劉曉麗，丁亞星，劉曉方

（1.滎陽市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000；2.滎陽市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000）

支氣管哮喘發(fā)病涉及多種呼吸道細(xì)胞和因子，是一種呼吸道感染和氣流受阻的慢性疾病，其患病機(jī)制主要是呼吸道炎癥和重塑，有易犯病、易反復(fù)、病程長等特征［1-2］。處于嬰幼兒期的兒童支氣管哮喘發(fā)病率較高，嚴(yán)重威脅其身心健康，若未得到及時(shí)治療，甚至可能成為終身疾病。哮喘患兒均存在維生素D 缺乏以及不足情況，這種維生素D 缺乏以及不足狀態(tài)不僅導(dǎo)致患者體內(nèi)鈣磷代謝異常，還會(huì)影響患者體內(nèi)免疫應(yīng)答與炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)［3］。1,25-(OH)2D3是合成25-(OH)D3前體，是維生素D 在體內(nèi)循環(huán)的主要形式［4］。研究顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥因子均參與并介導(dǎo)支氣管哮喘氣道重塑以及炎癥發(fā)生過程。肺泡灌洗液直接來自于患兒病變發(fā)生部位，該部位MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 水平可以直接反映出患兒支氣管哮喘所致炎癥情況［5］。本研究旨在探究兒童支氣管哮喘血清1,25-(OH)2D3水平與肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 一般資料

回顧性分析滎陽市婦幼保健院2015 年12 月至2016 年11 月兒童支氣管哮喘66 例患兒的臨床資料，作為觀察組，根據(jù)哮喘病情分成輕度20例、中度22 例和重度24 例；并收集同時(shí)期就診的30 例非哮喘患兒資料作為對(duì)照組。輕度患兒中男10 例，女10 例；年齡6 個(gè)月至9 歲，平均（5.2±0.34） 歲；病 程4 個(gè) 月 至7 年，平 均（4.13±0.59）年；體質(zhì)量指數(shù)12～17 kg/m2，平均（14.36±0.52）kg/m2。中度患兒中男10 例，女12例；年齡7 個(gè)月至8 歲，平均（5.36±0.41）歲；病程5 個(gè)月至7 年，平均（4.24±0.73）年；體質(zhì)量指數(shù)12～18 kg/m2，平均（14.36±0.41） kg/m2。重度患兒中男12 例，女12 例；年齡6 個(gè)月至8歲，平均（5.29±1.56）歲；病程5 個(gè)月至7 年，平均（4.31±0.22）年；體質(zhì)量指數(shù)11～18 kg/m2，平均（14.34±042）kg/m2。三組患兒在男女比例、年齡和體質(zhì)量指數(shù)等一般資料方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①兒童支氣管哮喘診斷遵循《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》［6］相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；②入院就診時(shí)進(jìn)行詳細(xì)的基本檢查；③家屬對(duì)本研究知情且簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有明顯呼吸道感染患兒；②免疫缺陷、腎功能不全、甲狀腺疾病患兒；③近期服用維生素D 的患兒。

對(duì)照組30 例非哮喘患兒中，男17 例，女13例；年齡8 個(gè)月至9 歲，平均（5.32±0.57）歲；病程5 個(gè)月至7 年，平均（4.43±0.35）年，體質(zhì)量指數(shù)11～17 kg/m2，平均（14.46±0.35）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：①呼吸道畸形或支氣管異物患兒；②家屬知曉本研究且簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近期有感染史或肝腎功能不足者；②免疫缺陷或過敏患兒。觀察組與對(duì)照組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 研究對(duì)象均抽取靜脈抗凝血4 mL，室溫放置2 h，于2 000 r/min 速度下離心15 min，將血清封存于-70℃冷藏待測。哮喘組在支氣管鏡檢查后灌洗支氣管肺泡，灌洗部位選取右肺中葉；對(duì)照組取右肺中葉或非異物側(cè)肺進(jìn)行灌洗。當(dāng)上述部位被支氣管鏡嵌入時(shí)，將無菌鹽水（濃度9 g/L，37℃）通過支氣管鏡吸引孔注入灌洗部位開始灌洗；患兒體重小于20 kg 時(shí)，灌洗量為5～10 mL/次，共2 次；患兒體重大于20 kg者，灌洗量為10 mL/次，共2 次；灌洗后在負(fù)壓100～150 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）下抽吸，手術(shù)操作時(shí)間0.25～0.50 h。所有灌洗液混勻，1 500 r/min速度4℃冷凍離心10 min，上清液冷藏封存于-70℃待測，沉淀物用于細(xì)胞分析。

1.2.2 各項(xiàng)指標(biāo)檢測 細(xì)胞計(jì)數(shù)：使用計(jì)數(shù)池法對(duì)所得肺泡灌洗液沉淀物進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，數(shù)據(jù)表示為×109/L，用于細(xì)胞分類計(jì)數(shù)涂片制備好后采用瑞氏染色法染色，涂片計(jì)數(shù)時(shí)700 個(gè)細(xì)胞/涂片，結(jié)果取3 張涂片平均值。

因子檢測：血清1,25-二羥基維生素D3［1,25-(OH)2D3］水平及支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 水平均采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測，所有因子檢測步驟均嚴(yán)格按照試劑盒上的說明書操作，且由專人操作完成。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較兩組患兒血清1,25-(OH)2D3水平和肺泡灌洗液中MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量水平；②比較哮喘發(fā)作程度不同患兒血清中1,25-(OH)2D3水平和支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量；③分析支氣管哮喘患兒血清1,25-(OH)2D3水平和支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量水平相關(guān)性；④患兒支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)及巨噬細(xì)胞和炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0 軟件包處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，隨后應(yīng)用SNK 檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。計(jì)數(shù)資料用百分率（%）顯示，使用χ2檢驗(yàn)。使用Pearson 進(jìn)行相關(guān)分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清1，25-(OH)2D3 水平和肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量比較

