楊冰潔 向文洲 金雪潔 陳子碩 王靈 吳后波

（1.中國科學(xué)院南海海洋研究所 中國科學(xué)院熱帶海洋生物資源與生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510301；2.中國科學(xué)院大學(xué)，北京 100049；3.南方海洋科學(xué)與工程廣東省實(shí)驗(yàn)室，廣州 510301）

微藻是一類資源豐富、種類繁多、生長速度快、具有極大應(yīng)用價值的生物資源，其細(xì)胞內(nèi)富含各類生物活性成分，如藻多糖、脂類、藻膽蛋白、β-胡蘿卜素、氨基酸、蛋白質(zhì)等，在醫(yī)藥、保健、食品、化妝品、飼料和能源等諸多領(lǐng)域具有巨大應(yīng)用潛力，被譽(yù)為生物技術(shù)開發(fā)的“朝陽產(chǎn)業(yè)”［1］。

微藻的大規(guī)模養(yǎng)殖是微藻資源商業(yè)化應(yīng)用的必不可少的重要途徑之一，微藻的商業(yè)化大規(guī)模養(yǎng)殖通常于開放的水池或封閉的光生物反應(yīng)器中單一藻株高密度培養(yǎng)［2］。然而在微藻的大規(guī)模養(yǎng)殖過程中，無論是開放還是封閉式的系統(tǒng)，環(huán)境中各種微生物如原生動物、其他雜藻、細(xì)菌、真菌和病毒等會通過各種途徑進(jìn)入其中，這些微生物組成復(fù)雜，群落多變，一旦對養(yǎng)殖微藻有害的微生物進(jìn)入養(yǎng)殖系統(tǒng)，輕則影響微藻的產(chǎn)量，嚴(yán)重時甚至破壞整個微藻培養(yǎng)體系導(dǎo)致“顆粒”無收［3］，這是微藻資源大規(guī)模持續(xù)發(fā)展所面臨的重大挑戰(zhàn)。在微藻養(yǎng)殖生產(chǎn)系統(tǒng)中細(xì)菌豐富，通常能達(dá)到109個/mL，是藻細(xì)胞濃度的10-100倍［4］，目前已知某些細(xì)菌菌株會降低微藻的產(chǎn)量［5-6］。細(xì)菌破壞微藻生產(chǎn)主要包括兩種方式，長期內(nèi)逐漸降低生產(chǎn)或?qū)е屡囵B(yǎng)物快速失效甚至突然“崩潰”。

從理論上講，細(xì)菌可能通過直接裂解藻細(xì)胞或分泌溶藻物質(zhì)而發(fā)揮有害作用［7］。近幾年來，有關(guān)藻菌互作特別是溶藻細(xì)菌的研究大部分集中于自然環(huán)境中有害赤潮或水華的生物防治等方面［8］，而在微藻的工業(yè)化生產(chǎn)等方面的研究鮮有報道，隨著國際上對微藻廣泛應(yīng)用前景的高度關(guān)注，從微藻養(yǎng)殖的病害防治的角度開展溶藻細(xì)菌的研究將十分重要和迫切。

本研究在海南三亞的微藻室外培養(yǎng)的前期研究中，發(fā)現(xiàn)一株污染藍(lán)藻可以廣譜“溶解”幾乎所有處于不同擴(kuò)種階段、具有商業(yè)潛力的真核微藻，通過實(shí)驗(yàn)室對該藍(lán)藻進(jìn)行分離和培養(yǎng)研究，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致溶藻作用的罪魁禍?zhǔn)撞皇瞧渌{(lán)藻自身，而是源自于多株附生該藍(lán)藻的細(xì)菌，藍(lán)藻的爆發(fā)只是溶藻細(xì)菌的伴生現(xiàn)象。本研究將首次報道該藍(lán)藻（Cyanobacterium sp.SCSIO-45682）藻際環(huán)境中分離得到的、對鹽生杜氏藻具有極強(qiáng)溶藻作用的有害細(xì)菌CBA02，對其溶藻能力和方式作出闡釋，初步分析其溶藻特性，以期為微藻大規(guī)模養(yǎng)殖中溶藻菌生物污染的防治供理論依據(jù)與指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株CBA02從實(shí)驗(yàn)室分離得到的藍(lán)藻（Cyanobacterium sp.SCSIO-45682）單種培養(yǎng)物的藻際環(huán)境中篩選獲得，該藍(lán)藻于2013年由本實(shí)驗(yàn)室從海南省三亞市天涯鎮(zhèn)的被污染微藻開放養(yǎng)殖池中分離獲得。實(shí)驗(yàn)藻種鹽生杜氏藻（Dunaliella salina，SCSIO-45153）藻種由中國科學(xué)院南海海洋研究所經(jīng)濟(jì)微藻種質(zhì)庫提供。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)方法菌株CBA02采用2216E海洋細(xì)菌培養(yǎng)基［9］，于溫度28℃，轉(zhuǎn)速200 r/min條件下培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)所用所有藻種均采用F/2培養(yǎng)基［10］，于溫度25±1℃、光照強(qiáng)度60±5 μmol photons/m2/s、光暗比24 h∶0 h條件下培養(yǎng)。

