唐瑾暄，魚 歡，郭彩權(quán)，秦曉威 ，白亭玉，宗 迎

（1.海南大學園藝學院，海南 ?？?570228；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所/海南省熱帶香辛飲料作物遺傳改良與品質(zhì)調(diào)控重點實驗室/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部香辛飲料作物遺傳資源利用重點實驗室，海南 萬寧 571533；3.云南農(nóng)業(yè)大學熱帶作物學院，云南 普洱 665000）

0 引言

【研究意義】香露兜（Pandanus amaryllifoliusRoxb.），俗稱斑蘭葉，又名斑斕葉、香蘭葉、板蘭葉、碧血樹，為露兜樹科（Pandanaceae）露兜樹屬（Pandanus）常綠草本植物[1]，香味清新淡雅，鮮葉可直接作為食用材料，被譽為“東方人的香草”，具有非常高的經(jīng)濟開發(fā)價值。原產(chǎn)地為印度尼西亞馬魯古群島，主栽于斯里蘭卡、馬來西亞、泰國、印度、菲律賓等國家，年產(chǎn)鮮葉約400 萬t，其中東南亞占80%以上[2]，我國香露兜為境外引進作物，20世紀50 年代從印度尼西亞引入海南興隆試種成功，主栽于海南、云南等地區(qū)，廣東、臺灣等省區(qū)亦有零星分布[3]。香氣成分是影響香露兜風味品質(zhì)的主要因素。香露兜香氣物質(zhì)主要由呋喃類、吡咯類、萜烯類、醇類、烯烴類、酯類等化合物組成[4-6]，葉片富含角鯊烯、葉綠醇等活性成分[4,7]，主要特征香氣物質(zhì)2-乙酰-1-吡咯啉（2-acetyl-1-pyrroline, 2AP）[8-9]，能散發(fā)出一種特殊香氣——粽香[10]。香露兜光飽和點僅為550～600 μmol·m-2·s-1，適宜在一定蔭蔽條件下生長。遮蔭可以通過調(diào)節(jié)光照強度改變植物葉片光合作用和有機物合成。研究不同遮蔭度對香露兜生長及香氣成分的影響，可為林下復合種植香露兜提供技術(shù)指導。【前人研究進展】研究表明，遮蔭對植物的光合特性影響顯著。在大豆等作物上的研究發(fā)現(xiàn)，隨著蔭蔽度的增加凈光合速率（Pn）、蒸騰速率（Tr）、葉片水壓虧損（Vpd）和光合有效輻射（PARi）呈遞減趨勢，胞間二氧化碳濃度（Ci）呈遞增趨勢[11-14]。在蔭蔽環(huán)境下大豆植株通過調(diào)節(jié)光合器官結(jié)構(gòu)來增強對環(huán)境的適應性，降低Pn 減少對同化物的消耗，促進光合同化物的積累[11]。適度的遮蔭有利于促進植物光合同化物的積累和轉(zhuǎn)化，提高產(chǎn)量，70%蔭蔽度可提高香草蘭Pn 和PARi[12-13]。光照會影響植物香氣成分種類和含量。湯永堅[15]等在香稻上的研究表明，灌漿后期的遮光處理能夠通過提高水稻中脯氨酸的含量，使γ-氨基丁酸（GABA）的合成受到影響，使籽粒GABA 含量下降，進而增加水稻中2AP 的含量，影響香稻的香氣成分。沈生榮[16]等在蒸青綠茶上研究表明，遮蔭處理使蒸青綠茶中芳樟醇、橙花醇、香草醇、香葉醇及其環(huán)化后生成的萜品烯等重要香氣成分明顯提高?！颈狙芯壳腥朦c】香露兜光飽和點較低，種植香露兜在不影響香露兜生長和風味品質(zhì)的前提下，需要進行適度遮蔭。香露兜主要種植在檳榔、橡膠、椰子等經(jīng)濟林下，經(jīng)濟林種類和種植密度不同導致林下蔭蔽存在一定差異。遮蔭是否對香露兜的光合性能、生長狀況及香氣成分等產(chǎn)生影響，目前尚未見相關(guān)研究報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究以人工蔭蔽的方法，研究采用4 種不同蔭蔽度處理，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對香氣成分進行鑒定分析，研究香露兜光合性能、生長特性及香氣成分的變化，探討香露兜生長適宜的蔭蔽度，以期為生產(chǎn)上林下復合種植香露兜奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選取健康、生長基本一致的香露兜幼苗為試驗材料。

