任 慶 熊銳華 何玉嬋 諸葛金科 陸東蘭 蔣小月

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine induced killer，CIK)是一群由人體外周血單個核細(xì)胞于體外與多種細(xì)胞因子混合培養(yǎng)后生成的異質(zhì)細(xì)胞，對腫瘤細(xì)胞有專屬殺傷效果且不會對正常組織造成損傷，對腫瘤生長有抑制作用，尤其在腫瘤細(xì)胞殘留和微小轉(zhuǎn)移灶清除上具有顯著效果，能抑制癌細(xì)胞復(fù)發(fā)和擴(kuò)散，并改善患者機(jī)體免疫能力[1]。腫瘤患者免疫細(xì)胞數(shù)量達(dá)不到抑制腫瘤細(xì)胞增長的標(biāo)準(zhǔn)，故預(yù)后差。近年來國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究者指出，強(qiáng)化人體免疫系統(tǒng)，重建有效免疫應(yīng)答是繼放化療和手術(shù)切除后最有潛力的抗腫瘤方法，自體CIK細(xì)胞免疫治療被高度重視[2]。關(guān)于自體CIK 細(xì)胞用于鼻咽癌治療的研究甚少。本研究分析CIK治療鼻咽癌對腫瘤標(biāo)志物EB(Epstein-Barr virus，EBV)病毒指標(biāo)及免疫指標(biāo)的影響，為今后自體CIK在鼻咽癌中的應(yīng)用提供依據(jù)，研究結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年2月桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院行放化療的鼻咽癌患者58例，按隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對照組，各30例。觀察組男性21例，女性9例；平均(44.11±5.18)歲；鼻咽癌分期Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為2例、9例、19例；病理類型：鼻咽分化型非角化性癌1例，鼻咽未分化型非角化性癌29例。對照組男性23例，女性7例；平均(45.0±4.30)歲；鼻咽癌分期Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為1例、11例、18例；病理類型：鼻咽分化型非角化性癌2例，鼻咽未分化型非角化性癌28例。2組上述資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有患者均經(jīng)影像學(xué)、病理組織學(xué)等確診；均簽署知情同意書。排除認(rèn)知障礙、精神疾病者和合并其他惡性腫瘤者。本研究獲得桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(倫理編號：2015013)。

1.2 方法

對照組僅行常規(guī)放化療。觀察組在放化療結(jié)束后1個月開始行CIK治療：完成血常規(guī)檢查，白細(xì)胞>8×109/l，或通過注射粒細(xì)胞集落刺激因子實(shí)現(xiàn)上述條件；采集50 ml靜脈血，進(jìn)行收集和培養(yǎng)，14 d后CIK細(xì)胞成熟，數(shù)量為(1～100)×109/l，確認(rèn)無菌后回輸。觀察組均行4次CIK治療。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察回輸CIK細(xì)胞后患者生活質(zhì)量改善情況，具體參考腫瘤患者生活質(zhì)量評分[3]，當(dāng)分值較既往升高則認(rèn)為改善。記錄治療結(jié)束后7 d 2組體質(zhì)量增加情況。在治療結(jié)束后7 d和治療結(jié)束后3個月分別觀察2組患者EB病毒指標(biāo)：DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA，檢測2組免疫指標(biāo)Th1/Th2、CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+。記錄隨訪時間，評估療效，其中療效評估參考RESIST體系對實(shí)體瘤療效評估標(biāo)準(zhǔn)[4]：所有靶病灶消失，病理淋巴結(jié)段徑均<10 mm，為完全緩解；靶病灶直徑之和較基線減少≥30%為部分緩解；靶病灶直徑之和較基線減少≥20%且<30%，無新發(fā)病灶，為好轉(zhuǎn)；靶病灶直徑之和較基線減少<20%或增大<20%，無新發(fā)病灶，為穩(wěn)定；所有靶病灶直徑之和相對增加≥20%，或新發(fā)病灶為進(jìn)展?？傆行?(完全緩解例數(shù)+部分緩解例數(shù)+好轉(zhuǎn)+穩(wěn)定例數(shù))/組例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 2組患者生活質(zhì)量改善情況、體重增加情況對比

觀察組食欲改善率較對照組高，治療3個月體重增加較對照組明顯(P<0.05)，見表1。

表1 2組患者生活質(zhì)量改善情況、體重增加情況對比

2.2 2組患者腫瘤標(biāo)志物EB病毒指標(biāo)對比

治療結(jié)束后7 d 2組患者DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療結(jié)束后3個月觀察組DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA低于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 2組患者腫瘤標(biāo)志物EB病毒指標(biāo)對比

2.3 2組患者免疫指標(biāo)對比

治療結(jié)束后7 d，2組患者Th1/Th2、CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療結(jié)束后3個月，觀察組上述指標(biāo)除CD8+外，其余指標(biāo)均較對照組高(P<0.05)，見表3。

