周小芳 張鵬飛 曾會(huì)玲 葉恒振 馮 浩 李慧瑩 靳方方 梁智策 郭志強(qiáng)

(1. 海南大學(xué)海洋學(xué)院, 南海海洋資源利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 海口 570228; 2. 海南大學(xué)生命科學(xué)與藥學(xué)院,熱帶生物資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 海口 570228)

斜帶石斑魚(Epinephelus coioides), 俗稱青斑,是石斑魚屬極具代表性的養(yǎng)殖品種[1], 我國(guó)野生斜帶石斑魚種群主要分布于南海海域和臺(tái)灣海峽[2]。海南島東部島嶼是南海斜帶石斑魚最主要的棲息地之一[1,3]。近十幾年來(lái), 我國(guó)野生斜帶石斑魚資源日益衰退[3]。因此, 對(duì)該魚野生資源的保護(hù)已是迫在眉捷。在前期研究過(guò)程中, 有研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境污染是斜帶石斑魚資源退化的重要原因之一[1], 但是相關(guān)的研究極其缺乏。

重金屬是近海環(huán)境中主要的環(huán)境污染物之一,主要通過(guò)水體和食物途徑累積到水生生物體內(nèi)[4,6],對(duì)機(jī)體產(chǎn)生氧化脅迫、組織損傷和基因突變等毒害作用[7,9]。鉻(Cr)是環(huán)境中常見的重金屬污染物,Cr在環(huán)境中主要以Cr6+和Cr3+兩種價(jià)態(tài)存在。即使在較低的濃度下, Cr6+也可能是劇毒的[10]。水體中Cr6+的污染對(duì)水生生物及魚類具有生物毒性, 主要包括對(duì)細(xì)胞水平、免疫水平和抗氧化應(yīng)激酶等方面具有毒性效應(yīng)[11,14]。

魚類早期生活階段對(duì)外界環(huán)境極為敏感, 即使低濃度的重金屬暴露也可能對(duì)其胚胎發(fā)育和仔魚生長(zhǎng)存活造成損害, 導(dǎo)致種群數(shù)量和質(zhì)量的降低[15]。因此, 利用魚類胚胎和仔魚對(duì)重金屬的毒理學(xué)反應(yīng)進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)已成為評(píng)價(jià)水體污染效應(yīng)的重要手段[15]。目前重金屬對(duì)魚類早期發(fā)育階段研究已取得初步進(jìn)展, 主要采用孵化率、孵化時(shí)間和畸形率等發(fā)育指標(biāo)展開研究, 常忽略了胚胎發(fā)育階段對(duì)污染物的生物累積和分子監(jiān)測(cè)指標(biāo)方面的研究。石斑魚胚胎發(fā)育屬于內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng), 而胰島素樣生長(zhǎng)因子2(Insulin like growth factor 2, IGF2)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Glucose transporter 2, GLUT2)和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARG)這3種基因在生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)功能方面起著重要作用, 可用作胚胎發(fā)育的分子指標(biāo)。igf2具有刺激DNA和蛋白質(zhì)合成, 促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂, 調(diào)節(jié)糖原代謝的作用, 是最早發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性印記基因之一, 也是胚胎發(fā)育的主要促進(jìn)因子[16]。glut2基因和pparg基因分別為糖代謝水平和脂質(zhì)代謝水平的重要基因, 其中g(shù)lut2基因是調(diào)節(jié)胰島素分泌的葡萄糖傳感器[17], 而pparg基因是脂肪組織中調(diào)控脂肪酸代謝的核心轉(zhuǎn)錄因子, 影響脂肪細(xì)胞脂肪酸沉積及脂滴形成, 也是脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的重要指示基因[18]。