香露兜幼苗：在中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所（18°15′ N; 110°13′ E）溫室大棚一號基地沙床培育1 個月，裝袋培育3 個月。

1.2 試驗設(shè)計

采用盆栽試驗，于2019 年2 月開始在中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所進行試驗，塑料盆規(guī)格為65 cm × 22 cm × 20 cm。試驗設(shè)30%、60%、90%和全光照等4 種不同蔭蔽度處理，每種處理5 個重復，采用雙苗定植。不同蔭蔽度的處理均由同一種遮陽網(wǎng)疊加而成。栽培基質(zhì)均為土壤與園林廢棄物（3∶1）的混合物。栽培基質(zhì)pH 為6.82、電導率為72.5 μS·cm-1、有 機質(zhì)含量68.6 g·kg-1、全氮含量為8.89 g·kg-1、堿解氮含量98.56 mg·kg-1、有效磷含量29.6 mg·kg-1、有效鉀含量253.09 mg·kg-1。試驗期間水肥管理一致。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 光合特性測定 于試驗布置3 個月后測定不同蔭蔽度下香露兜葉片光合特性。使用LI-6 400 便攜式光合儀（美國LI-COR 公司產(chǎn)）在香露兜倒6～7 葉位測定Pn、Gs、Tr、Ci、TL和PARi等光 合特性 指標。使用紅藍光源，光合有效輻射為500 μmol·m-2·s-1，使用CO2鋼瓶供氣，流量為500 μmol·s-1，葉溫設(shè)定為27 ℃。待讀數(shù)穩(wěn)定時，每片葉記錄1 個Pn 值，重復3 次。

1.3.2 葉片和分蘗測定 分別于試驗布置3 個月和4 個月后測定不同蔭蔽度下香露兜葉片數(shù)量和植株分蘗數(shù)量。每個處理隨機選取3 株香露兜，統(tǒng)計其分蘗株數(shù)和主枝葉片數(shù)（不包括分蘗苗葉片數(shù)量）。

1.3.3 香氣成分測定 （1）萃取方法：每個處理隨機選取3 株香露兜，采集倒6～7 葉位的新鮮葉片，用蒸餾水沖洗干凈葉面雜質(zhì)后，用白色紗布吸干葉片表面水分并在室內(nèi)靜置5 min，環(huán)境溫度為（22±3） ℃。分別稱量5 g 剪碎的鮮葉樣品于50 mL離心管中，加入15 mL 無水乙醇，在400 W、40 KHz、50 ℃下超聲波萃取60 min，經(jīng)0.22 μm 有機相針式濾器（尼龍）過濾，獲得提取液，使用Aglient-7890B/5977B 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）檢測。

（2）氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）分析條件：

色譜（GC）條件：色譜柱為DB-WAX（30 m×0.25 mm×0.25 μm）彈性石英毛細管柱，載氣為高純氦氣（99.999%），載氣流量1 mL·min-1，不分流進樣，進樣口溫度為250 ℃，接口溫度為250 ℃。色譜柱初始溫度為50 ℃，保持2 min，以5 ℃·min-1升溫至100 ℃，再以6 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持5 min。

質(zhì)譜（MS）條件：離子源為EI，離子源溫度230 ℃，四極桿溫度150 ℃，進樣口溫度250 ℃，電壓70 eV，掃描質(zhì)量范圍30～450 amu。