觀察組血清1,25-(OH)2D3水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而觀察組患兒血清MMP-9、TNF-α、TGF-β1 和IL-6 水平則高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 不同程度哮喘患兒血清1，25-(OH)2D3 水平和支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量比較

不同程度哮喘患兒血清1,25-(OH)2D3水平之間關(guān)系為輕度哮喘>中度哮喘>重度哮喘，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而MMP-9、TNF-α、TGF-β1 和IL-6 水平之間變化趨勢則為重度哮喘>中度哮喘>輕度哮喘，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表1 兩組血清1，25-(OH)2D3水平和肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量比較 （）

表1 兩組血清1，25-(OH)2D3水平和肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量比較 （）

表2 不同程度哮喘患兒血清1，25-(OH)2D3水平和支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量比較 （）

表2 不同程度哮喘患兒血清1，25-(OH)2D3水平和支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量比較 （）

注：1）與輕度哮喘組比較，P<0.05；2）與中度哮喘組比較，P<0.05。

2.3 支氣管哮喘患兒血清1，25-(OH)2D3 水平和肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量水平相關(guān)性分析

由相關(guān)性分析可知，哮喘患兒支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 水平與血清中1,25-(OH)2D3之間的關(guān)系均呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 哮喘患兒血清1，25-(OH)2D3水平和支氣管肺泡灌洗液MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 含量相關(guān)性分析

2.4 兩組支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞及炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

觀察組支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞計(jì)數(shù)多于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；觀察組巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)少于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

表4 兩組支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞及炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （）

表4 兩組支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞及炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù) （）

3 討論

支氣管哮喘為呼吸內(nèi)科常見的慢性炎癥疾病，其發(fā)病率在我國極高，尤其在4～5 歲兒童時(shí)期極易發(fā)病，具有患病時(shí)間長、易反復(fù)等特點(diǎn)，患有該病的兒童臨床癥狀為反復(fù)發(fā)作喘息、哮喘或胸悶等，嚴(yán)重威脅兒童的身心健康［7］。研究顯示［8］體內(nèi)外異物可以從呼吸道或肺循環(huán)進(jìn)入肺部，肺部存在由炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子相互作用構(gòu)成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，刺激氣管結(jié)構(gòu)細(xì)胞或炎癥細(xì)胞分泌各類促炎因子，從而誘發(fā)哮喘。

近年來有研究發(fā)現(xiàn)［9］，體內(nèi)維生素D 水平缺乏可能導(dǎo)致支氣管哮喘、肺結(jié)核等肺部疾病，維生素D 不僅可以調(diào)控體內(nèi)鈣、磷代謝，還具有抵抗病毒感染，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，緩解呼吸道重塑等功能。1,25-(OH)2D3是維生素D生物活性代謝產(chǎn)物，可以調(diào)節(jié)血清及骨骼中鈣磷代謝，使其保持平衡［10］。研究發(fā)現(xiàn)［11］，1,25-(OH)2D3與其相關(guān)受體VDR 結(jié)合可發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)；而VDR 基因與呼吸道類疾病關(guān)系密切，并可以調(diào)控機(jī)體免疫反應(yīng)、控制氣道炎癥。孕婦攝入越多維生素D，胎兒出生后患哮喘的概率越低［12］。本研究結(jié)果顯示，非哮喘患兒血清中1,25-(OH)2D3水平顯著高于哮喘患兒（P<0.05），哮喘發(fā)病程度越輕，血清中1,25-(OH)2D3水平越高。蔣文良［13］的研究結(jié)果同樣顯示血清中維生素D 水平與肺部功能呈正相關(guān)，補(bǔ)充維生素D 可輔助治療支氣管哮喘。

MMP-9 由于可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，因此被認(rèn)為與哮喘氣道重塑存在關(guān)系，是導(dǎo)致氣道重塑的關(guān)鍵原因［14］。支氣管哮喘發(fā)作時(shí)，巨噬細(xì)胞被活化，分泌出大量的TNF-α、IL-6 等炎性因子，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞浸潤，致使支氣管痙攣［15］。本研究中，哮喘患兒肺泡灌洗液中MMP-9、TNF-α、TGF-β1和IL-6 顯著高于非哮喘患兒，其水平隨病情加重逐漸上升；哮喘患兒灌洗液中細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞顯著多于非哮喘患兒，而巨噬細(xì)胞數(shù)顯著少于非哮喘患兒。WALTERS等［16］認(rèn)為正常狀態(tài)下肺組織無MMP-9 存在，當(dāng)患有支氣管哮喘時(shí)，調(diào)控MMP-9 基因表達(dá)因子被激活，致使包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞聚集，釋放出TNF-α 等因子加快了MMP-9 合成與活化，因而引起哮喘氣道平滑肌組織MMP-9的表達(dá)上調(diào)，免疫功能受損，巨噬細(xì)胞減少，炎癥細(xì)胞增多，TNF-α、TGF-β1 和IL-6 等炎癥因子水平也增高。

綜上所述，支氣管哮喘患兒血清中1,25-(OH)2D3水平明顯降低，支氣管肺泡灌洗液中MMP-9、TNF-α、TGF-β1、IL-6 水平上升，這種變化趨勢對(duì)兒童支氣管哮喘的治療具有重要的指導(dǎo)意義。