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        仙牛腰骶痛顆粒對(duì)SD大鼠非壓迫腰椎間盤(pán)突出的影響

        2020-12-23 07:50:14宮海全許艷茹于艷輝
        人參研究 2020年6期
        關(guān)鍵詞:硬膜外低劑量腰椎間盤(pán)

        宮海全,許艷茹,石 菊,于艷輝,吳 萍,徐 建

        (吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司·吉林長(zhǎng)春·130012)

        仙牛腰骶痛顆粒由淫羊藿、千年健、地楓皮、牛膝組成。功能主治溫陽(yáng)祛濕,通經(jīng)止痛,用于治療腰骶痛寒濕阻絡(luò)證。腰骶痛是腰椎骨質(zhì)增生、腰肌勞損、腰椎間盤(pán)突出多種因素造成的臨床上一種常見(jiàn)的疾病,本研究采用硬膜外穿刺非壓迫性腰椎間盤(pán)突出模型,觀(guān)察仙牛腰骶痛顆粒對(duì)腰椎間盤(pán)突出疼痛改善作用,明確藥物作用機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

        1 材料

        1.1 動(dòng)物

        SD大鼠,雌雄各半,體重200~220g,均購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

        1.2 藥物

        仙牛腰骶痛顆粒:由修正藥業(yè)集團(tuán)長(zhǎng)春高新制藥有限公司提供,批號(hào):20191110;美洛昔康片:上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司,批號(hào):A89562;SP、IgM、IgG、IL-1、IL-6、PGE2試劑盒, 購(gòu)自南京建成生物工程研究所,批號(hào):20191204。

        1.3 儀器

        SMP500-18272-LSIO酶標(biāo)儀;Primo型低溫冷凍離心機(jī)。

        2 方法[1-5]

        2.1 分組

        將60大鼠隨機(jī)分組,分別為空白組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(美洛昔康片1.4mg·kg-1)、仙牛腰骶痛顆粒低、中、高劑量組(2.2、4.4、8.8g·kg-1),每日 1 次,連續(xù)灌胃14d,灌胃容積為10mL·kg-1。

        2.2 模型建立

        空白組不做特殊處理,其余各組均使用醫(yī)用繃帶在生理彎曲范圍內(nèi)將鼠尾折成U型呈屈曲位,每日1次,早上纏上繃帶,晚上解開(kāi),建立非壓迫性腰椎間盤(pán)退變的模型。30日后,正常組不作任何特殊處理。1%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔麻醉,無(wú)菌條件下距尾根部1cm處切下鼠尾并用2-0號(hào)四線(xiàn)間斷縫合傷口。切開(kāi)尾部椎間盤(pán),見(jiàn)髓核呈膠凍樣約10mg,取5個(gè)髓核并加入50L生理鹽水,充分?jǐn)嚢柘♂尦苫鞈乙河?。大鼠屈曲?cè)臥位,以L(fǎng)4-5椎體間隙為穿刺點(diǎn)用9號(hào)腰椎穿刺針行硬膜外穿刺,分別注射20μl自體髓核混懸液和2%利多卡因30μl。穿刺方向?yàn)獒樀慕似蝾^側(cè)約因個(gè)體差異而角度不同斜行刺入20°至30°不等。縫合后,腹腔注射抗生素預(yù)防感染。

        2.3 指標(biāo)測(cè)定

        腹主動(dòng)脈取血 5mL,3500 r·min-1,離心 15min,吸取上清液分裝,-20℃保存?zhèn)溆谩?yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定各組大鼠血清中SP、IgM、IgG的含量,在取完血清標(biāo)本后切取腰4神經(jīng)根,以不銹鋼電動(dòng)勻漿器制備組織勻漿 4000r離心15min取上清液作樣本測(cè)定IL-1、IL-6、PGE2。

        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理,進(jìn)行t檢驗(yàn),用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        3.1 對(duì)大鼠血清IgM、IgG、SP的影響