1.4 數(shù)據(jù)分析

1.4.1 定性分析 結(jié)合質(zhì)譜和保留指數(shù)（Retention index，RI）對香露兜香氣成分進行定性，其中質(zhì)譜分析結(jié)果在NIST 2017 譜庫進行檢索，比對定性；使用C7～C40 正構(gòu)烷烴混標（上海安譜實驗科技有限公司），以相同條件進行GC-MS 分析，利用其保留時間按照線性方程計算各揮發(fā)性成分的保留指數(shù)RI[17]，實測計算的保留指數(shù)與文獻進行定性分析。

1.4.2 定量分析 精密吸取2-乙酰-1-吡咯啉標準品（純度95%，Toronto Research Chemicals，Canada）、葉綠醇標準品（GC≥90%，上海源葉生物科技有限公司）、角鯊烯標準品（GC≥98%，上海源葉生物科技有限公司），以及甲醇（色譜純），按照50、100、150、300、500 μg·mL-1的質(zhì)量濃度梯度分別進行配置，按照樣品的色譜條件，標準品梯度濃度由低到高的順序依次進樣，每個質(zhì)量濃度進樣3 次，以各組分梯度濃度為橫坐標，3 次測定峰面積的平均值為縱坐標，得到各組分的定量線性關(guān)系。利用峰面積按照線性方程計算2-乙酰-1-吡咯啉、葉綠醇、角鯊烯的含量，同時再根據(jù)2-乙酰-1-吡咯啉的含量對其他香氣物質(zhì)進行半定量[18]，

計算公式：Xi =（Ai /As）×Cs（其中：Xi 為待測物質(zhì)含量；Ai 為待測物的峰面積；As 為2-乙酰-1-吡咯啉的峰面積；Cs 為樣品中2-乙酰-1-吡咯啉含量）。1.4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)用Ecexl 軟件進行整理，使用Bray-Curtis 相似性檢驗，分析不同蔭蔽度香露兜揮發(fā)性成分組分間的相似性程度；使用ANOSIM非參數(shù)檢驗，進行不同蔭蔽度葉片揮發(fā)性成分組成間的差異性分析；使用One-way ANOVA 和LSD法進行差異顯著性檢驗（P＜0.05）；使用主成分分析（PCA）進行不用蔭蔽度葉片主要揮發(fā)性物質(zhì)成分組成分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用Windows 的R 軟件3.5.1 版本進行分析，并使用Origin 2017 作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 遮蔭對香露兜光合特性的影響

圖1 結(jié)果表明隨著蔭蔽度的增加，香露兜Pn、Gs、Ci和Tr均呈先上升后下降的變化趨勢。30%和60%蔭蔽度處理下Pn、Gs 和Tr 均顯著高于全光照和90%遮蔭處理，且30%蔭蔽處理的Pn 和Gs 顯著高于60%處理。60%蔭蔽處理的Ci 顯著高于其他處理。PARi和TL均隨蔭蔽度的增加呈逐漸下降趨勢。全光照和30%遮蔭處理PARi顯著高于60%和90%處理；30%、60%和90%三種遮蔭處理下TL顯著低于全光照。說明30%～60%的遮陰處理可以提高香露兜的光合作用，通過遮蔭可以降低葉片溫度。

2.2 遮蔭對香露兜生長的影響

從圖2 可以看出，遮蔭處理3 個月后，香露兜葉片數(shù)量隨著蔭蔽度的增加逐漸增多，繼續(xù)遮蔭處理到4 個月時，葉片數(shù)量隨著蔭蔽度的增加呈先升后降的趨勢。3 個月時，60%～90%遮蔭處理葉片數(shù)量顯著高于全光照和30%遮蔭處理。隨著遮蔭處理時間的延長，4 個月時，60%處理葉片數(shù)量顯著高于全光照和90%遮蔭處理，與60%處理之間無顯著差異。香露兜分蘗數(shù)均隨著蔭蔽度的增加逐漸降低，60%和90%遮蔭處理分蘗數(shù)均顯著低于全光照處理，且90%蔭蔽時香露兜無分蘗。說明30%～60%的蔭蔽度可以促進香露兜葉片生長，遮蔭處理抑制了香露兜的分蘗。

