常豐華

(吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院·吉林吉林·132101)

毛脈酸模（Rumex gmelini Turcz.）為蓼科酸模屬多年生草本植物，是我國黑龍江、吉林等省份長白山地區(qū)的常用藥用資源植物，自然資源蘊(yùn)藏量豐富[1]。民間以根入藥，用于淋病、上呼吸道感染、癬病和瘡毒等疾病的治療[2]。毛脈酸模作為一味民間草藥，國內(nèi)外相關(guān)研究報道較少，通過藥理研究發(fā)現(xiàn)毛脈酸模具有良好的抗病原微生物、抗氧化、抗腫瘤、減輕急性肺損傷和降壓等作用[3-5]。此外，毛脈酸模乙酸乙酯部位對心肌細(xì)胞缺血性損傷具有顯著的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與降低心肌耗氧、清除氧自由基、抗心肌脂質(zhì)過氧化等有關(guān)，但是具體有效物質(zhì)或有效成分尚不明確[6]。本實驗對毛脈酸模石油醚和乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的提取、分離及鑒定，為今后進(jìn)行主要藥效學(xué)和藥代動力學(xué)的研究，及安全性的早期評價，并進(jìn)一步闡明毛脈酸模乙酸乙酯部位保護(hù)心肌有效單體化合物奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)，從而為其新藥的研發(fā)和申報提供了重要的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

ZF-I型三用紫外分析儀；INOVA-600型超導(dǎo)核磁共振光譜儀；BRUKER AV-500MHz型超導(dǎo)核磁共振光譜儀；薄層層析硅膠、柱層析硅膠200～300目（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠 （美國GE）；薄層色譜用硅膠板（TLC Silica gel 60 F254）、高效硅膠薄層層析板（HPTLC silica gel 60）（德國Merck公司產(chǎn)品）；HPLC采用的甲醇為色譜純，水為重蒸水；顯色劑為10%的H2SO4乙醇溶液。

毛脈酸模原藥材，采自吉林左家地區(qū)，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院中草藥栽培與鑒定教研室鑒定為毛脈酸模(Rumex gmelini Turcz.)。

2 提取與分離

取干燥毛脈酸模根及根莖10kg，粉碎置回流提取器中，加8倍量50%乙醇溶液連續(xù)回流提取3次（分別為 3h，2h，1h），合并濾液，減壓濃縮后干燥至恒重，粉碎成干粉，所得粉末為毛脈酸模50%乙醇提取物。所得提取物加入60倍量蒸餾水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯系統(tǒng)溶劑萃取,分別得到石油醚和乙酸乙酯部位，將萃取部位濃縮至浸膏。取石油醚萃取部位7.5g，采用硅膠（200～300目）柱層析法，以石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)（100∶1）進(jìn)行反復(fù)洗脫，得到化合物1。取乙酸乙酯萃取部位300g，采用硅膠（100～200目）柱層析法，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)（50∶1、30∶1、15∶1、10∶1）進(jìn)行梯度洗脫，TLC示蹤合并相同流分，得4個組分Fr.Ⅰ～Fr.Ⅳ。 Fr.Ⅰ、Fr.Ⅱ反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析(200～300目)分離和純化，得到化合物 2～4。 Fr.Ⅲ、Fr.Ⅳ再反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析 (200～300目)、Sephadex LH-20凝膠柱層析等進(jìn)一步分離和純化，得到化合物5～7。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：黃色針狀結(jié)晶 （EtOAc），mp 164～166℃。 分子式為 C13H12O3。1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ：7.47（1H，d，J=8.0Hz，H-6），7.06（1H，m，H-7），6.97（1H，s，H-5），6.84（1H，d，J=8.0Hz，H-8），2.75（3H，s，H-12）,2.64（3H，s，H-13）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的酸模素[7]一致，確定為酸模素（nepodin）。

化合物 2：白色針狀晶體 (CHCl3)，mp 139.5～142℃，分子式為C29H50O。

1H-NMR (CDCl3，500MHz) δ：5.36 （1H，dd，J=1.8,3.6Hz，H-6），3.52（1H,m，H-3），2.29～1.05(29H,m)，0.94～0.68（3H×6，H-18，H-19，H-21，H-26，H-27，H-29）。13C-NMR（CDCl3，500Mz）給出 29 個 C 信號分別將其進(jìn)行歸屬顯示，δ：140.9（C-5），121.8（C-6），77.3（C-3），77.1（C-14），76.9（C-17），71.9（C-9），56.9（C-4），56.2（C-13），50.3（C-12），46.0（C-24），42.5（C-1），39.9（C-10），37.4(C-20)，36.6(C-7)，36.3(C-16)，34.1（C-2），32.0（C-8），31.8（C-11），29.3（C-15），28.4（C-22），26.3（C-23），24.4（C-27），23.2（C-28），21.2（C-19），19.9（C-25），19.5（C-21），19.2（C-29），18.9（C-26），12.0（C-18）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的 β-谷甾醇[8]一致，故確定化合物2為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