1.2.2 菌株CBA02的分子鑒定 通過16S rRNA基因測序鑒定。DNA提取方法參照Englen等［11］，PCR擴(kuò)增引物選取27F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和1492R（5'-TACGGYTACCTTGTTACGAC TT-3'）［12］。PCR反應(yīng)體系：25 μL Premix rTaq（TAK ARA），2 μL正向引物（27F），2 μL反向引物（1492R），2 μL模版DNA，2 μL二甲基亞砜（DMSO），17 μL ddH2O。PCR反 應(yīng) 條 件：94℃ 4min；94℃ 45 s，50℃ 45 s，72℃ 95 s，36個循環(huán)；72℃ 10 min。PCR產(chǎn)物送至廣州天一輝遠(yuǎn)基因科技公司測序。測序結(jié)果用BLAST軟件與GenBank中己知的16SrDNA進(jìn)行同源性比較分析，并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。選取與CBA02的16S rDNA 序列相似性較接近的菌株，用MEGA 6.0軟件以Neighbor Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.3 菌株CBA02生長曲線的測定 將固體培養(yǎng)基上的菌株CBA02菌落接種于2216E液體培養(yǎng)基中，設(shè)3組平行；于 28℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)。每12 h 取樣測定其在600 nm處的吸光度（OD600），持續(xù)120 h。以吸光度（OD600）為縱坐標(biāo)，時間為橫坐標(biāo)，繪制生長曲線，便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)取樣。

1.2.4 葉綠素含量和溶藻率的測定 葉綠素a測定方法采用丙酮法［13］。溶藻率計(jì)算方法為：溶藻率（%）=（C0-Ct）/C0×100%。其中，C0和Ct分別代表對照組和處理組的葉綠素a含量。

1.2.5 菌株CBA02的溶藻效應(yīng)研究

1.2.5.1 菌液不同發(fā)酵時間對溶藻活性的影響 取發(fā)酵時間為48 h、72 h、96 h和120 h的菌液按照20%（體積比）添加到100 mL處于對數(shù)生長期的初始葉綠素a濃度約為3.6 μg/mL（OD750=0.100±0.008）的藻液中，進(jìn)行溶藻試驗(yàn)；并以向相同藻液中加入等量2216E海洋細(xì)菌培養(yǎng)基作為對照，各設(shè) 3 組平行；共培養(yǎng)12 d，每隔2 d取樣，用于測定葉綠素a濃度，并計(jì)算溶藻率。

1.2.5.2 不同菌液添加量對溶藻活性的影響 取培養(yǎng)72 h的菌液（OD600=1.714±0.071）按照5%、10%、15%和 20%（體積比）分別加入到100 mL處于對數(shù)生長期的初始葉綠素a濃度約為3.6 μg/mL（OD750=0.100±0.008）的藻液中，進(jìn)行溶藻試驗(yàn)，各組中藻菌細(xì)胞數(shù)之比分別為1∶15、1∶30、1∶45和1∶60；并以向相同藻液中加入等量2216E海洋細(xì)菌培養(yǎng)基作為對照，各設(shè)3組平行；共培養(yǎng)12 d，每隔2 d取樣，用于測定葉綠素a 濃度，并計(jì)算溶藻率。

1.2.5.3 藻液初始濃度對溶藻活性的影響 利用F/2培養(yǎng)基將處于對數(shù)生長期的鹽生杜氏藻藻液（OD750= 1.200）稀釋成OD750分別為 0.1、0.2、0.3、0.4和0.5，各組中取100 mL藻液并按照 20%（體積比）加入培養(yǎng)72 h的菌株CBA02的菌液（OD600=1.714±0.071），各組中藻菌細(xì)胞數(shù)之比分別為1∶15、2∶15、1∶5和4∶15，進(jìn)行溶藻試驗(yàn)；并以向各組相同藻液中加入等量2216E海洋細(xì)菌培養(yǎng)基作為對照，各設(shè)3組平行；共培養(yǎng)12 d，每隔2 d取樣，用于測定葉綠素a濃度，并計(jì)算溶藻率。