2.3 遮蔭對香露兜揮發(fā)性香氣成分種類的影響

圖1 遮蔭處理下香露兜葉片的光合參數(shù)Fig.1 Photosynthetic indices on leaves of pandan plants grown under varied shading treatments

利用GC-MS 技術(shù)對不同蔭蔽度處理香露兜葉片進行揮發(fā)性香氣成分的檢測，經(jīng)組分譜庫檢索和相關(guān)資料分析，檢測出 27 種揮發(fā)性香氣化合物，分別為吡咯類、醇類、酚類、呋喃類、呋喃酮類、烴類、酮類和酯類等8 類。由圖3-A 可見，隨著蔭蔽度的增加香露兜香氣成分的種類呈先上升再下降趨勢，且在不同遮蔭處理下香露兜香氣成分種類中酯類化合物數(shù)量最多，其次是醇類、烴類以及酮類。其中，全光照處理香露兜葉片含有21 種香氣成分，酯類成分占其香氣成分種類的33.33%，醇類和烴類均占19.05%，酮類9.5%，吡咯類、酚類、呋喃類和呋喃酮類均占4.76%；30%遮蔭處理香露兜葉片含有22 種香氣成分，酯類成分占其香氣成分種類的36.36%，醇類和烴類均占18.18%，酮類9.09%，吡咯類、酚類、呋喃類和呋喃酮類均占4.55%；60%遮蔭處理香露兜葉片含有20 種香氣成分，吡咯類、酚類、呋喃類和呋喃酮類成分均占其香氣成分種類的5.00%，醇類20.00%，烴類10%，酮類和酯類均占25.00%；90%遮蔭處理香露兜葉片含有15 種香氣成分，醇類和酯類成分均占其香氣成分種類的26.67%，烴類13.33%，吡咯類、酚類、呋喃類、呋喃酮類和酮類均占5.00%。

圖2 不同蔭蔽度下香露兜的葉片數(shù)（A）和分蘗數(shù)（B）Fig.2 Number of leaves (A) and tillers (B) on pandan plant grown under varied shading treatments

圖3 遮蔭處理下香露兜葉片香氣成分種類數(shù)量（A）和含量（B）Fig.3 Categories (A) and contents (B) of volatile compounds in leaves of pandan plant grown under varied shading treatments

由圖3 可見，不同遮蔭處理香露兜葉片香氣成分種類組成無較大差異，然而香氣成分種類含量差異較大。圖3-B 顯示，香氣成分種類從多到少依次為烴類＞醇類＞酯類＞酮類＞呋喃類＞呋喃酮類＞吡咯類＞酚類。含量最多的是烴類化合物，相對含量高達（49.38±14.86）%（n=4，值域=30.61%～62.99%），且隨著蔭蔽度的增加呈先增加再下降的變化趨勢；其次為醇類化合物，占香氣成分總量的（15.28±9.56）%（n=4，值域=7.73%～29.29%），與烴類化合物變化規(guī)律一致；酯類化合物，占香氣成分 含 量 的（11.75±4.38）%（n=4， 值 域=5.85%～16.42%）；酮類化合物，占香氣成分含量的（10.36±4.37）%（n=4，值域=7.14%～16.46%）；呋喃類為（7.30±1.40）%（n=4，值域=5.79%～9.02%）；呋喃酮類占（4.51±1.58）%（n=4，值域=3.00%～6.36%）；而吡咯類和酚類等化合物種類含量均低于2%。30%和60%蔭蔽處理香露兜葉片吡咯類、醇類、呋喃類、呋喃酮類等化合物種類均顯著高于全光照和90%處理，30%蔭蔽度下醇類、酚類、烴類等化合物種類均顯著高于其他處理，60%蔭蔽度下吡咯類、呋喃酮類、酮類和酯類等化合物種類均顯著高于其他處理。