為了深入研究重金屬在胚胎發(fā)育過(guò)程中的吸收和生物累積規(guī)律及其對(duì)胚胎發(fā)育過(guò)程中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響, 本實(shí)驗(yàn)研究了水體中Cr6+在斜帶石斑魚胚胎中的生物累積量和吸收率及其對(duì)glut2、igf2和pparg基因mRNA表達(dá)的影響, 評(píng)價(jià)Cr6+暴露對(duì)石斑魚胚胎細(xì)胞發(fā)育和營(yíng)養(yǎng)代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

斜帶石斑魚受精卵于2018年4月1日購(gòu)自海南晨海水產(chǎn)有限公司(陵水基地)。受精卵收集后, 洗凈, 除去未受精的卵, 取上浮受精卵置于孵化桶中用于Cr6+暴露實(shí)驗(yàn)。斜帶石斑魚的受精卵呈圓球形, 為浮性卵, 卵徑為(0.85±0.01) mm, 油球直徑為(0.27±0.01) mm。

實(shí)驗(yàn)所用重鉻酸鉀(K2Cr2O7)試劑為分析純(CAS No: 7646-85-7, 純度>99.9%, 購(gòu)自國(guó)藥化學(xué)試劑公司), 先用去離子水配制成濃度3000 mg/L Cr6+母液備用, 實(shí)驗(yàn)前用膜過(guò)濾(0.22 μm濾膜)海水, 并稀釋Cr6+溶液成所需濃度。據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)及相關(guān)研究[19,20],確定0.20、0.60、1、5、10、20、40、60、80 mg/L9個(gè)Cr6+質(zhì)量濃度梯度進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn), 每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)平行, 實(shí)驗(yàn)使用500 mL的燒杯, 共20個(gè)燒杯, 用10 mL移液槍吸約受精卵(顯微鏡下均為剛受完精魚卵)1萬(wàn)粒加入各個(gè)燒杯中, 實(shí)驗(yàn)期間用氣石曝氣保持水體正常溶氧, 光周期14L﹕10D, 實(shí)驗(yàn)海水鹽度(32±1)‰, 溫度(25±1)℃, pH為7.5±0.30, 溶解氧(6.3±0.80) mg/L(平均值±SD,n=3)。實(shí)驗(yàn)周期為30h, 分別在3h11min (桑葚胚期)、5h42min(囊胚期)、10h45min(原腸末期)、17h30min(腦泡形成期)、24h25min(心臟跳動(dòng)期)取樣, 用于測(cè)定其累積量樣品放置?20℃冰箱, 用于測(cè)定分子樣品放置?80℃冰箱, 每個(gè)濃度一式5份樣品進(jìn)行分析。

Cr6+暴露實(shí)驗(yàn)期間, 各處理組中Cr6+的實(shí)測(cè)濃度誤差均<10%, 符合OECD關(guān)于此類實(shí)驗(yàn)誤差在±20%范圍內(nèi)的要求[21]。

1.2 樣品測(cè)定

樣品Cr6+含量測(cè)定樣品解凍后用蒸餾水清洗兩遍除去表面的Cr6+, 然后置于烘箱65℃下48h烘干至恒重, 稱重后轉(zhuǎn)移至15 mL離心管, 加入1 mL HNO3(69%, ultrapure, Fisher Scientific, Geel,Belgium), 80℃下消化48h。使用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS; iCAP RQ Thermo Fisher, USA)測(cè)定樣品中的Cr6+含量。

總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄總RNA抽提試劑Trizol購(gòu)自Invitrogen公司?？偟腞NA用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(公司)反轉(zhuǎn)錄。實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒SYBR Premix ExTaq購(gòu)自TaKaRa公司, 反應(yīng)在實(shí)時(shí)定量PCR儀(ABI7500 Real-Time PCR System, 美國(guó))上進(jìn)行。測(cè)出的數(shù)據(jù)用內(nèi)參β-actin進(jìn)行歸一化處理。

引物設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì), 由廣州天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司合成, 引物序列及參數(shù)見表 1。