1.2.5.4 細(xì)菌的溶藻方式分析及高溫影響 取培養(yǎng)72 h的菌液（OD600=1.714±0.071）分別按以下方式處理：無菌水洗滌3次并以2216E重懸的菌體、原菌液、用0.22 μm濾膜過濾的無菌上清液及高溫處理（121℃）的無菌上清液，處理后的各組分別按照20%（體積比）添加100 mL對數(shù)生長期的初始葉綠素a濃度約為3.6 μg/mL（OD750=0.100±0.008）的藻液中共培養(yǎng)，并以向相同藻液中加入等量2216E海洋細(xì)菌培養(yǎng)基作為對照，各設(shè)3組平行，于第10天測定葉綠素a濃度。

1.2.5.5 pH對無菌上清液溶藻活性的影響 取培養(yǎng)72 h的菌液（OD600=1.714±0.071）經(jīng)離心后用0.22 μm濾膜過濾，得到無菌上清液，之后將其pH用4 mol/L HCl 溶液和4 mol/L NaOH溶液分別調(diào)成2.0、4.0、6.0、8.0和10.0，在室溫下過夜處理12 h后調(diào)回原pH，按照 20%（體積比）添加到100 mL對數(shù)生長期的初始葉綠素a濃度約為3.6 μg/mL（OD750=0.100±0.008）的藻液中共培養(yǎng)，并以向相同藻液中加入相同處理等量2216E海洋細(xì)菌培養(yǎng)基作為對照，各設(shè) 3 組平行，共培養(yǎng)12 d，每隔2 d取樣，用于測定葉綠素a濃度，并計(jì)算溶藻率。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 本試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用Graphpad Prism 5.0軟件，用One-way ANOVA 分析，選用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，進(jìn)行單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，P＜0.05表示差異性顯著。

2 結(jié)果

2.1 菌株CBA02的分離鑒定

從藍(lán)藻（Cyanobacterium sp.SCSIO-45682）的藻際環(huán)境中分離出一株具有高效溶藻能力的細(xì)菌CBA02。擴(kuò)增菌株CBA02的16S rDNA序列，獲得1 377 bp的DNA序列片段。將CBA02的16S rDNA基因序列于GenBank數(shù)據(jù)庫中已登錄的16S rDNA基因序列進(jìn)行同源性檢索，并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CBA02與多株P(guān)onticoccus的相似性達(dá) 99%以上，其中與一株P(guān)onticoccus alexandrii 的相似性最高，達(dá)100%。

2.2 菌株CBA02生長曲線

將菌株CBA02接種在液體2216E中培養(yǎng)，每隔12 h取樣，測定其600 nm處吸光度（OD600），繪制生長曲線如圖2所示。從圖2中可以看出，CBA02生長延滯期為0-12 h，對數(shù)生長期為12-72 h，72 h后進(jìn)入穩(wěn)定期。后續(xù)選取細(xì)菌濃度較高的穩(wěn)定期進(jìn)行溶藻相關(guān)試驗(yàn)。

2.3 菌株CBA02的溶藻效應(yīng)研究

2.3.1 菌液CBA02不同發(fā)酵時間對溶藻活性的影響 菌株CBA02不同發(fā)酵時間對鹽生杜氏藻溶藻活性的影響如圖3所示。發(fā)酵時間為48-120 h的菌液均有一定的溶藻活性，且溶藻率隨菌液的發(fā)酵時間和共培養(yǎng)時間的增加而增加，其中發(fā)酵時間為48 h時溶藻率最低，在共培養(yǎng)至第4天時溶藻率沒有明顯變化，第4天之后溶藻率隨共培養(yǎng)時間的增加而有所上升，到第12天溶藻率達(dá)到最大為（9.98±0.14）%；其余各組中溶藻率變化趨勢類似，隨共培養(yǎng)時間的增加而增加，到第12天溶藻率達(dá)到最大，分別為（78.24±0.17）%、（98.69±0.27）%和（99.34±0.05）%。