        大鼠硬膜外穿刺非壓迫性腰椎間盤(pán)突出模型后,與空白組相比,模型組血清中IgM、IgG、SP釋放量增加(P<0.01);與模型組比較,仙牛腰骶痛顆粒高、中、低劑量組能夠明顯抑制IgM、IgG的釋放及SP的合成(P<0.001,P<0.01),結(jié)果見(jiàn)表1。

        表1 對(duì)大鼠血清 IgM、IgG、SP 的影響(±s,n=10)

        表1 對(duì)大鼠血清 IgM、IgG、SP 的影響(±s,n=10)

        與空白組比較,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

        組別 劑量(g/kg)IgM(μg/ml)IgG(mg/ml) SP(ng/ml)空白組 - 11561.1±1196.88 49.5±6.2 887.2±242.9模型組 - 12204.7±1149.3 57.2±2.2## 924.0±116.5陽(yáng)性組 1.4mg 11773.7±1245.3 46.69±5.6***698.0±117.4**高劑量組 8.8 11349.3±757.7 48.74±5.2***575.0±249.1**中劑量組 4.4 10908.2±1194.1 43.0±11.3** 435.8±207.6***低劑量組 2.2 8818.3±718.3*** 38.2±7.3*** 187.8±78.8***

        3.2 對(duì)大鼠神經(jīng)根中IL-1、IL-6、PGE2含量的影響

        大鼠硬膜外穿刺非壓迫性腰椎間盤(pán)突出模型后,與空白組比較,模型組大鼠IL-1、IL-6釋放量,PGE2合成明顯升高(P<0.01,P<0.001);與模型組比較,高、中、低劑量組能夠明顯抑制IL-1、IL-6的釋放以及PGE2 合成速度(P<0.001,P<0.01,P<0.05),結(jié)果見(jiàn)表2。

        表2 大鼠神經(jīng)根中IL-1、IL-6、PGE2含量(x±S,n=10)

        4 討論

        腰椎間盤(pán)突出是導(dǎo)致腰背痛的病因之一,其發(fā)病率為5%~10%,占腰腿痛病人的60%以上,據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,腰背痛的發(fā)病率已位于三大慢性病第三位。臨床研究表明,神經(jīng)根的機(jī)械壓迫并不是發(fā)病的唯一原因,椎間盤(pán)組織突出后會(huì)誘發(fā)的化學(xué)性炎癥和自身免疫反應(yīng)也會(huì)影響疼痛。非壓迫性腰椎間盤(pán)退變雖沒(méi)有直接對(duì)神經(jīng)根造成機(jī)械壓迫,但退變的椎間盤(pán)因破裂等因素產(chǎn)生各種各樣的生物化學(xué)因子,如髓核等因子作用于神經(jīng)根造成損傷和疼痛[5-8]。

        IL-1和IL-6是非常經(jīng)典的炎癥介質(zhì),且能刺激增加疼痛介質(zhì)PGE2及P物質(zhì)(SP)的合成,導(dǎo)致局部疼痛的敏感度增加,從而進(jìn)一步加重腰腿疼痛[9-12],臨床證明,IL-1和IL-6在突出椎間盤(pán)組織中具有較高的活性[13-16]。本研究表明:仙牛腰骶痛顆粒高、中、低劑量組可降低IgM、IgG含量,調(diào)控自身免疫反應(yīng),同時(shí)仙牛腰骶痛顆??蓽p少I(mǎi)L-1、IL-6的釋放,抑制致痛物質(zhì)PGE2、SP的合成,進(jìn)而緩解腰椎間盤(pán)突出的疼痛。

        綜上所述,仙牛腰骶痛顆??赡芡ㄟ^(guò)調(diào)控IgM、IgG自身免疫,阻斷炎性因子IL-1、IL-6的釋放,抑制致痛物質(zhì)PGE2、SP的合成,從而達(dá)到改善腰椎間盤(pán)突出疼痛的作用,但其確切的分子機(jī)制有待進(jìn)一步探討研究。

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