反應(yīng)體系及條件使用10 μL熒光定量擴(kuò)增體系, 反應(yīng)條件為: 95℃ 30s預(yù)變性; 95℃ 5s, 58℃30s, 進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。每循環(huán)第2步結(jié)束時(shí)進(jìn)行熒光信號(hào)收集。每個(gè)待測(cè)樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù), 對(duì)3個(gè)閾值循環(huán)(Ct值)取平均值, 以備帶入公式計(jì)算。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立分別將β-actin、igf2、glut2和pparg4個(gè)基因的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物用RNA-free離子水梯度稀釋成10–9—1, 選擇10–6—1共7個(gè)濃度為標(biāo)準(zhǔn)品, 標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)條件同上, 設(shè)置3個(gè)重復(fù)。基線由實(shí)時(shí)定量PCR儀自動(dòng)設(shè)置, 標(biāo)準(zhǔn)曲線由軟件自動(dòng)分析, 得到斜率和擴(kuò)增效率。

產(chǎn)物測(cè)序PCR產(chǎn)物由廣州天一輝遠(yuǎn)生物技術(shù)有限公司測(cè)序, 登陸NCBI網(wǎng)站上與所找的魚類的序列同源性比較, 測(cè)得同源性均為98%以上。

表 1 為所合成引物序列Tab. 1 Primer sequences

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

吸收率[Jw, μg/(g·h)]通過(guò)計(jì)算其生物累積量和暴露時(shí)長(zhǎng)兩個(gè)變量的線性回歸方程斜率獲得, 吸收常數(shù)ku按如下公式計(jì)算[22]:

式中,ku代表胚胎對(duì)水相Cr6+的累積能力, b代表常數(shù),Cw是水相Cr6+濃度(mg/L)。

根據(jù)系統(tǒng)自動(dòng)分析的igf2、glut2、pparg及βactin標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率可得PCR擴(kuò)增效率:

式中,E擴(kuò)增效率, Slope為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。igf2、glut2、pparg及β-actin的擴(kuò)增效率都接近100%且相互間效率偏差在5%以內(nèi), 以目的基因mRNA的拷貝數(shù)與對(duì)應(yīng)樣品內(nèi)參基因mRNA的拷貝數(shù)的比值表示基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,采用t檢驗(yàn)檢查處理組與對(duì)照組之間的差異顯著性來(lái)判斷其Cr6+暴露對(duì)胚胎重金屬吸收、累積及目的基因表達(dá)的影響,P<0.05表示差異顯著。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS19.0軟件, 圖表制作采用Sigmaplot和Graphpad prism軟件。

2 結(jié)果

2.1 六價(jià)鉻在胚胎發(fā)育過(guò)程中的生物累積和吸收率

如圖 1所示, 各發(fā)育時(shí)期胚胎的生物累積量隨著濃度的增加而呈線性增加。低濃度Cr6+暴露組(Cr6+≤5 mg/L), 生物累積量在胚胎發(fā)育期間變化不顯著, 而在高濃度Cr6+暴露組(Cr6+為60和80 mg/L),Cr6+在胚胎發(fā)育期間持續(xù)累積。

如圖 2所示, 不同發(fā)育時(shí)期的胚胎吸收率不僅隨暴露濃度的增加而增加, 還隨著胚胎的發(fā)育時(shí)期而逐漸降低。桑葚胚期、囊胚期、原腸末期、腦泡形成期和心臟跳動(dòng)期的Cr吸收常數(shù)ku分別是2.79、0.50、0.25、0.18和0.14 L/(g·h)。

2.2 六價(jià)鉻暴露對(duì)斜帶石斑魚胚胎發(fā)育時(shí)期igf2基因的mRNA表達(dá)量的影響

圖 1 在不同濃度的Cr6+暴露下的斜帶石斑魚胚胎發(fā)育時(shí)期的Cr6+生物累積量Fig. 1 The Cr6+ bioaccumulation (μg/g) in Epinephelus coioides embryos under waterborne Cr6+ treatment