圖1 菌株CBA02的16S rDNA序列與相關(guān)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹

圖2 菌株P(guān)onticoccus sp.CBA02的生長曲線

圖3 Ponticoccus sp.CBA02菌液不同發(fā)酵時間對溶藻活性的影響

2.3.2 菌液不同添加添加量對溶藻活性的影響 菌株CBA02菌液不同添加量對鹽生杜氏藻溶藻活性的影響如圖4所示。各組中溶藻率隨體積比的增加而增加，其中菌液體積比為5%時溶藻率隨共培養(yǎng)時間的增加而有所上升，至第8天達(dá)到最大（33.49±0.54）%，第8天之后呈下降趨勢；其余各組中溶藻率變化趨勢相近，隨體積比和共培養(yǎng)時間的增加而增加，到第12天溶藻率達(dá)到最大，分別為（62.99±0.28）%、（82.79±0.24）%和（98.69±0.14）%。

圖4 Ponticoccus sp.CBA02菌液不同添加添加量對溶藻活性的影響

2.3.3 藻液初始濃度對溶藻活性的影響 鹽生杜氏藻的藻液初始濃度對菌株CBA02溶藻活性的影響如圖5所示。各組中溶藻率隨藻液初始濃度的增加而降低，藻液初始OD750為0.1時，溶藻率隨共培養(yǎng)時間的增加而上升，至第12天達(dá)到最大值（98.68±0.24）%；藻液初始OD750為0.2、0.3和0.4時，共培養(yǎng)至第2天時溶藻率有所增加，第2-8天溶藻率變化幅度并不明顯，但第8天后溶藻率隨共培養(yǎng)時間的增加而大幅提升，第12天達(dá)到最大，分別為（73.99±2.27）%、（53.44±1.24）%和（41.76±0.96）%，最終溶藻活性隨初始OD750的增加而降低；藻液初始OD750為0.5時，溶藻率于第2天達(dá)到最大為（10.64±0.77）%，之后隨共培養(yǎng)時間的增加而降低，到第12天溶藻率為（2.53±0.23）%。

圖5 鹽生杜氏藻不同藻液初始濃度對溶藻活性的影響

2.3.4 菌液CBA02的溶藻方式分析與高溫處理影響 為了研究菌株CBA02對鹽生杜氏藻SCSIO-45153的作用方式，將Ponticoccus sp.CBA02的菌體、菌液、無菌上清液及高溫處理無菌上清液分別接入藻液進(jìn)行共培養(yǎng)，結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明，與對照組相比，菌液、無菌上清液及高溫處理無菌上清液組中葉綠素含量顯著性降低（P＜0.05），葉綠素a含量分別為0.28 μg/mL、1.42 μg/mL和0.29 μg/mL，溶藻率分別為96.69%、83.23%和96.58%；菌體組中葉綠素a含量僅有小幅度降低，其溶藻率為12.40%，其中，高溫處理的無菌上清液和菌液的溶菌活性也明顯高于無菌上清液（P＜0.05）。

圖6 Ponticoccus sp.CBA02菌液不同處理對溶藻活性的影響

2.3.5 pH對菌株CBA02無菌上清液的溶藻活性影響 調(diào)節(jié)菌株CBA02無菌上清液pH對其溶藻活性的影響如圖7所示。各組中溶藻率隨pH的增加而增加，上清濾液pH為2時，培養(yǎng)至第2天時溶藻率有所增加，第2-6天溶藻率大致處于平衡狀態(tài)，到第6-8天溶藻率隨培養(yǎng)時間的增加而降低，第8-12天溶藻率大致沒有變化；上清濾液pH為4和6時，第6天之前溶藻率變化趨勢與pH為2大致相同，第6天之后溶藻率隨共培養(yǎng)時間的增加而上升，到第12天達(dá)到最大，分別為（27.28±2.27）%和（48.74±2.27）%；上清濾液pH為8和10時，溶藻活性隨共培養(yǎng)時間的增加而增加，到第12天溶藻率達(dá)到最大分別為（85.63±0.33）%和（99.02±0.17）%。

