1a、圖1b），其中1頭肝臟有包囊和移行痕跡（圖1c），大腸可見蛔蟲（圖1d），肺部可見大量纖維性滲出物（圖1e、圖1f）。根據(jù)剖檢情況初步懷疑是經(jīng)典豬瘟引起的呼吸道細(xì)菌性疾病，并伴隨寄生蟲感染。

2 實驗室檢測

2.1 病毒性病原檢測

分別將2頭發(fā)病豬組織（扁桃體、淋巴結(jié)、氣管、肺臟、脾臟等健康部位與病變部位的交界處）合并處理于2 mL EP管中，用眼科剪剪碎，加入約1 mL滅菌PBS，于勻漿器進(jìn)行組織研磨，反復(fù)凍融3次，離心取上清液，利用病毒核酸提試劑盒進(jìn)行核酸提取，使用PCR方法檢測豬瘟病毒（CSFV）[4]、偽狂犬病病毒（PRV）[5]、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）[6]和豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）[7]。所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，詳細(xì)序列見表1。

表1 PCR引物序列

檢測結(jié)果顯示，可在發(fā)病豬只中檢測到CSFV核酸（圖2、圖3）。通過對豬瘟病毒基因測序分析，該場感染的豬瘟病毒與CSFV-HZ1-08屬于同一分支，為野毒株，屬于2.1亞型。此次基因測序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

2.2 細(xì)菌分離鑒定

無菌采取2頭病豬氣管、肺臟病變組織和腦積液，分別接種于含血清和NAD的TSA培養(yǎng)基平皿上，37 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)，結(jié)果可見TSA培養(yǎng)基上長出針尖大小、光滑濕潤的無色透明菌落，根據(jù)菌落形態(tài)特點初步懷疑其為副豬嗜血桿菌，挑取單個疑似致病菌落進(jìn)行分離純化培養(yǎng)。使用煮沸法制備模板，采用PCR方法檢測鏈球菌（SS）[8]、副豬嗜血桿菌（Hps）[9]、胸膜肺炎放線桿菌（App）[9]、支氣管敗血波氏桿菌（Bb）[9]、多殺性巴氏桿菌（Pm）[10]，隨后并利用多重PCR方法確定其血清型。所用引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，詳細(xì)序列見表2。

表2 PCR引物序列

檢測結(jié)果顯示，剖檢發(fā)病豬只在氣管和肺臟中檢出Hps，經(jīng)血清型鑒定為血清4型（見圖4）。

2.3 藥敏試驗

為降低細(xì)菌性疾病導(dǎo)致的豬只死亡，將培養(yǎng)好的Hps-4涂布于含血清和NAD的TSA平板，利用紙片瓊脂擴散法（K-B法）開展藥敏試驗，37 ℃厭氧培養(yǎng)24 h，觀察到部分藥敏紙片周圍形成十分明顯的抑菌圈。測量抑菌圈大小，依據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）判定標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)分離出的Hps-4對強力霉素及頭孢類藥物高度敏感，對阿莫西林、氧氟沙星等不敏感。

3 疾病診斷

根據(jù)病理剖檢和實驗室檢測，確定該發(fā)病豬場是由于感染CSFV繼發(fā)感染Hps-4，并伴隨寄生蟲感染導(dǎo)致此次疫情。其中神經(jīng)癥狀為蛔蟲幼蟲移行及蟲體釋放毒素所引起。

4 防控方案

根據(jù)診斷情況及豬場的具體問題，為降低豬群死亡率，挽回豬場經(jīng)濟(jì)損失，控制疫情，給出如下建議。

4.1 隔離免疫

1）隔離或淘汰發(fā)病豬，避免疫情擴散，無害化處理病死豬，疫情期間污染的地方可每天使用戊二醛癸甲溴銨溶液進(jìn)行噴霧消毒，亦可采用火焰噴燈噴射豬舍地面、走廊及墻壁，并加強料槽、水槽等用具的洗刷消毒，消毒后要通風(fēng)干燥。

2）保育豬群實施拌料給藥，推薦強力霉素連續(xù)用藥5 d，觀察效果適時停藥。針對發(fā)病豬只肌注頭孢類藥物治療，連續(xù)注射3 d，觀察效果。

3）制定疫苗免疫計劃，緊急免疫豬瘟兔化疫苗，疫情穩(wěn)定后保育豬免疫副豬嗜血桿菌滅活疫苗。

4）建議使用阿維菌素類藥物驅(qū)蟲，推薦使用劑量為粉劑、片劑和注射劑0.3 mg/kg體重，澆潑劑0.4 mg/kg體重。

4.2 飼養(yǎng)管理

1）提供優(yōu)質(zhì)飼料飲水，保證舍圈干凈干燥，勤通風(fēng)勤換氣，舍圈、用具、飲水和周圍環(huán)境等定期消毒，避免人員串欄走動，注意飼養(yǎng)密度，減少豬群應(yīng)激；