圖 2 在不同濃度的Cr6+暴露下的斜帶石斑魚胚胎不同發(fā)育時(shí)期的Cr6+吸收率Fig. 2 The Cr6+ uptake rate [μg/(g·h)]in Epinephelus coioides embryos under waterborne Cr6+ treatment

與對(duì)照組相比, 在桑葚期濃度為0.6、1、10和80 mg/L的Cr6+暴露下, 石斑魚胚胎的igf2基因的mRNA的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(圖 3A,P<0.05);囊胚期時(shí)除了在濃度為60 mg/L的Cr6+暴露下, 其他濃度的Cr6+暴露, 對(duì)igf2基因mRNA的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(圖 3B,P<0.05); 在原腸末期時(shí), 僅在濃度為1 mg/L的Cr6+暴露下的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(圖 3C,P<0.05); 在腦泡形成期時(shí), 在濃度為0.2、0.6、1和5 mg/L的Cr6+暴露下的igf2基因mRNA的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(圖 3D,P<0.05); 在濃度為10—80 mg/L的Cr6+暴露下的igf2基因mRNA的表達(dá)量為顯著抑制作用(圖 3E,P<0.05)。在igf2基因中,在濃度為1 mg/L的Cr6+暴露下的igf2基因mRNA的表達(dá)量在整個(gè)胚胎發(fā)育時(shí)期中為顯著促進(jìn)作用(圖 3)。

2.3 六價(jià)鉻暴露對(duì)斜帶石斑魚胚胎發(fā)育過(guò)程glut2基因的mRNA表達(dá)量影響

與對(duì)照組相比, 在桑葚期時(shí), 除了在濃度為20和80 mg/L Cr6+暴露外, 其他濃度的Cr6+暴露對(duì)glut2基因的mRNA的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(圖 4A,P<0.05); 在囊胚期(圖 4B), Cr6+暴露對(duì)glut2基因的mRNA的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(P<0.05); 而在原腸末期(圖 4C)中僅在濃度為0.2—5 mg/L的Cr6+暴露下有顯著促進(jìn)作用(P<0.05); 在腦泡形成期(圖 4D)時(shí), 僅在濃度為0.6、1和20 mg/L Cr6+暴露下,glut2基因的mRNA的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(P<0.05);在心臟跳動(dòng)期(圖 4E)時(shí), 在濃度為0.2、0.6、1、5和20 mg/L的Cr6+暴露下,glut2基因的mRNA的表達(dá)量有顯著性作用(P<0.05),glut2基因的mRNA的表達(dá)量, 在濃度為80 mg/L的六價(jià)鉻暴露下被顯著抑制(P<0.05)。在glut2基因中發(fā)現(xiàn), 濃度為0.2—5 mg/L的Cr6+暴露下, mRNA的表達(dá)量在石斑魚胚胎發(fā)育的5個(gè)時(shí)期中都為顯著促進(jìn)作用(圖 4)。

2.4 六價(jià)鉻暴露對(duì)斜帶石斑魚胚胎發(fā)育時(shí)期pparg基因的mRNA表達(dá)量的影響

與對(duì)照組相比, 在桑葚期(圖 5A)和囊胚期(圖 5B)中, Cr6+暴露下的pparg基因的mRNA的表達(dá)量被顯著抑制或不表達(dá)(P<0.05); 在心臟跳動(dòng)期(圖 5E)時(shí),僅在濃度為5 mg/L的Cr6+暴露下有顯著促進(jìn)作用(P<0.05); 在原腸末期(圖 5C)和腦泡形成期(圖 5D)中, Cr6+暴露下的pparg基因的mRNA的表達(dá)量有顯著促進(jìn)作用(P<0.05); 特別是在腦泡形成期(圖 5D)時(shí), 僅在最高濃度80 mg/L暴露下的Cr6+pparg基因的mRNA的表達(dá)量無(wú)顯著差異。在Cr6+暴露下的石斑魚胚胎在發(fā)育的5個(gè)時(shí)期中,pparg基因的mRNA的表達(dá)水平普遍被抑制或者無(wú)明顯差異, 僅在原腸末期(圖 5C)和腦泡形成期(圖 5D)時(shí),pparg基因的mRNA的表達(dá)量顯著促進(jìn)作用(P<0.05)。

