程云龍，于林，李奎，李雙法

（鄭州安圖生物工程股份有限公司，河南 鄭州）

0 引言

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2）是磷脂酶A2 超家族成員，由成熟的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成并分泌，受炎性介質(zhì)的調(diào)節(jié)。它在低密度脂蛋白的氧化、促進(jìn)動脈粥樣硬化以及冠心病和卒中的形成等方面發(fā) 揮重要作用[1,2]，其水平升高是預(yù)測動脈粥樣硬化相關(guān)的冠心病、缺血性卒中風(fēng)險(xiǎn)的一種獨(dú)立危險(xiǎn)因子[3]。在疾病進(jìn)展過程中，血漿和血清Lp-PLA2 水平的升高往往早于臨床癥狀及影像學(xué)檢查。

目前臨床檢測方法有免疫層析法、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法等，Autobio 公司提供的Lp-PLA2 檢測試劑盒，采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法測定Lp-PLA2 的濃度水平，作為檢查動脈粥樣硬化炎癥程度，評估動脈粥樣硬化引起的心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的提示性指標(biāo)，配合安圖生物公司的全自動磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測分析儀進(jìn)行檢測，具有操作便捷，樣本周轉(zhuǎn)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。本研究參照美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）相關(guān)文件標(biāo)準(zhǔn)，對Autolumo A2000 PLUS 全自動磁微?；瘜W(xué)發(fā)光儀儀器定量檢測Lp-PLA2 的各項(xiàng)性能參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證、評價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料及方法

1.1 標(biāo)本的來源

收集2019年3-10月河南某醫(yī)院65 例健康體檢者與住院患者的血清標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑

采用Autobio A2000 PLUS，Autobio 公司的配套試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品，所有檢測過程均嚴(yán)格按照說明書操作；AutobioPHOmo 酶標(biāo)儀，康爾克公司的Lp-PLA2 試劑和校準(zhǔn)品，所有檢測過程均嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3 方法[4]

1.3.1 精密度

參照CLSI 的EP5-A2 方案，使用兩個(gè)批號的試劑，在同一臺儀器上，對Lp-PLA2 質(zhì)控品進(jìn)行檢測，每天在兩個(gè)不同的時(shí)間段分別檢測兩次，共檢測20 天。

1.3.2 靈敏度

參照CLSI 的EP17-A 方案，對4 個(gè)零濃度的標(biāo)本和8 個(gè)Lp-PLA2 濃度在 0-30ng/mL 之間的標(biāo)本進(jìn)行檢測，使用兩個(gè)批號的試劑，在兩臺儀器上，將這些標(biāo)本分5 個(gè)批次進(jìn)行檢測，檢測5 天。

1.3.3 線性范圍

參照CLSI 的EP6-A 方案，使用四對標(biāo)本，將含高濃度Lp-PLA2（濃度范圍為400-500ng/mL）的標(biāo)本按照比例用含低濃度Lp-PLA2（濃度范圍＜15ng/mL）的標(biāo)本進(jìn)行稀釋，每對標(biāo)本共得到13 個(gè)稀釋標(biāo)本，然后使用Autobio A2000 PLUS及配套試劑進(jìn)行檢測。

1.3.4 干擾試驗(yàn)

主要驗(yàn)證Autobio A2000 PLUS 及配套Lp-PLA2 試劑對溶血、黃疸、脂血的抗干擾能力。取3 例陰性標(biāo)本，分別加入干擾物質(zhì)：膽紅素50mg/dl、甘油三酯1500mg/dl、血紅蛋白100mg/dl，分別重復(fù)檢測3 次，比較加入干擾物前后檢測結(jié)果的差異。

1.3.5 參考值驗(yàn)證

參照選取20 位表觀健康者，若20 個(gè)參考個(gè)體中不超過1個(gè)觀測值在原始報(bào)告的參考限之外，廠商提供參考區(qū)間可以接受。若2 個(gè)以上超出界限，另選擇20 個(gè)參考個(gè)體進(jìn)行驗(yàn)證，若≤1 個(gè)觀測值超過原始參考限，廠商提供參考區(qū)間可以接受，若仍有2 個(gè)觀測者超出參考限，則應(yīng)重新檢查所用分析程序，考慮兩個(gè)樣本總體生物學(xué)特征上是否存在差異，并考慮建立自己的參考區(qū)間。標(biāo)準(zhǔn)要求：若20 個(gè)參考個(gè)體中不超過1 個(gè)觀測值在原始報(bào)告的參考限之外，廠商提供參考區(qū)間可以接受。