2.4 遮蔭對香露兜揮發(fā)性香氣成分組成的影響

對香露兜不同蔭蔽度處理與27 種香氣成分進行主成分分析（PCA），結(jié)果表明PC1、PC2 前2 個限制性軸的排序特征值占總變異的99.05%，其中PC1軸解釋了83.72%的變異，PC2 軸解釋了15.33%的變異。由圖4 和表1 可見，角鯊烯、葉綠醇、丙酮醇、2,3-二氫苯并呋喃、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮（3-methyl-2-（5H）-furanone）、（±）-α-羥基-γ-丁內(nèi)酯（α-butyrolactone）、亞油酸乙酯（Ethyl linoleate）等揮發(fā)性物質(zhì)與全光照下香露兜的香氣特征正相關(guān)，其中角鯊烯含量高達（609.38±4.09）μg·g-1，其次為丙酮醇（95.15±5.99）μg·g-1、葉綠醇（62.4±1.28）μg·g-1、2,3-二氫苯并呋喃（61.94±5.8）μg·g-1；30%蔭蔽度香露兜葉片香氣成分與全光照相似，與角鯊烯、葉綠醇、丙酮醇、2,3-二氫苯并呋喃、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮、新植二烯、亞油酸乙酯等烴類、醇類、酚類吡咯類、酮類、呋喃類和呋喃酮類化合物呈正相關(guān)，其中角鯊烯含量高達（784.72±6.87）μg·g-1，其次為葉綠醇（149.23±0.64）μg·g-1、丙 酮 醇（87.36±0.51）μg·g-1和2,3-二 氫 苯 并 呋喃（86±7.22）μg·g-1；60%蔭蔽度香露兜葉片富含角鯊烯、葉綠醇、丙酮醇、2,3-二氫苯并呋喃、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮等化合物；90%蔭蔽度香露兜葉片香氣特征與葉綠醇、角鯊烯、新植二烯、丙酮醇、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮、棕櫚酸乙酯等脂類、醇類和烴類化合物呈正相關(guān)，其中葉綠醇含量高達（70.63±0.96）μg·g-1，其 次 為角鯊烯（41.64±1.5）μg·g-1和新植二烯（36.66±0.18）μg·g-1。

圖4 不同蔭蔽度香露兜葉片香氣成分PCA 分析Fig.4 Biplot of principal components analysis showing aromatics in leaves of pandan plants grown under varied shading treatments

Bray-Curtis 相似性分析表明，不同蔭蔽度香露兜葉片香氣成分組成Bray-Curtis 相似性指數(shù)為62.44%，香氣物質(zhì)組成存在顯著差異。由表1 可見，4 種不同蔭蔽度香露兜葉片香氣成分中有10 種共有化合物，分別為丙醇、丙酮醇、2-乙?；?1-吡咯啉、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮、新植二烯、棕櫚酸乙酯、2,3-二氫苯并呋喃、亞油酸乙酯、葉綠醇和角鯊烯，且不同蔭蔽度處理間存在顯著差異，30%～60%蔭蔽度香露兜葉片2-乙酰-1-吡咯啉、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮、2,3-二氫苯并呋喃、亞油酸乙酯和葉綠醇均顯著高于全光照和90%蔭蔽處理，且2-乙酰-1-吡咯啉、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮和亞油酸乙酯含量在60%蔭蔽處理中顯著高于30%處理。60%蔭蔽處理丙酮醇、新植二烯、棕櫚酸乙酯顯著高于其他處理。30%～60%蔭蔽處理葉片丙醇含量顯著低于其他處理。30%蔭蔽處理角鯊烯含量高達（784.72±6.87）μg·g-1，顯著高于其他處理。此外，如表1 所示，亞麻酸乙酯、1,2-乙二醇和正十四烷僅在全光照下香露兜葉片中檢測到，占其香氣成分的3.74%；1,2-環(huán)己二酮、甲基環(huán)戊烯醇酮和3-甲基環(huán)戊烷-1,2-二酮僅在60%蔭蔽度香露兜葉片中檢測到, 占其香氣成分的1.02%；而（S）-縮水甘油乙酸酯和正十六烷僅在30%蔭蔽度香露兜葉片檢測到，但相對含量不高，不足香氣成分的0.5%。