圖7 Ponticoccus sp.CBA02無菌濾液經(jīng)不同pH處理后對鹽生杜氏藻的溶藻效率的影響

3 討論

3.1 微藻規(guī)?；囵B(yǎng)與溶藻菌污染

目前，已規(guī)?；囵B(yǎng)的具有應(yīng)用價值的常用微藻主要包括螺旋藻、鹽生杜氏藻、小球藻和雨生紅球藻等［12］，在微藻的大規(guī)模養(yǎng)殖中，細(xì)菌、其他浮游生物的入侵污染會降低微藻的產(chǎn)量，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，是急需解決的重要問題。Scott等［15］從生長狀況不佳的微擬球藻中分離出一株芽孢桿菌（Bacillus pumilus），該菌株對微擬球藻的生長具有極大的抑制作用。Ding等［16］從含油微藻（Graesiella sp.WBG-1）的開放養(yǎng)殖跑道池中分離出一株該藻的體內(nèi)寄生真菌Amoeboaphelidium protococcarum，該真菌能引起含油微藻（Graesiella sp.WBG-1）的種群崩潰。本研究從海南省三亞市天涯鎮(zhèn)被污染微藻開放養(yǎng)殖池中分離獲得一株藍(lán)藻（Cyanobacterium sp.SCSIO-45682）的藻際環(huán)境中分離得到1株細(xì)菌CBA02，對鹽生杜氏藻具有極強(qiáng)的溶藻能力，經(jīng)分子鑒定屬于紅桿菌科（Rhodobacteraceae）的Ponticoccus屬，雖然該菌株與P.alexandrii的16S rDNA的相似度達(dá)到100%，但由于尚未開展生理生化和其它分子序列的比較分類研究，尚不能肯定CBA02與P.alexandrii為同一物種，因此目前僅能定名為Ponticoccus sp.CBA02。

鹽生杜氏藻（Dunaliella salina）是一種極具商業(yè)價值的微藻之一，富含大量的生物活性物質(zhì)，如甘油、胡蘿卜素、蛋白質(zhì)、多糖和各種微量元素等，在食品，醫(yī)藥，保健，化學(xué)和水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有獨(dú)特的經(jīng)濟(jì)價值［17］。由于鹽生杜氏藻的培養(yǎng)基采用高鹽度這一避免微生物污染的策略進(jìn)行商業(yè)化培養(yǎng)，尚無有關(guān)細(xì)菌對鹽生杜氏藻產(chǎn)生溶解效應(yīng)的報道，但過高的鹽度同時也限制了鹽藻的快速生長，因此，開展溶藻機(jī)制對于降低其培養(yǎng)鹽度、提高產(chǎn)率和減少高鹽極端條件控制所須的成本將均有裨益。而且正是由于微藻受制于細(xì)菌等微生物的污染及其導(dǎo)致的溶藻、噬藻或攝食微藻等敵害行為，目前僅有數(shù)種類似鹽藻具有極端適應(yīng)性的微藻實(shí)現(xiàn)商業(yè)化開發(fā)，豐富多樣的微藻資源和生物活性物質(zhì)還未能深入挖掘。以鹽藻的溶藻細(xì)菌為模式，開展溶藻機(jī)制和溶藻防控技術(shù)，對更好地開發(fā)微藻種質(zhì)資源具有十分重要的理論意義和應(yīng)用價值。

3.2 菌株CBA02的溶藻特性及溶藻機(jī)制

本研究發(fā)現(xiàn)，溶藻菌作用活性隨菌液發(fā)酵時間的增長而提高；溶藻菌Ponticoccus sp.CBA02的溶藻活性與其添加量有關(guān)，菌液濃度越高，溶藻活性越好，菌液添加濃度與溶藻活性呈現(xiàn)正相關(guān)的量效關(guān)系，在溶藻菌濃度較低時，其對藻細(xì)胞抑制作用不佳；溶藻菌作用活性與藻細(xì)胞初始濃度密切相關(guān)，藻細(xì)胞初始濃度越高，溶藻菌溶藻活性越差。CBA02溶藻的量效關(guān)系等特性與前人的報道類似，已有研究表明，溶藻菌的溶藻特性受到菌濃度、藻細(xì)胞初始濃度、光照強(qiáng)度、溫度、pH等多種因素影響。Shao等［18］研究表明當(dāng)Bacillus sp.B50的細(xì)胞濃度達(dá)到 1.9×106CFU/mL時才有溶藻活性，而細(xì)胞濃度低于1.9×105CFU/mL時沒有溶藻活性，陳慶麗等［19］發(fā)現(xiàn)溶藻菌Pseudomonas aeruginosa JM1 的溶藻效率隨藻細(xì)胞濃度的增加而降低。

