張鵬

太原市標準計量質(zhì)檢院 山西太原 030000

銅綠假單胞菌又稱綠膿桿菌，是一種常見的革蘭氏陰性菌，廣泛分布于自然界、空氣、土壤、人體皮膚表面、動物的毛皮面及呼吸道和腸道等均有發(fā)現(xiàn)繁殖體[1]。這種細菌對抵抗力弱的人有潛在的健康風險，容易導致腦膜炎、急性腸道炎癥、敗血癥和皮膚炎癥。2014 年出臺的《食品安全國家標準包裝飲用水》（GB19298-2014）取消了“菌落總數(shù)”，增加了“銅綠假單胞菌”，一度引起飲用水行業(yè)的欣喜與慌亂。雖然取消“菌落總數(shù)”指標有助于提高包裝飲用水產(chǎn)品的合格率，但是生產(chǎn)純凈水或山泉水的企業(yè)對銅綠假單胞菌較為生疏、認知度低、重視不足，故以為取消了菌落總數(shù)就萬事大吉。

1 設備材料與方法

1.1 待檢樣品

是由中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心組織和負責實施的礦泉水中銅綠假單胞菌的能力驗證計劃（ACAS-PT736（2019））。收到兩組樣品編號分別為ACAS-PT73619-P973、ACASPT73619-Q695。

1.2 檢測方法

（1）實驗方法。采用《GB8538-2016 食品安全國家標準飲用天然礦泉水檢驗方法》。

（2）培養(yǎng)基及試劑。假單胞菌瓊脂基礎培養(yǎng)基/CN 瓊脂、綠膿菌素測定培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、革蘭氏染液、乙酰胺肉湯，均購于北京陸橋技術有限責任公司。

（3）實驗儀器設備。三洋高壓蒸汽滅菌鍋、環(huán)凱手提式無油活塞真空泵、上海森信實驗儀器有限公司生化培養(yǎng)箱、ZF-7（B）型手提式紫外檢測燈、Microfil 漏斗、環(huán)凱無菌濾膜、VITEK2 生化鑒定儀。

（4）樣品處理。收到的樣品是西林瓶中的凍干粉，用520ml無菌水復水，打開樣品后，立即加入10ml 無菌水復水。溶解后，將其吸出放入無菌袋中。用剩余的無菌水反復清洗青霉素瓶內(nèi)壁，回收的清洗液放入上述無菌袋中。此溶液為待測樣品的原液，以保證操作過程中各環(huán)節(jié)的無菌和充分混合。

（5）實驗步驟。

①樣品稀釋。取上述水化好的520mL 樣品原液做四個稀釋度100、10-1、10-2、10-3。用無菌移液管吸取樣品溶液50ml，置于裝有450ml 無菌生理鹽水的均質(zhì)袋中，混勻，制備1:10 的樣品勻漿液。按上述操作步驟，制備10 倍系列稀釋樣品均化。對于每次增量稀釋，使用新的無菌吸管。

②培養(yǎng)。將平板倒置于36℃±1℃培養(yǎng)24-48h，并防止干燥。

2 結(jié)果與分析

ACAS-PT73619-P973 在CN 平板上生長兩種菌落形態(tài)：綠色菌落、白色菌落。

ACAS-PT73619-Q695 在CN 平板上生長一種菌落形態(tài)：綠色菌落。ACAS-PT73619-P973 平板上的菌落在10-3 梯度上，生長有兩種顏色的菌落，分別為綠色菌落和白色菌落。在黑暗處用波長為365nm 的紫外燈照平板，發(fā)現(xiàn)綠色菌落、白色菌落均產(chǎn)熒光。綠色菌落轉(zhuǎn)接綠膿菌素抽提培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)24±2h 后進行綠膿菌素實驗，結(jié)果為陽性，則判定該綠色菌落是銅綠假單胞菌。白色菌落轉(zhuǎn)接于營養(yǎng)瓊脂平板上36℃±1℃培養(yǎng)24±2h，再轉(zhuǎn)接入乙酰胺肉湯中36℃±1℃培養(yǎng)24±2h 后滴入1-2 滴鈉氏試劑，未出現(xiàn)磚紅色沉淀，判定結(jié)果為陰性。同時還將兩種菌落分別用了VITEK2 鑒定儀鑒定，經(jīng)鑒定得出綠色菌落為98%Probability Pseudomonasaeruginosa 銅綠假單胞菌，白色菌落為91%Probability Pseudomonasluteola 淺黃假單胞菌。結(jié)果為23000CFU/250mL。ACAS-PT73619-Q695 平板上的菌落在10-3 梯度上，僅生長了綠色菌落，將綠色菌落接綠膿菌素抽提培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)24±2h 后進行綠膿菌素實驗，結(jié)果為陽性，則判定該綠色菌落是銅綠假單胞菌。經(jīng)VITEK2 鑒定儀鑒定結(jié)果為99%Probability Pseudomonasaeruginosa 銅綠假單胞菌。結(jié)果為14000CFU/250mL。

3 包裝飲用水銅綠假單胞菌的污染的預防措施

3.1 車間環(huán)境控制

銅綠假單胞菌分布廣泛，對惡劣環(huán)境有較強的抵抗力，故企業(yè)應盡量保證車間干燥無積水，建議企業(yè)采用密閉管網(wǎng)排水，并加強車間通風排氣。同時，班前班后應進行清洗消毒等以防止細菌滋生。

3.2 過程控制

企業(yè)應建立生產(chǎn)過程管理制度——對生產(chǎn)過程中水質(zhì)的處理、配料、殺菌、灌裝、封口、清洗消毒和儲運等環(huán)節(jié)產(chǎn)品的質(zhì)量安全進行全面管控。此外，還應定期對石英砂過濾器、活性炭過濾器、保安過濾器、精密過濾器等設備的水體過濾效果進監(jiān)測和記錄。

生產(chǎn)過程中，品管部門還應按規(guī)定定期開展環(huán)境的微生物監(jiān)控、檢測洗滌劑和消毒劑的濃度、驗證容器及蓋的清洗消毒效果、消毒劑殘留等情況，并記錄保存。由于不同種類的消毒劑對不同種類微生物的殺滅時間、使用濃度、作用效果不盡相同，且銅綠假單胞菌具有較強的耐藥性，所以需采用兩種或兩種以上的消毒劑品種，并適當增加使用濃度才能起到較好的滅菌效果[2]。

4 結(jié)語

近年來，我國愈加重視食品安全的重要性，相關法律法規(guī)、標準和制度也日益完善。企業(yè)作為產(chǎn)品質(zhì)量的第一責任人，必須強化責任意識，嚴格執(zhí)行相關法律法規(guī)的要求，加強內(nèi)部管理，保證產(chǎn)品質(zhì)量，讓消費者買得放心，吃得放心。