□ 陳靖欣 中山市食品藥品檢驗所

一次性無菌耗材愈來愈廣泛地應用于微生物實驗中，雖然一次性無菌耗材在生產和出廠時，已經符合相關衛(wèi)生標準。但在貯存和運輸過程中，不能完全保證無菌用品的密封性及其無菌狀態(tài)不被破壞，往往在實驗中才發(fā)現使用的一次性無菌耗材已被污染，但已對實驗結果造成不可挽回的影響。而目前依然沒有詳細標準要求微生物實驗室需要對購進的一次性無菌耗材進行驗收。微生物實驗大多不能蟲谷，考慮到一次性無菌耗材可能會對微生物實驗結果遭嚴重影響，需重視對一次性無菌耗材無菌的驗收和管理。但如果每次都完全按照產品標準對一次性耗材進行驗收，會大大增加微生物實驗室的工作量。所以在此對購進的一次性無菌耗材提出建立無菌驗收和管理規(guī)程的建議。

1 目的

對食品微生物實驗室購進的一次性無菌耗材進行無菌驗收和集中管理，有效維持耗材的無菌狀態(tài)，從而保證實驗結果準確有效。

2 適用范圍

食品微生物實驗室一次性無菌耗材（一次性使用滅菌手套、滅菌/無菌口罩、一次性無菌培養(yǎng)皿、一次性無菌接種環(huán)、一次性無菌接種針、無菌采樣袋、無菌均質袋等）[1—2]。

3 注意事項

同一運輸日期、品牌、品類、型號規(guī)格、批號的樣品做一次驗收。上述條件只要有一項不一樣均要求分別驗收。

最小包裝：整個產品中，以最小密閉無菌環(huán)境包裝樣品的包裝稱為最小包裝，最小包裝內的產品不能再拆分來銷售，檢驗前不能開啟，以防污染。大包裝：以多個最小獨立包裝組成的包裝稱為大包裝。例如：規(guī)格為500 個平皿/箱，10 個平皿/包的一次性無菌培養(yǎng)皿中，10 個平皿/包的包裝打開后平皿可以直接使用，則10個平皿/包的包裝為最小獨立包裝，500 個平皿/箱為大包裝。

4 外觀驗收

接收時，產品應帶有合格證明，清晰標注批號和/或生產日期、有效期及貯存條件，否則均應拒收或退回。外包裝潔凈，形狀完好，表面不得有破損、污漬。樣品最小獨立包裝密封性完好，表面不得有破損、污漬。同時可向供應商索取或官網下載檢測報告。

5 無菌驗收

5.1 抽樣方法

每次抽樣至少取3 個最小包裝樣品作為平行樣。為使樣品具有良好的代表性，采取隨機抽樣方法，盡量選自多個大包裝，不得在同一批號內的同一包裝內鄰近部位集中選取所需的全部樣品。

5.2 實驗環(huán)境要求

100 級潔凈室或100 級層流超凈工作臺(以下分別簡稱潔凈室與超凈臺）。

5.3 驗收前準備

潔凈室地面、實驗臺桌面、超凈臺桌面擦凈消毒后，將試樣及其他所需器材放妥，毛巾和脫脂棉球需經過濕熱滅菌處理，把所需耗材預先放入實驗室再進行紫外照射，開啟紫外線消毒至少30 min，此過程也對物體表面進行了消毒。但培養(yǎng)基等試劑不能預先放入實驗室，因為培養(yǎng)基里的某些成分可能會分解，培養(yǎng)基在紫外后通過傳遞窗放入。

5.4 取樣方法

可剪碎的耗材（如手套、口罩）用酒精棉擦拭產品外包裝后，無菌操作打開外包裝，將樣品置于無菌器皿，用滅菌剪刀和鑷子將樣品剪碎，用于稱取的單個碎片面積應不大于25 cm2（5 cm×5 cm）， 稱 ?。?0±1）g 樣品加入到200 mL 滅菌生理鹽水中，手動混勻或均質器拍打1 ～2 min，準備5 個無菌平皿，每平皿加1 mL 樣液。