化合物 3：黃色結(jié)晶(CHCl3)，mp 195～196℃，分子式為 C15H10O4。

1H-NMR(CDCl3，500MHz) δ：12.10（1H，s，H-1），12.00 （1H，s，H-8）,7.81 （1H，d，J=7.5Hz，H-5），7.68（1H，t，J=8.0Hz，H-6），7.65 （1H，d，J=1.5Hz，H-4），7.29 （1H，d，J=8.2Hz，H-7），7.09 （1H，d，J=1.5Hz，H-2），2.46（3H，s，CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的大黃酚[7]一致，故確定化合物3為大黃酚（chrysophanol）。

化合物 4：黃色針狀結(jié)晶(CHCl3)，mp 202～204℃，分子式為C16H12O5。

1H-NMR (CDCl3，500MHz) δ：7.62 （1H，d，J=2.2Hz，H-4），7.36 （1H，d，J=2.2Hz，H-2），7.08（1H，d，J=2.5Hz，H-5），6.68 （1H，d，J=2.5Hz，H-7），3.94（3H，s，OCH3），2.45（3H，s，CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的大黃素甲醚[7]一致，故確定化合物4為大黃素甲醚（physcion）。

化合物5： 桔紅色針狀結(jié)晶 （EtOAc），mp 255～257℃，分子式為 C15H10O5。

1H-NMR (DMSO，500MHz) δ：7.45 （1H，d，J=2.3Hz，H-4），7.17 （1H，d，J=2.0Hz，H-5），7.06（1H，d，J=2.3Hz，H-2），6.58 （1H，d，J=2.0Hz，H-7），2.39（3H，s，CH3）。13C-NMR（DMSO，500Mz）δ：189.6（C-9），181.2（C-10）；124.0（C-2），120.3（C-4），108.8（C-5），107.8（C-7），21.4（CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的大黃素[7]一致，故確定化合物5為大黃素（emodin）。

化合物6：白色針狀晶體 （CH3OH），mp 164～166℃，分子式為 C19H22O8。

1H-NMR （CD3OD，500MHZ）δ:7.43(1H，d，J=8.0Hz，H-4),7.37(1H，t，J=7.5，8.0Hz，H-3),7.33(1H，d，J=7.5Hz，H-2),7.15(1H，s，H-5),5.12(1H，d，J=8.0Hz，H-1′),3.43～3.95(6H，m，H-2′～6′),2.29(3H，s，H-12)，2.60(3H,s，H-13)。13C-NMR（CD3OD，500MHZ）δ:208.2（C-11），156.1（C-1），152.8（C-8），138.1（C-10），134.6（C-6），128.5（C-3），126.1（C-7），123.8（C-4），120.9（C-5），114.9（C-9），111.8（C-2），104.9（C-1′），62.5～78.8(C-2′～6′),32.3（C-12），19.8（C-13）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷[9]一致，故確定化合物6為酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷（nepodin-8-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物7：白色針狀結(jié)晶 （CH3OH），mp 256～257℃，分子式為C14H12O3。紫外燈（365nm）下顯藍(lán)紫色熒光。三氯化鐵—鐵氰化鉀反應(yīng)呈陽性。

1H-NMR (CD3OD，500MHz) δ：7.35 （2H，d，J=8.5Hz，H-2′，H-6′），6.93(1H，d，J=16.3Hz，乙烯 H-β），6.81 （1H，d，J=16.3Hz， 乙烯 H-α），6.75 （2H，d，J=8.5Hz，H-3′，H-5′），6.44（2H，d，J=2.0Hz，H-2，H-6），6.16 （1H，t，H-4）。13C-NMR（CD3OD，500Mz）δ：159.6（C-3，C-5），158.3（C-4′），141.3（C-1），129.4（C-1′）,128.7(C-2′，C-6′)，128.7 （C-β），127.0 （C-α），116.4（C-3′，C-5′），105.8 （C-2，C-6），102.6 （C-4）。結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)，將其數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的白藜蘆醇[10]的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)二者基本一致，故確定化合物7為白藜蘆醇（resveratrol）。

4 討論

研究結(jié)果表明，毛脈酸模石油醚和乙酸乙酯部位主要包括蒽醌類、黃酮類、二苯乙烯類、萘類衍生物等多種類型化學(xué)成分。其中，酸模素、大黃酚、大黃素和白藜蘆醇的含量極高，可作為以上物質(zhì)的資源植物加以開發(fā)利用。在分離鑒定出的7個化合物中，化合物2,6均為首次從毛脈酸模植物中分離得到。