張建軍，蔡龍俊，晁流，孫永明，王祥宇，施龍，蔡維奇

(1.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬宿遷醫(yī)院，南京鼓樓醫(yī)院集團宿遷市人民醫(yī)院，江蘇 宿遷 223800；2.江蘇師范大學(xué)科文學(xué)院，江蘇 徐州 221116)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤，是美國男性第4位、女性第11位惡性腫瘤[1]。在中國，近年來膀胱癌的發(fā)病率和病死率均呈逐步上升態(tài)勢，并且70%以上為非肌層浸潤膀胱癌[2]。黑色素瘤相關(guān)抗原A10(MAGE-A10)是一種腫瘤相關(guān)抗原，能引起細胞、體液免疫應(yīng)答，是有望成為腫瘤疫苗的潛在抗原之一[3]。樹突狀細胞(DC)是功能最強大的專職抗原呈遞細胞，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，其數(shù)量的減少及功能的障礙是腫瘤細胞逃逸機體免疫監(jiān)視的一個重要原因[4]。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測MAGE-A10和DC在非肌層浸潤膀胱癌組織中的表達，并探討其與膀胱癌臨床病理特征及腫瘤復(fù)發(fā)、預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年1月—2015年2月徐州醫(yī)科大學(xué)附屬宿遷醫(yī)院行經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)治療的非肌層浸潤膀胱移行細胞癌患者86 例，其中男63 例，女23 例，年齡(62.1±10.9) 歲。原發(fā)性膀胱癌44 例，復(fù)發(fā)性膀胱癌42 例；腫瘤直徑(2.0±1.5) cm；臨床TNM分期Ta期29 例，T1期57 例。病理分級Ⅰ級28 例，Ⅱ級58 例。標(biāo)本切片行HE染色明確診斷后分別作MAGE-A10及DC染色觀察。隨訪至2020年2月，共獲隨訪病例77 例，失訪9 例，最長隨訪97 個月。本研究患者均知情同意，并通過醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 檢測方法

免疫組織化學(xué)檢測采用SP法。S100抗體、MAGE-A10抗體購買于Protein Tech Group公司(美國)，操作步驟按試劑盒說明進行。染色時用已知S100陽性的正常膀胱黏膜作陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準

MAGE-A10的陽性表達：顯微鏡下呈現(xiàn)棕黃色，染色于細胞核。DC的表達：DC表現(xiàn)為S100陽性，細胞漿和細胞核均著色，形態(tài)上呈樹突狀，核不規(guī)則。以正常膀胱黏膜組織中S100陽性DC表達為正常表達，腫瘤組織中S100陽性DC表達與之比較后確定為正常表達或低表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 MAGE-A10及DC的表達

MAGE-A10蛋白在86 例非肌層浸潤膀胱癌組織中的表達率為36.05%。MAGE-A10蛋白的陽性表達與患者性別無相關(guān)性。而與腫瘤大小、分級及分期存在相關(guān)性。DC在86 例非肌層浸潤膀胱癌組織中的正常表達率為65.12%，其余均為低表達。DC的正常表達與患者性別、腫瘤大小無相關(guān)性，而與腫瘤的分級及分期有相關(guān)性(見表1)。

表1 MAGE-A10陽性及DC正常表達與患者臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

2.2 MAGE-A10及DC的表達與腫瘤復(fù)發(fā)的關(guān)系

本組86 例膀胱癌中77 例獲得隨訪，9 例失訪。其中MAGE-A10陽性失訪3 例，MAGE-A10陰性失訪6 例；DC正常表達失訪5 例，DC低表達失訪4 例。獲得隨訪的77 例中有42 例復(fù)發(fā)。其中MAGE-A10陽性表達者的復(fù)發(fā)率較高，與MAGE-A10陰性表達者的復(fù)發(fā)率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。DC正常表達者的復(fù)發(fā)率與低表達者的復(fù)發(fā)率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

表2 MAGE-A10陽性及DC正常表達與患者復(fù)發(fā)的關(guān)系 例(%)