3 討論與結(jié)論

3.1 遮蔭對香露兜植株生長的影響

環(huán)境因素與植物的生長發(fā)育密切相關(guān)，光照是最主要也是最直接的外界因素之一，能夠通過光照強度大小調(diào)控植物的光合作用進而調(diào)節(jié)植物的生命活動[19-20]。遮蔭對植物的光合作用會產(chǎn)生一定的影響。趙思毅等[14]在苧麻上的研究表明，蔭蔽脅迫降低了苧麻葉片Pn、Gs，提高了Ci，降低了苧麻的光合速率。鄭堅等[21]和薛黎[20]等研究表明遮蔭對植物Pn有顯著的抑制作用，降低了植物光合利用率。劉賢趙等[22]在番茄的研究中發(fā)現(xiàn)，適度遮蔭可以通過增加Gs和Ci來提高光合作用。本研究結(jié)果表明，蔭蔽度為30%和60%時，香露兜葉片Pn、Gs和Tr均顯著增加，Ci在60%蔭蔽度下顯著增加，且遮蔭可以降低葉片溫度。

表1 遮蔭處理下香露兜葉片揮發(fā)性香氣成分及含量Table 1 Volatiles in leaves of pandan plant grown under varied shading treatments

光照條件的改變同時也會影響植物的外部生長狀況和生長發(fā)育情況[23-25]。綠豆在遮蔭下生長，從出苗到開花期呈提前趨勢，開花到成熟出現(xiàn)延后趨勢，株高降低、主莖節(jié)數(shù)和主莖分枝數(shù)減少，莖粗變細，平均節(jié)間伸長，對植株生長影響甚大[26]。大豆和玉米套作，玉米為大豆提供遮蔭，弱光下苗期大豆葉傾角和葉柄長度均顯著增加，大豆葉片生長更為直立，葉柄長度的增加使得群體葉片能夠獲得更大的生長空間[27-28]，增加產(chǎn)量。Zhu 等[25]在叢生福祿考莖部的遮蔭研究結(jié)果表明遮蔭減少了分蘗數(shù)。本研究發(fā)現(xiàn)，遮蔭對香露兜的生長具有顯著影響。30%～60%蔭蔽可以增加香露兜葉片數(shù)量，植株長勢旺盛。遮蔭抑制了香露兜的分蘗，90%蔭蔽處理基本無分蘗。說明適度的蔭蔽可以促進香露兜的生長，但弱光環(huán)境不利于分蘗的形成。這可能是香露兜對蔭蔽環(huán)境作出的反應，蔭蔽條件下香露兜通過調(diào)節(jié)莖段生長速度來適應弱光環(huán)境，分蘗數(shù)的減少有利于主莖的生長。

3.2 遮蔭對香露兜香氣成分的影響

香氣成分是影響香露兜風味品質(zhì)的主要因素，也是香露兜重要的品質(zhì)指標之一。Jiang[6]等和Laohakunjit[29]等用不同的萃取方法提取香露兜葉片香氣成分，并用GC-MS 檢測技術(shù)鑒定發(fā)現(xiàn)葉片香氣成分主要由醇類、芳香類、羧酸類、酮類、醛類、酯類、烴類、呋喃類、萜類等化合物種類組成。本研究以不同蔭蔽度處理香露兜，采用乙醇有機溶劑萃取方法和GC-MS 檢測技術(shù)鑒定發(fā)現(xiàn)香露兜香氣成分物質(zhì)種類由吡咯類、醇類、酚類、呋喃類、呋喃酮類、烴類、酮類和酯類8 類化合物組成，其中烴類、酯類、醇類和酮類4 類化合物香氣成分相對含量達80%以上，是香露兜香氣物質(zhì)組成的主要化合物種類。且不同蔭蔽處理對香露兜香氣物質(zhì)種類含量存在顯著影響，30%和60%蔭蔽處理香露兜葉片吡咯類、醇類、呋喃類、呋喃酮類等化合物種類含量顯著增加，30%蔭蔽度下醇類、酚類、烴類等化合物種類均顯著高于其他處理，60%蔭蔽度下吡咯類、呋喃酮類和酮類等化合物種類均顯著高于其他處理。