溶藻細(xì)菌主要通過直接溶藻和間接溶藻兩種方式進(jìn)行，前者直接進(jìn)攻藻細(xì)胞，與藻細(xì)胞表面直接接觸，甚至侵入藻細(xì)胞內(nèi)而引起藻細(xì)胞裂解死亡，后者主要都是通過分泌抑制藻類生長或者溶解藻細(xì)胞的胞外物質(zhì)來間接攻擊藻類［20］。本研究表明，CBA02的菌體只有微弱的溶藻活性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于菌液和無菌上清液處理組，表明菌株CBA02的溶藻方式是間接溶藻，直接溶藻方式的可能性不大，推測該菌株通過釋放某些溶藻活性物質(zhì)殺死鹽生杜氏藻SCSIO-45153。CBA02的菌體也具有微弱的溶藻性可能由于藻菌共培養(yǎng)時菌體已生長至對數(shù)生長末期和環(huán)境的突然改變導(dǎo)致菌體仍會分泌少量的溶藻活性物質(zhì)。

與本研究類似，目前已在生態(tài)學(xué)研究中報道了多種間接溶藻菌的存在，如Li等［20］發(fā)現(xiàn)溶藻菌LY03通過分泌幾丁質(zhì)酶溶解細(xì)胞壁使其裂解死亡。Yi等［21］報道了Acinetobacter sp.A2通過分泌殺藻物質(zhì)4-羥基苯乙胺高效殺死銅綠微囊藻。Harvey等［22］報道Pseudoalteromonas piscida通過分泌群體感應(yīng)信號分子前體改變菌藻互作關(guān)系，誘導(dǎo)赫氏圓石藻（Emiliania huxleyi）死亡。有關(guān)經(jīng)濟(jì)微藻養(yǎng)殖中溶藻細(xì)菌的鑒定、溶藻方式的確定及其溶藻特性的研究并不多見。

從圖5中同時還可以看出，這些推定的溶藻物質(zhì)具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，無菌過濾液經(jīng)高溫處理，其活性甚至高于未處理的無菌過濾液，一方面說明溶藻物質(zhì)可能主要為耐高溫的非蛋白結(jié)構(gòu)成分，另一方面，說明過濾上清液中可能存在熱敏、可抑制溶藻物質(zhì)溶藻活性的成分，在高溫處理后其抑制活性被解除，溶藻物質(zhì)的溶藻活性得以提高。

由圖7可見，酸堿條件對溶藻物質(zhì)的活性具有顯著的影響，較強(qiáng)酸性條件（pH2）時的溶藻活性非常低，但當(dāng)pH 逐漸升高溶藻物質(zhì)的溶藻活性也隨之增強(qiáng)，高堿（pH10）時表現(xiàn)極強(qiáng)的溶藻活性，說明酸堿條件可能改變?nèi)茉寤钚晕镔|(zhì)的穩(wěn)定性、化學(xué)組成或結(jié)構(gòu)及其與藻細(xì)胞的相互作用關(guān)系，從而改變其溶藻活性。

綜上所述，菌株CBA02通過分泌溶藻物質(zhì)間接方式殺死鹽生杜氏藻SCSIO-45153，溶藻物質(zhì)的主要成分可能為非蛋白成分，其溶藻特性受發(fā)酵時間、添加量、藻細(xì)胞初始濃度和pH的影響，同時具有熱穩(wěn)定性，高pH條件更適宜其溶藻作用，溶藻活性隨著pH的降低逐步降低。這些特性對更好的追蹤、闡明溶藻物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)、特性與作用機(jī)制，以及針對微藻養(yǎng)殖的溶藻現(xiàn)象建立適宜的防控技術(shù)，提供了重要的科學(xué)線索和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，相關(guān)工作有待更進(jìn)一步的探索。

4 結(jié)論

本研究從經(jīng)濟(jì)微藻開放池養(yǎng)殖池污染的藍(lán)藻（Cyanobacterium sp.SCSIO-45682）中分離出1株溶藻菌CBA02，經(jīng)16S rRNA 基因鑒定為Ponticoccus sp.CBA02。該菌對鹽生杜氏藻SCSIO-45153具有極強(qiáng)的溶藻作用，胞外產(chǎn)生水溶性、熱穩(wěn)定、適宜較高pH的溶藻物質(zhì)是溶藻現(xiàn)象發(fā)生的主要原因，其溶藻活性受菌液發(fā)酵時間、添加量、藻細(xì)胞初始濃度和pH等因素的影響。