2.3 MAGE-A10及DC的表達與腫瘤預(yù)后的關(guān)系

MAGE-A10陽性表達者預(yù)后差，其5 年生存率與陰性表達者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。DC正常表達者預(yù)后好，其5年生存率與低表達者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表3)。

表3 MAGE-A10陽性及DC正常表達與患者5 年生存率的關(guān)系 例(%)

3 討 論

腫瘤疫苗是通過腫瘤抗原等激發(fā)機體自身免疫系統(tǒng)產(chǎn)生腫瘤特異性殺傷效應(yīng)，是目前腫瘤治療研究的重要方向。選擇有效的腫瘤抗原對于腫瘤疫苗發(fā)揮抗腫瘤免疫至關(guān)重要。膀胱癌潛在的腫瘤抗原有：癌基因蛋白，如表皮生長因子受體2(HER2)；癌-睪丸抗原(CTAs)；腫瘤相關(guān)抗原，如癌胚抗原(CEA)等[5]。在目前報道的膀胱癌臨床試驗中，以HER2為作用靶點的腫瘤疫苗[6]、以細胞為基礎(chǔ)的疫苗vesigenurtacel-L及由DC驅(qū)動的疫苗lapuleucel-T[7]均取得了一定的療效。MAGE-A10是腫瘤和睪丸抗原(CT)家族的一個成員。CT抗原僅特異性表達于腫瘤和睪丸中，因而不會導(dǎo)致自身免疫性疾病。文獻表明[8]，MAGE-A10在黑色素瘤、膀胱癌和肺癌等腫瘤組織中存在陽性表達。Schultz-Thater等[8]報告癌睪丸基因在膀胱癌中有較高表達，同腫瘤等級相關(guān)，監(jiān)測CTA的表達可以判斷膀胱腫瘤的預(yù)后和復(fù)發(fā)。開發(fā)以CTA為基礎(chǔ)的腫瘤特異性免疫治療有助于提高膀胱腫瘤的治愈率。Mengus等[3]發(fā)現(xiàn)MAGE-A10在1/3以上的非肌層浸潤性膀胱癌中表達，并且同腫瘤的分級明顯相關(guān)，一旦腫瘤向高級別進展，MAGE-A10表達明顯增高，等級越高表達越多。本研究發(fā)現(xiàn)，MAGE-A10蛋白在非肌層浸潤膀胱癌中腫瘤分級或分期越高，陽性表達率越高，并且陽性表達率高的患者復(fù)發(fā)率更高，預(yù)后更差。因此，我們認為，MAGE-A10可作為非肌層浸潤膀胱癌免疫學(xué)檢測新的分子標(biāo)志物，并可作為膀胱腫瘤免疫治療的一個新靶點。DC既具有一定的吞噬、攝取、加工抗原能力，又具有抗原遞呈并刺激幼稚T細胞活化的功能[9]。S100是目前最常用的檢測DC的抗體。S100陽性DC具有活躍的免疫活性及明顯的抗腫瘤作用[10]。研究發(fā)現(xiàn)這種細胞在不同腫瘤組織內(nèi)存在，并且其浸潤程度與患者的預(yù)后相關(guān)[11]。本研究結(jié)果顯示：非肌層浸潤膀胱癌患者腫瘤分級或分期越低，S100陽性DC正常表達越高，并且正常表達的患者復(fù)發(fā)率更低，預(yù)后更好，提示非肌層浸潤膀胱癌組織中S100陽性DC表達數(shù)量的多少與腫瘤的發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。

綜上所述，MAGE-A10及DC的表達與非肌層浸潤膀胱癌分級及分期相關(guān)，并可影響非肌層浸潤膀胱癌患者的復(fù)發(fā)及預(yù)后。MAGE-A10可作為非肌層浸潤膀胱癌免疫學(xué)檢測的一個新的分子標(biāo)志物。以上結(jié)果為我們下一步研制膀胱腫瘤的腫瘤疫苗提供了依據(jù)。