圖 3 不同濃度Cr6+暴露下的斜帶石斑魚胚胎發(fā)育時(shí)期igf2基因的mRNA的表達(dá)水平Fig. 3 The effect of waterborne Cr6+ exposure on insulin like growth factor 2 (igf2) gene expressions in the grouper embryos

圖 4 不同濃度Cr6+暴露下的斜帶石斑魚胚胎發(fā)育時(shí)期glut2基因mRNA的表達(dá)水平Fig. 4 The effect of waterborne Cr6+ exposure on glucose transporter 2 (glut2) gene expressions in the grouper embryos

圖 5 在不同濃度Cr6+暴露下的斜帶石斑魚胚胎發(fā)育時(shí)期的pparg基因的mRNA的表達(dá)水平Fig. 5 The effect of waterborne Cr6+ exposure on peroxisome proliferator-activated receptor gamma (pparg) gene expressions in the grouper embryos

3 討論

3.1 斜帶石斑魚胚胎對(duì)六價(jià)鉻吸收和累積

環(huán)境中Cr6+通過(guò)細(xì)胞膜離子通道進(jìn)入細(xì)胞并產(chǎn)生危害[23]。本實(shí)驗(yàn)設(shè)置更大區(qū)間的Cr6+暴露, 并通過(guò)計(jì)算動(dòng)力學(xué)參數(shù)首次量化了斜帶石斑魚胚胎對(duì)重金屬的吸收和生物累積作用。發(fā)現(xiàn)石斑魚胚胎在Cr6+暴露下的生物累積量隨濃度的增加而增加,暴露濃度越高, 其胚胎的生物累積量越高; 有研究報(bào)道, 魚類組織中Cr6+的濃度升高是導(dǎo)致每個(gè)營(yíng)養(yǎng)級(jí)水平的生物放大作用產(chǎn)生根本原因, 尤其是底棲肉食性魚類[24]。同時(shí)Cr6+及其化合物為劇毒物且容易進(jìn)入細(xì)胞產(chǎn)生毒性[23], 隨著暴露時(shí)間的增加, 胚胎的生物累積量逐漸增加并達(dá)到飽和狀態(tài), 因此隨著胚胎的發(fā)育其吸收率也隨之降低; 另一方面, 隨著胚胎內(nèi)Cr6+的累積, 重金屬的生物毒性會(huì)導(dǎo)致胚胎內(nèi)的生命活動(dòng)減弱直至停止, 相應(yīng)的胚胎對(duì)Cr6+的吸收率也隨之降低。

3.2 六價(jià)鉻暴露影響了斜帶石斑魚胚胎胰島素樣生長(zhǎng)因子

igf2基因是胚胎發(fā)育的促進(jìn)因子[13]。斜帶石斑魚桑葚胚期、囊胚期、原腸末期和腦泡形成期胚胎在低濃度(0.2—5 mg/L)Cr6+暴露下,igf2基因mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。生長(zhǎng)激素會(huì)影響棕點(diǎn)石斑魚(Epinephelus fuscoguttatus)中的igf2基因水平, 低濃度1和10 nmol/L促進(jìn)igf2 mRNA顯著高于高濃度100 nmol/L處理組[25]。在石斑魚胚胎心臟形成期,igf2基因mRNA水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。我們推測(cè)Cr6+對(duì)石斑魚胚胎igf2基因mRNA表達(dá)具有劑量效應(yīng), 即低劑量Cr6+短時(shí)間暴露刺激而高劑量以及長(zhǎng)時(shí)間暴露則抑制該基因在胚胎發(fā)育期間的表達(dá)。在本次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后不同保留濃度的孵化率也間接驗(yàn)證了這一推斷。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 經(jīng)過(guò)28h的孵化對(duì)照組及低濃度暴露組(0.2、0.6、1和5 mg/L)胚胎全部孵化成仔魚,而高濃度組(10、20、40和80 mg/L)胚胎孵化率極低(<30%), 說(shuō)明高濃度Cr6+暴露嚴(yán)重阻礙了石斑魚的胚胎發(fā)育。因此從本實(shí)驗(yàn)igf2基因表達(dá)的結(jié)果來(lái)看, 高濃度Cr6+(10—80 mg/L)暴露會(huì)抑制斜帶石斑魚胚胎igf2基因mRNA表達(dá)進(jìn)而延長(zhǎng)胚胎發(fā)育時(shí)間。