表3 2組患者免疫指標(biāo)對比

2.4 2組治療效果對比

觀察組29例患者中完全緩解9例，部分緩解14例，好轉(zhuǎn)共2例，穩(wěn)定0例，進(jìn)展4例，總有效率為86.21%。對照組29例患者中完全緩解4例，部分緩解15例，好轉(zhuǎn)3例，穩(wěn)定1例，進(jìn)展6例，總有效率為79.31%。2組有效率經(jīng)Fisher確切概率法算出P=0.5074。

3 討論

上世紀(jì)60年代，以研究者Old LJ為首的外國研究小組使用免疫擴(kuò)散法首次發(fā)現(xiàn)EB病毒；此后我國研究者們通過對比鼻咽癌患者與健康人群血清EBV 4種特異性IgG抗體，發(fā)現(xiàn)鼻咽癌患者EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA幾何平均滴度較健康人群高；EA-IgG陽性率較健康人群高[5]。鼻咽癌病因?qū)W研究的深入，進(jìn)一步證實(shí)EB病毒與鼻咽癌發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，細(xì)胞免疫缺陷是導(dǎo)致鼻咽癌治療失敗的主要原因[6]。有研究者開始研究CIK細(xì)胞治療癌癥的價值，本研究發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞治療鼻咽癌具有抑制腫瘤作用，能改善患者免疫功能，提高食欲。下面結(jié)合本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

本研究中治療結(jié)束后7 d 2組患者DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療結(jié)束后3個月觀察組DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA低于對照組(P<0.05)。提示CIK細(xì)胞治療能有效抑制鼻咽癌患者腫瘤細(xì)胞。CD3+、CD4+、CD8+等是CIK群體主要效應(yīng)細(xì)胞，近年來許多研究者指出多種腫瘤與T細(xì)胞亞群狀態(tài)比例失調(diào)有關(guān)，CD4/CD9比值降低與病情嚴(yán)重程度有關(guān)；鼻咽癌患者放化療后常處于免疫抑制狀態(tài)，免疫功能紊亂，表現(xiàn)為Th1/Th2倒置、CD4+/CD8+比值降低，免疫功能下降，導(dǎo)致治療失敗[7-8]。本研究中觀察組回輸CIK細(xì)胞后，CD4+、CD3+細(xì)胞比例升高，CD4+/CD8+比值升高，原本倒置的Th1/Th2回正，這一結(jié)果與Peipp、江龍委等[9-10]研究者指出的CIK細(xì)胞免疫治療能改善鼻咽癌患者T淋巴細(xì)胞群的結(jié)果基本一致。由此可見CIK細(xì)胞治療能改善鼻咽癌患者免疫功能。沈小東、楊永俊等[11-12]研究者發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞可經(jīng)多種途徑溶瘤、殺瘤，有較強(qiáng)體外擴(kuò)增性能，目前研究者們對CIK抗腫瘤的機(jī)制研究逐漸深入，通常認(rèn)為通過以下三大主要途徑發(fā)揮溶瘤和殺瘤和改善機(jī)體免疫作用：①活化的CIK細(xì)胞進(jìn)入人體后能分泌白細(xì)胞介素-2、腫瘤壞死因子、干擾素等多種細(xì)胞因子，能直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并且調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，從而間接滅活腫瘤細(xì)胞[13]；②CIK細(xì)胞在患者體內(nèi)經(jīng)某些淋巴因子作用后，釋放大量有細(xì)胞毒性的胞質(zhì)顆粒至胞外，這些顆粒直接破壞腫瘤細(xì)胞[14]；③CIK細(xì)胞表達(dá)FasL具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，由于CIK細(xì)胞具有抗凋亡基因表達(dá)的作用，因此到達(dá)患者體內(nèi)后能抵抗FasL陽性腫瘤細(xì)胞對CIK的反作用，從而持久溶瘤[15]。由此可見，CIK細(xì)胞回輸體內(nèi)后，在不損傷患者機(jī)體免疫協(xié)同功能和結(jié)構(gòu)的情況下，能直接抑制腫瘤細(xì)胞，改善患者免疫功能，改善患者生活質(zhì)量。故本研究中觀察組患者食欲改善率較對照組高，治療后3個月體重增加較對照組明顯，P<0.05。本研究中2組治療總有效率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示在放化療基礎(chǔ)上使用自體CIK細(xì)胞回輸并不會顯著提高療效。

綜上所述，自體CIK細(xì)胞回輸能有效改善鼻咽癌患者免疫功能，抑制腫瘤細(xì)胞，改善其生活質(zhì)量，如果在此基礎(chǔ)上聯(lián)合其他藥物，能否增進(jìn)療效，值得進(jìn)一步深入研究。