馮曉東 劉風(fēng)波 白建

(1，呂梁市農(nóng)業(yè)學(xué)校 033000；2，襄垣縣職業(yè)技術(shù)學(xué)校 046200；3，呂梁學(xué)院生命科學(xué)系 033001)

由于大腸桿菌的血清型繁多，加之近年來抗菌藥物在臨床上的濫用，使得大腸桿菌的耐藥性不斷增加，并出現(xiàn)多重耐藥菌株，致使某些抗生素在防治大腸桿菌病時(shí)出現(xiàn)了療效下降甚至無效的情況，給養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。

1 材料

1.1 病料

2019 年4 月由山西某雞場(chǎng)提供的病、死雞若干只，取其心、肝、脾和水腫液。

1.2 試驗(yàn)用品

瓊脂平板、培養(yǎng)基和藥敏試紙。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

小白鼠25 只（由山西農(nóng)大動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供）。

2 方法

2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

無菌采集病死雞的心、肝、脾等組織接種，37℃溫箱培養(yǎng)18～24h，觀察菌落形態(tài)。

2.2 實(shí)驗(yàn)室鏡檢

取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的新鮮菌落，抹片，革蘭氏染色鏡檢。

2.3 生化試驗(yàn)

糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、MR 試驗(yàn)、VP 試驗(yàn)、枸櫞酸鹽試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)。

2.4 動(dòng)物感染試驗(yàn)

準(zhǔn)備25 只小白鼠，分為5 組，每組5 只。第1～4 組分別接種用麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、SS 瓊脂和三糖鐵瓊脂斜面上的純培養(yǎng)物所制作的肉湯培養(yǎng)物0.2ml；第5 組接種0.2ml 的肉湯作為對(duì)照組[2]。

2.5 藥敏試驗(yàn)

將分離得到的細(xì)菌用生理鹽水稀釋，均勻涂抹在瓊脂平板上，然后貼上恩諾沙星、環(huán)丙沙星、慶大霉素、氟哌酸、頭孢噻肟、阿莫西林藥敏試紙，37℃培養(yǎng)18h。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

由表1 可知，分離菌在麥康凱瓊脂上呈現(xiàn)紅色菌落；在伊紅美蘭上的生長菌落呈紫黑色帶金屬光澤；分離菌能使三糖鐵斜面變黃，底柱產(chǎn)氣，但不產(chǎn)生H2S。

3.2 細(xì)菌形態(tài)觀察

取新鮮菌落抹片，常規(guī)革蘭氏染色，鏡檢可見單個(gè)或成對(duì)的兩端鈍圓、中等大小的粉紅色的革蘭氏陰性桿菌[3]。

3.3 生化試驗(yàn)

通過生化試驗(yàn)（表2）可以看出，該培養(yǎng)物可以發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖；還可以使吲哚試驗(yàn)和MR試驗(yàn)反應(yīng)呈陽性；使VP 試驗(yàn)和硫化氫試驗(yàn)呈陰性。以上生化試驗(yàn)的結(jié)果符合大腸桿菌的生化試驗(yàn)特性，不符合沙門氏菌的生化特性（沙門氏菌不能發(fā)酵乳糖和蔗糖，且吲哚試驗(yàn)和VP試驗(yàn)呈陰性），可以初步判斷培養(yǎng)物中沒有沙門氏菌只有大腸桿菌[4]。

3.4 動(dòng)物感染試驗(yàn)

由表3 可知，由分離培養(yǎng)基上分離的菌株都能致死小白鼠。在接種病菌12h 后，小白鼠開始出現(xiàn)食欲減少，飲欲增加，精神沉郁等現(xiàn)象；24h 后開始出現(xiàn)死亡，第2 組在48h 后全部死亡。對(duì)照組全部存活，且精神活潑，被毛光亮。無菌操作取一些病料接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，可以得到與分離菌一樣的細(xì)菌。所以，致死小白鼠分離得到的細(xì)菌是同一種菌。

3.5 藥敏試驗(yàn)

由表4 可知，分離菌只對(duì)頭孢噻肟敏感；而對(duì)恩諾沙星、環(huán)丙沙星、阿莫四林和氟哌酸不敏感，這可能是由于大腸桿菌耐藥性所致。

4 小結(jié)

4.1 環(huán)境因素

如果飼養(yǎng)環(huán)境條件差，消毒不嚴(yán)，場(chǎng)地污染嚴(yán)重會(huì)造成雞大腸桿菌感染。

4.2 防疫措施

如果防疫措施不健全，沒有使用大腸桿菌疫苗或有傳染病的雞沒有及時(shí)隔離、治療；病雞、健康雞混養(yǎng)，都會(huì)促進(jìn)傳染。

4.3 日糧配制

如果日糧配制不合理，會(huì)降低雞的抵抗力，加速大腸桿菌感染。

4.4 用藥因素

表1 大腸桿菌與沙門氏桿菌在鑒別培養(yǎng)基上的菌落特征

表2 生化試驗(yàn)結(jié)果

表3 動(dòng)物感染試驗(yàn)結(jié)果

表4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

如果不堅(jiān)持連續(xù)用藥或未鞏固治療即停藥，會(huì)使疫病復(fù)發(fā)；而本防治措施是在確診的基礎(chǔ)上針對(duì)病因，采取抗菌消炎和環(huán)境消毒，使大腸桿菌病得到控制。