1.3.6 方法學(xué)比較

對65 例血液標(biāo)本用Autobio A2000 PLUS 及配套Lp-PLA2 試劑和AutobioPHOmo 酶標(biāo)儀及康爾克配套Lp-PLA2試劑平行進(jìn)行測定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，方法學(xué)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

三個(gè)不同水平的質(zhì)控血清標(biāo)本在自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上進(jìn)行精密度測試的結(jié)果見表1，滿足試劑盒聲明的不精密度。

2.2 靈敏度試驗(yàn)

Autobio Lp-PLA2 試劑的空白檢測限為1.10ng/mL，最低檢測限為5.0ng/mL，功能靈敏度為10.0ng/mL。

2.3 線性評價(jià)結(jié)果

如圖1 示，Lp-PLA2 的多點(diǎn)線性回歸方程為Y=0.9312X+5.7541，R2=0.9967。各檢測結(jié)果在15-450ng/mL濃度范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r＞0.990，相關(guān)性良好。

2.4 干擾試驗(yàn)

由表2 結(jié)果可知，加入干擾物前后檢測結(jié)果差異不顯著，檢測結(jié)果與未加入干擾物相比，檢測結(jié)果偏差在±10%以內(nèi)，驗(yàn)證通過。

表2 干擾物質(zhì)加入前后檢測結(jié)果對比（Mean±SD）

2.5 參考值驗(yàn)證結(jié)果

由表3 結(jié)果可知，20 個(gè)參考個(gè)體的觀測值均在廠家提供參考值（175ng/mL）以下，驗(yàn)證通過。

表3 參考值驗(yàn)證結(jié)果

2.6 方法學(xué)比較

經(jīng)配對t檢驗(yàn)，Autobio A2000 PLUS 及配套Lp-PLA2 試劑和AutobioPHOmo 酶標(biāo)儀及康爾克Lp-PLA2 試劑進(jìn)行Lp-PLA2 測定結(jié)果的差異無顯著性（P＞0.05），兩種方法測定結(jié)果的回歸方程為Y=1.0317X-2.5925，相關(guān)系數(shù)R2=0.9754，見圖2 示。

圖2 兩種方法測定結(jié)果的相關(guān)性

3 討論

由于Lp-PLA2 在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的過程中具有關(guān)鍵的作用[5]，近年來，西蘇格蘭冠心病預(yù)防研究（The West of Scotland Coronary Prevention Study，WOSCOPS） 將 LPPLA2 作為預(yù)測動脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)程度的獨(dú)立標(biāo)志物[6]。目前市場上出售的Lp-PLA2 的檢測試劑較多，檢測該標(biāo)志物，需要操作方便、快捷、性能良好的儀器及試劑，Autobio 公司基于Autolumo A2000 PLUS 的Lp-PLA2 定量檢測試劑，正是滿足了這一需求，但其檢測性能是否滿足臨床需要應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)予以驗(yàn)證和評估。

本研究參照據(jù)國際權(quán)威的CLSI 制定的EP 文件方案對其檢測的精密度、靈敏度和線性范圍等性能進(jìn)行了驗(yàn)證，評估其臨床適用性。結(jié)果顯示其精密度、靈敏度均在廠家聲明的范圍之內(nèi)，可以接受。線性范圍為15-450ng/mL，可滿足臨床需要。并且檢測結(jié)果不受50mg/dl 膽紅素、1500mg/dl 甘油三酯、100mg/dl 血紅蛋白干擾的影響。為比較Autobio Lp-PLA2 試劑與市售康爾克Lp-PLA2 檢測試劑之間的差異，本研究對65例新鮮血清標(biāo)本進(jìn)行了對比分析，兩種方法測定結(jié)果的回歸方程為Y=1.0317X-2.5925，相關(guān)系數(shù)R2=0.9754，兩種檢測試劑之間的差異不顯著（P＞0.05）。

綜上所述，Autobio 公司基于Autolumo A2000 PLUS 儀器的Lp-PLA2 定量檢測試劑精密性、靈敏度、線性范圍和抗干擾能力均符合要求，可以滿足臨床檢測要求。