3.3 六價(jià)鉻暴露影響了斜帶石斑魚胚胎發(fā)育營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝

glut2基因能促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)效率, 該基因表達(dá)量主要受激素水平, 饑餓及脅迫水平[26]的影響。比如武昌魚(Megalobrama amblycephala)饑餓4d后,glut2基因的mRNA的表達(dá)水平高于饑餓1d和2d的表達(dá)水平[27]。本研究發(fā)現(xiàn)在中低濃度Cr6+(0.2—5 mg/L)暴露下, 石斑魚胚胎發(fā)育期間暴露在glut2基因mRNA水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05), 特別是濃度為1 mg/L的Cr6+暴露下,glut2基因的mRNA的水平在整個(gè)胚胎發(fā)育過(guò)程中幾乎是最高的, 說(shuō)明低濃度Cr6+暴露能刺激glut2基因mRNA的表達(dá)水平。這可能是由于低劑量Cr6+誘發(fā)的細(xì)胞內(nèi)抗氧化等解毒反應(yīng)額外增加了細(xì)胞的能量消耗, 進(jìn)而刺激glut2基因增加表達(dá)以提供更多能量。

激素會(huì)干擾pparg基因在各種生物中的調(diào)節(jié)功能[28]。Cr6+是一種“金屬雌激素”[29], 在河鱒(Salmo trutta fario)幼魚中分離的原代肝細(xì)胞暴露在不同濃度的雌二醇和睪酮中, 發(fā)現(xiàn)低濃度的雌二醇會(huì)干擾pparg基因的mRNA的表達(dá)水平, 而高濃度的睪酮也會(huì)干擾pparg基因的mRNA的表達(dá)水平[30]。在本研究中, 低濃度的Cr6+暴露會(huì)刺激原腸末期和腦泡形成期的石斑魚胚胎pparg基因的mRNA的表達(dá)水平。這有可能是由于重金屬污染對(duì)魚類胚胎發(fā)育器官形成期前的影響最大[31], 所以在斜帶石斑魚胚胎的原腸末期和腦泡形成期時(shí)低濃度的Cr6+暴露,刺激了pparg基因的mRNA的表達(dá)來(lái)抵御由Cr6+引起的應(yīng)激反應(yīng)。

4 結(jié)論

為探討斜帶石斑魚胚胎發(fā)育不同時(shí)期在水相中Cr6+的暴露, 對(duì)其生物累積量、吸收率、細(xì)胞生長(zhǎng)基因igf2、營(yíng)養(yǎng)水平基因glut2和pparg的mRNA水平的影響。本研究發(fā)現(xiàn)Cr6+生物累積量和吸收率不僅隨暴露濃度的增加呈線性增加, 還延長(zhǎng)了胚胎孵化時(shí)間。相比其他胚胎發(fā)育時(shí)期, 桑葚期吸收水中Cr6+最強(qiáng)。在轉(zhuǎn)錄水平上我們發(fā)現(xiàn)igf2、glut2和pparg基因在濃度為0.2、0.60、1和5 mg/L的Cr6+暴露下, mRNA的表達(dá)水平更顯著。我們推測(cè)低濃度的0.2、0.60、1和5 mg/L的Cr6+暴露就能引起石斑魚胚胎在細(xì)胞生長(zhǎng)水平和營(yíng)養(yǎng)代謝水平的干擾作用。