徐海元，郭宗，王中山，范學(xué)亮，鄭鶴，殷仁斌，張曉燕，劉亞南，張姍姍

(鄭州金域臨床檢驗(yàn)中心，河南 鄭州 450000)

持續(xù)感染人乳頭狀瘤病毒(HPV)是造成宮頸上皮內(nèi)瘤變中度及以上(高度鱗狀上皮內(nèi)病變)病變發(fā)生、發(fā)展的重要原因[1]。既往，多采用HPV基因(HPV DNA)檢測，但其僅能反映宮頸上皮細(xì)胞的病毒種類和(或)載量，不能提供病毒活動程度以及整合程度的相關(guān)信息，而且絕大多數(shù)的HPV感染為一過性且在1年內(nèi)可恢復(fù)正常，臨床檢測具有局限性[2-3]。研究表明，HPV E6/E7基因可對機(jī)體的免疫應(yīng)答產(chǎn)生干擾，其自身表達(dá)能反映HPV的基因活性，當(dāng)表達(dá)失控時會引發(fā)宮頸癌[4]。因此，對宮頸病變患者的HPV E6/E7 mRNA水平進(jìn)行檢測，或許能反映出HPV感染程度以及癌變風(fēng)險[5]?；诖?，本研究旨在探討HPV E6/E7 mRNA在宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變患者診斷中的應(yīng)用價值。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月—2018年1月我院收治的120 例宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變患者為觀察組，并選取同期120 例宮頸低度鱗狀上皮內(nèi)病變患者為對照組。觀察組年齡(42.83±1.56)歲，體質(zhì)量(75.00±5.50)kg。對照組年齡(43.00±1.52)歲，體質(zhì)量(76.00±5.44)kg。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。本研究均經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)病理活組織檢查確診為高度鱗狀上皮內(nèi)病變以及低度鱗狀上皮內(nèi)病變患者；有性生活史者；有完整子宮者；患者與家屬均知情并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期接受宮頸病變藥物治療者；合并非宮頸組織的其他惡性腫瘤者；近期接受放療以及化療者；6個月內(nèi)給予免疫調(diào)節(jié)劑或免疫抑制劑治療者；7 d內(nèi)有陰道給藥者；免疫功能缺陷者；嚴(yán)重傳染性疾病者。

1.3 方法

兩組患者均先進(jìn)行HPV DNA檢測。使用廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)的檢測試劑盒、珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的基因擴(kuò)增PCR儀及佛山達(dá)安醫(yī)療設(shè)備有限公司的全自動核酸分子雜交儀，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行檢測操作。對28種HPV亞型進(jìn)行檢測。判斷標(biāo)準(zhǔn)：1種HPV陽性即為陽性。使用河南中美合資科蒂亞生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒再進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA檢測，將檢測結(jié)果輸入電腦軟件換算為拷貝數(shù)。判斷標(biāo)準(zhǔn)：以拷貝數(shù)≥1 copy/mL為陽性。統(tǒng)計(jì)并比較兩組HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA陽性以及陰性數(shù)量，計(jì)算陽性檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)和例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。將宮頸病變患者作為狀態(tài)變量，HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA檢測陽性率作為自變量，繪制受試者工作曲線(ROC)，觀察曲線下面積(AUC)，檢驗(yàn)HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA在診斷宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變患者中的價值。AUC≤0.5說明無預(yù)測價值；AUC>0.5～0.7說明預(yù)測價值較低，AUC>0.7～0.9說明有較好的預(yù)測價值；AUC>0.9說明預(yù)測價值好。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV DNA與HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率

觀察組HPV DNA，HPV E6/E7 mRNA陽性檢出率均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為9.351和109.969，P<0.05)(見表1)。

表1 兩組陽性檢出率比較 例(%)

2.2 HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA檢測預(yù)測宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變患者的價值分析

將不同級別宮頸病變作為狀態(tài)變量，將HPV DNA以及HPV E6/E7 mRNA檢測陽性率作為自變量，繪制ROC曲線，結(jié)果顯示HPV DNA檢測陽性率預(yù)測宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變的AUC為0.575(95%CI：0.503～0.647)，預(yù)測價值較低。HPV DNA檢測的標(biāo)準(zhǔn)誤為0.037。HPV E6/E7 mRNA檢測陽性率預(yù)測宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變的AUC為0.838(95%CI：0.783～0.892)，預(yù)測價值較好。HPV E6/E7 mRNA檢測的標(biāo)準(zhǔn)誤為0.028(見圖1、圖2)。

圖1 HPV DNA檢測預(yù)測宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變的ROC曲線圖

圖2 HPV E6/E7 mRNA檢測預(yù)測宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變的ROC曲線圖

3 討 論

宮頸是女性內(nèi)生殖器的一部分。宮頸病變指宮頸區(qū)域發(fā)生的各種病理性改變，主要包括炎癥、損傷、腫瘤以及癌前病變等，是女性最常見的疾患之一，其最嚴(yán)重的疾病是子宮頸癌[6-7]。而宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變主要指的是高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)，包括宮頸上皮內(nèi)瘤變2級(CIN2)和宮頸上皮內(nèi)瘤變3級(CIN3)，是浸潤程度較高的癌前病變。宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變患者無特殊癥狀，偶有陰道排液增多，伴有或不伴有臭味，也可在性生活或者婦科檢查后發(fā)生接觸性出血。臨床檢查時可見子宮頸光滑，或僅見局部紅斑、白色上皮，或子宮頸糜爛樣表現(xiàn)，病灶不明顯，往往會忽略病情，延誤治療，導(dǎo)致其向子宮頸癌發(fā)展。有研究表明，宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變最主要的致病原因是宮頸長期被HPV感染，通過檢測HPV有利于篩查及鑒別宮頸上皮類瘤樣病變和宮頸癌[8-9]。目前臨床主要依據(jù)HPV DNA檢測診斷感染的病毒類型或負(fù)荷量[10]。但該檢測只能判斷有無HPV病毒感染，不能判斷HPV病毒是否整合進(jìn)入宿主細(xì)胞，也不能鑒別宮頸病變發(fā)展程度，對HPV感染活動程度以及惡性轉(zhuǎn)化風(fēng)險不能實(shí)現(xiàn)有效預(yù)測[11-12]。研究表明[13]，HPV E6/E7基因蛋白長時間處于高水平狀態(tài)是宮頸病變的始發(fā)因素。在HPV病毒整合入駐宿主細(xì)胞后，HPV E6/E7 mRNA編碼的蛋白會對腫瘤抑制因子(RPb，P53)產(chǎn)生抑制作用，對細(xì)胞周期調(diào)控、免疫逃逸等機(jī)制產(chǎn)生阻礙作用，造成宮頸細(xì)胞發(fā)生癌變[14]。同時HPV E6/E7 mRNA能夠準(zhǔn)確反映HPV病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄以及復(fù)制的活動程度，有效預(yù)測宮頸癌病的風(fēng)險[15]。本研究結(jié)果顯示，觀察組HPV DNA檢測以及HPV E6/E7 mRNA檢測的陽性檢出率高于對照組。繪制ROC曲線，結(jié)果顯示HPV E6/E7 mRNA檢測預(yù)測宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變的AUC為0.838，預(yù)測價值較好。表明將HPV E6/E7 mRNA檢測用于宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變患者的臨床診斷中，能獲得較高的陽性預(yù)測值，可作為宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變患者的有效預(yù)測指標(biāo)，應(yīng)用價值較高。