Wakte[30]等、尹桂豪[4]等和Mar[7]等研究發(fā)現(xiàn)香露兜葉片中含有2-已烯醛、壬醛、2AP、葉綠醇、角鯊烯、β1 谷甾醇、檜酚酮等主要揮發(fā)性香氣成分。本研究以不同蔭蔽度處理的香露兜幼苗為試驗材料，鑒定發(fā)現(xiàn)香氣成分主要由角鯊烯、葉綠醇、丙酮醇、2,3-二氫苯并呋喃、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮、新植二烯、2AP 等化合物組成，且不同蔭蔽處理香露兜香氣物質(zhì)組成存在較大差異。30%和60%蔭蔽處理香露兜葉片2AP、葉綠醇、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮、2,3-二氫苯并呋喃和亞油酸乙酯等香氣成分顯著增加。研究表明，2AP 是對“粽香”風味有主要貢獻作用的香氣成分，廣泛分布在香稻[31]、香露兜[32]、爆米花[33]、香水椰子[34]等物質(zhì)中。本試驗中，不同蔭蔽度處理下2AP 含量變化顯著，且在60%時含量達到了最高值（13.88±1.64）μg·g-1，但相對含量僅占1.32%，這可能與本試驗材料為香露兜幼苗有關(guān)。除2AP 外，60%蔭蔽處理丙酮醇、3-甲基-2-（5H）-呋喃酮、新植二烯、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯等香氣成分含量最高。此外，檢測到不同遮蔭處理下香露兜葉片富含角鯊烯和葉綠醇化合物，且不同處理下變化顯著，均在蔭蔽度為30%時含量達到最高值。2AP 的合成是以脯氨酸、谷氨酸、鳥氨酸和吡咯啉-5-羧酸為前體物質(zhì)，分別在脯氨酸脫氫酶、谷氨酸脫氫酶、鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶和吡咯啉-5-羧酸合成酶的催化作用下形成吡咯啉-5-羧酸，最后形成2AP。Schieberle 等[35]研究表明，增加脯氨酸和鳥氨酸含量能促進2AP 合成，Yoshihashi 等[36]研究也表明，2AP 的氮源來自脯氨酸和谷氨酸，增加脯氨酸和谷氨酸的含量能促進2AP 的合成。莫釗文等[37]對水稻研究表明脯氨酸脫氫酶、吡咯啉-5-羧酸合成酶和鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶是2AP 合成關(guān)鍵酶，隨著酶含量的增加和酶活性的提高，2AP 含量也增加。關(guān)于不同蔭蔽度下脯氨酸脫氫酶、吡咯啉-5-羧酸合成酶、谷氨酸脫氫酶和鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶等2AP 合成關(guān)鍵酶的變化，脯氨酸、谷氨酸、鳥氨酸和吡咯啉-5-羧酸等前體物質(zhì)含量變化，以及2AP 合成關(guān)鍵酶和前體物質(zhì)對2AP 合成的影響，將在今后進一步開展相關(guān)研究。

本研究中，蔭蔽度為30%～60%可促進香露兜的生長，2AP、葉綠醇等主要香氣成分含量高，風味品質(zhì)佳，是香露兜生長適宜的蔭蔽度。因此，生產(chǎn)上香露兜可種植在檳榔、椰子、橡膠等經(jīng)濟林下，增加林下經(jīng)濟效益。林下間作不僅可以顯著增加經(jīng)濟效益，同時還可改良土壤，促進作物對養(yǎng)分吸收，提高肥料利用率等。關(guān)于林下種植香露兜適宜的種植密度、林-香露兜的互作效應等值得開展研究。