2）及時清理豬舍糞便，糞便和墊草應(yīng)在固定地點堆集，阻斷寄生蟲的傳播；

3）嚴(yán)格實行全進(jìn)全出，減少引種次數(shù)，一次性引種，禁止異源豬群混養(yǎng)，豬轉(zhuǎn)欄后應(yīng)清欄消毒，保證豬舍干燥整潔，空欄7 d后可引進(jìn)下批次豬群；

4）嚴(yán)格控制犬、貓、鳥、鼠類等進(jìn)入豬場，并建立科學(xué)合理的生物安全體系。

5 防控效果跟蹤

從方案實施后，連續(xù)一個月觀察豬群健康動態(tài)，每周統(tǒng)計新發(fā)病例及轉(zhuǎn)歸病例，評價方案效果。經(jīng)過一個月的跟蹤回訪，該場豬只病情恢復(fù)穩(wěn)定，說明該方案有效可行，可借鑒于豬瘟混合感染呼吸系統(tǒng)細(xì)菌性疾病的防控，也可為類似病例防控方案的擬定提供經(jīng)驗性建議。

6 討論

我國是世界上養(yǎng)豬最多的國家，由于現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)規(guī)模和飼養(yǎng)密度加大，豬傳染病的發(fā)生越來越頻繁，病因也越來越復(fù)雜，尤其是豬的病毒性疾病給豬場帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。病毒入侵機體后，破壞免疫系統(tǒng)，降低防御功能，更易繼發(fā)細(xì)菌感染，因而養(yǎng)殖生產(chǎn)中多以混合感染和繼發(fā)感染為主，同時這也說明做好病毒性疾病的控制將有助于豬只降低被細(xì)菌性疾病感染的風(fēng)險。

細(xì)菌性疾病防控的三大難點是血清型多，針對性防控效果差；條件性或環(huán)境性致病，持續(xù)致?。黄毡槟退幮詮奫11]，眾所周知，抗生素是治療細(xì)菌感染性疾病的首選藥物，然而養(yǎng)殖生產(chǎn)中抗生素濫用現(xiàn)象普遍存在，這加速了病原菌耐藥性的出現(xiàn)，進(jìn)而限制了藥物治療的效果。于2020年開始，我國將在飼料中全面禁止使用抗生素，所以細(xì)菌性病原的疫苗防控將尤為重要。

病毒性疾病防控存在著毒力增強、多病毒性病原混合感染、流行季節(jié)和周期不明顯的流行現(xiàn)狀，目前主要依靠疫苗保護(hù)，但疫苗免疫只能減少而不能阻止病毒進(jìn)入機體或消滅已存在的病毒，其防控效果并不能滿足養(yǎng)殖市場的需要，無法實現(xiàn)疾病的綜合防控，因此生物安全防控是畜牧業(yè)疫病防控的大趨勢，同時疫苗免疫時要制定合理的免疫程序，接種適合本場的疫苗，評估免疫效果，并在免疫效果不理想時考慮使用抗病毒藥物進(jìn)行保健[12]。

生物安全是目前最經(jīng)濟(jì)、最有效的疫病控制措施，生物安全防控作為一項系統(tǒng)工程，時間上貫穿整個養(yǎng)殖過程，空間上各個環(huán)節(jié)相互聯(lián)系，可最大限度地減少疫病發(fā)生的機會[13]。目前非洲豬瘟環(huán)境下，生物安全防控尤為重要，養(yǎng)殖場務(wù)必在做好非洲豬瘟防控的同時，也需加強對CSF、PRRS等病毒性疾病和SS、Hps等細(xì)菌性疾病的防控工作。

這個案例經(jīng)過實地調(diào)查、臨床觀察、病理剖檢和實驗室診斷的有效結(jié)合，做出了綜合診斷。并根據(jù)診斷結(jié)果，制定了系列有效可行的治療及防控措施，防控得當(dāng)效果明顯。也為豬場豬瘟病毒和副豬嗜血桿菌混合感染的診斷和防控給予參考借鑒。