對于可用于直接培養(yǎng)的耗材（如無菌采樣袋、無菌均質袋），用酒精棉擦拭產品外包裝后，無菌操作打開外包裝，加入200 mL 滅菌生理鹽水于樣品容器內部，手動混勻或均質器拍打1 ～2 min，準備5 個無菌平皿，每平皿加1 mL 樣液。

一次性無菌培養(yǎng)皿雖為可用于直接培養(yǎng)的器皿，但其最小包裝內通常含有多個平皿，如平皿表面污染也會造成平皿內部污染，所以建議采用該方法取樣。

不可剪碎的耗材（如一次性接種環(huán)、一次性接種針、一次性移液管、一次性槍頭或一次性培養(yǎng)皿）：用酒精棉擦拭產品外包裝后，無菌操作打開外包裝，稱?。?0±1）g 樣品加入到200 mL 滅菌生理鹽水中，可根據樣品重量按比例增加生理鹽水的量，用生理鹽水充分浸泡樣品內外面。手動混勻1 ～2 min，準備5 個無菌平皿，每平皿加1 mL 樣液。

5.5 樣品培養(yǎng)

向每個裝有樣液的平皿中加入15 ～20 mL 的營養(yǎng)瓊脂，混勻，待冷卻凝固后，置于（35±2）℃培養(yǎng)48 h后，計算平板菌落數。

5.6 實驗區(qū)空白對照

無菌驗收過程中，應同時檢查潔凈室或超凈臺空氣的菌落數。用至少2個直徑9 cm 的培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的約15 ～20 mL 營養(yǎng)瓊脂，在潔凈室或超凈臺的中間位置打開上蓋，暴露30 min 后對空氣采樣后，蓋上蓋置于（35±2）℃培養(yǎng)48 h，取出檢查培養(yǎng)皿上是否生長菌落，均無菌落生長則檢測環(huán)境合格，若有菌落生長此次試驗結果應判為無效。

5.7 結果判定

所有平板均不生長菌落，該樣品則達標，可判為合格，通過驗收，可投入使用。

若有平板生長菌落，該樣品不達標，判為不合格，應聯(lián)系供應商退回樣品。

6 一次性無菌用品管理

建立一次性無菌耗材文檔，用于存放一次性無菌耗材的合格證明、質檢報告和驗收記錄。建立一次性無菌耗材購進領用記錄。

7 一次性無菌耗材的存放

一次性無菌耗材應存放于陰涼干燥、通風良好的物架上或儲物柜中，距離地面不少于20 cm，距天花板不少于50 cm。應分類放置，不建議與其他物品混放，未驗收與已驗收的應分開標識，新到耗材應貼上“未驗收”標簽，驗收通過的應貼上“已驗收”標簽，同時遵循先進先出的原則。不能將運輸包裝直接帶入潔凈室，應去除最外層包裝或更換潔凈包裝方可帶入實驗區(qū)。每次實驗前應預估耗材用量，按需帶入實驗區(qū)，不建議實驗區(qū)長期存放大量一次性無菌耗材，避免污染。存放時間超過6 個月的一次性無菌耗材應再次進行無菌驗收。在儲存過程中有懷疑儲存條件已對一次性無菌耗材造成污染時，耗材應立即停用，重新進行驗收。根據驗收結果重新判斷是否可以繼續(xù)使用。

8 結語

在建立了食品微生物實驗室一次性無菌耗材無菌驗收和管理規(guī)程后，一次性無菌耗材得到有序的集中管理，改變了以往無序存放、隨機拿取的無序管理狀態(tài)，有效避免了使用已污染的一次性無菌耗材進行微生物實驗，大大降低了一次性耗材污染給實驗結果帶來的影響，工作效率也得到了提高。