王長(zhǎng)麗，黃禎雄，王勝秋，呂進(jìn)，賓曉蕓，楊睿睿，唐華英

右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000

新城疫（Newcastle disease，ND）是由副粘病毒科、腮腺炎病毒屬的新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的禽類(lèi)致死性傳染病，死亡率高、傳播速度快，感染后主要癥狀包括呼吸窘迫、腹瀉、黏膜出血、循環(huán)障礙和中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，甚至突發(fā)死亡[1-2]，對(duì)我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。目前，傳統(tǒng)NDV疫苗免疫最為常用，雖相對(duì)制造成本低廉，但存在保護(hù)率低、免疫周期短、接種次數(shù)多、劑量大等缺點(diǎn)[4]。NDV疫苗研究進(jìn)展較快，從傳統(tǒng)滅活疫苗到亞單位疫苗、DNA疫苗、重組疫苗。重組桿狀載體疫苗相對(duì)免疫周期長(zhǎng)、保護(hù)效價(jià)高，是目前預(yù)防ND普遍采用的疫苗手段。重組疫苗的臨床應(yīng)用研究較少，通過(guò)添加佐劑增強(qiáng)免疫效果是一種主要的預(yù)防途徑。Gaston[5]首次提出免疫佐劑是一種用于提高疫苗中抗原免疫原性的輔助物質(zhì)，能夠增強(qiáng)疫苗免疫原性和保護(hù)性。近年來(lái)，免疫刺激的DNA序列CpG ODN備受關(guān)注。CpG ODN（oligodeoxynucleotides containing CpG motifs）是含CpG基序的人工合成的寡聚脫氧核苷酸，常作為活疫苗佐劑，可以激活非特異免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，進(jìn)而刺激和調(diào)節(jié)獲得性免疫應(yīng)答[6-7]，廣泛應(yīng)用于禽類(lèi)多種疫苗研究。根據(jù)結(jié)構(gòu)和免疫活力的不同，可將CpG ODN分為A、B、C和P型[8]。其中，B型的作用效果已在臨床實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證[9-10]，能刺激B細(xì)胞增殖、NK細(xì)胞活化或分泌細(xì)胞因子分化。P型CpG ODN是一類(lèi)新型佐劑，含有2個(gè)回文序列，它們刺激細(xì)胞產(chǎn)生IFN-α的水平較C型CpG ODN高，具有廣闊的應(yīng)用前景[11]。近年來(lái)，重組疫苗在Th1或Th2型免疫應(yīng)答方面具有局限性黏膜屏障是阻礙疫苗研究的的關(guān)鍵因素，尤其是B、P型CpG ODN。有關(guān)聯(lián)合重組疫苗使用的免疫效果研究較少，其是否具有增強(qiáng)重組疫苗免疫效果的機(jī)制尚不明晰。本研究以前期遺傳修飾改造的桿狀病毒為載體，將NDV關(guān)鍵保護(hù)性抗原基因F轉(zhuǎn)移至基因組中構(gòu)建雞新城疫重組桿狀病毒疫苗BV-BXY-F，以人工合成型CpG ODN B、CpG ODN P為免疫增強(qiáng)劑，以鼻腔免疫方式進(jìn)行雞體免疫，通過(guò)免疫水平檢測(cè)免疫過(guò)程中2種類(lèi)型CpG ODN對(duì)增強(qiáng)雞新城疫重組桿狀病毒疫苗的免疫增強(qiáng)效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF雞、9～11日齡發(fā)育良好的雞胚購(gòu)自廣州獸藥研究所；BV-BXY-F P3代雞新城疫重組桿狀載體病毒疫苗由右江民族醫(yī)學(xué)院科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心自行制備；雞胚成纖維細(xì)胞由實(shí)驗(yàn)中心凍存；NDV F48E9原始毒株由本實(shí)驗(yàn)中心保存；DMEM培養(yǎng)液、新生牛血清購(gòu)自Hyclone公司。

CpG ODN B（根據(jù)Ren等[12]的研究參考CpG ODN 1826序列，5'-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3'）、CpG ODN P（根據(jù) Yang等[13]的研究參考CpG ODN 21798序列，5'-TCGTCGACGATCGGC GCGCGCCG-3'）、non CpG ODN B（5'-TGGATCA GCTTGGTCAGCTT-3'）、non CpG ODN P（5'-TG CTGCAGCATGCCGCGCGCGGC-3'）均用于雞體免疫試驗(yàn)。

1.2 雞胚成纖維細(xì)胞的制備

選取9～11日齡發(fā)育良好的SPF胚，用滅菌鑷子敲開(kāi)室部位，無(wú)菌取出雞胚，放入滅菌平皿中，去掉頭、尾、內(nèi)臟和四肢，保留軀干部分，將肌肉組織用PBS沖洗2～3次，剪成細(xì)小泥狀放入10 mL離心管中，并向離心管內(nèi)加入3 mL 0.25%胰蛋白酶，37℃水浴消化20 min，期間10 min輕搖1次，用3 mL、10%DMEM終止消化，采用6層紗布過(guò)濾細(xì)胞，濾液經(jīng)800 r/min離心5 min，棄上清；重復(fù)1次上述操作；計(jì)數(shù)，用DMEM培養(yǎng)液將細(xì)胞沉淀重新懸浮至1.0×106/mL，分裝至培養(yǎng)瓶（5 mL/瓶），于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3 TCID50的測(cè)定及免疫-攻毒試驗(yàn)

測(cè)定半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量（TCID50）。參照1.2制備雞胚成纖維細(xì)胞（1.0×106/mL），并接種于96孔板（100 μL/孔），37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～36 h至長(zhǎng)滿(mǎn)單層細(xì)胞；用PBS將NDV F48E9病毒液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)瑢⒚總€(gè)梯度的病毒稀釋液重復(fù)3個(gè)，以100 μL接種于鋪滿(mǎn)單層細(xì)胞的96孔板中，不接種病毒作為對(duì)照，F(xiàn)48E9病毒吸附CEF細(xì)胞1 h（37℃、5% CO2）后吸去病毒液，添加200 μL含10%血清的新鮮DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，每隔12 h觀察一次至CEF細(xì)胞明顯病變；記錄每個(gè)稀釋度的病毒感染的CEF細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）的孔數(shù)，計(jì)算病毒TCID50。

免疫-攻毒試驗(yàn)。選取14日齡SPF雞隨機(jī)分為6個(gè)試驗(yàn)組（20只/組，雌雄各半）進(jìn)行免疫滴鼻試驗(yàn)，A～F組依次為BV-BXY-F+CpG ODN B組、BV-BXY-F+CpG ODN P組、BV-BXY-F+non CpG ODN B組、BV-BXY-F+non CpG ODN P組、BV-BXY-F單獨(dú)免疫組、PBS對(duì)照組。14、28 d進(jìn)行首免和二次免疫，每只200 μL BV-BXY-F+2 μg CpG ODN混合后滴鼻免疫，采用NDV F48E9病毒株對(duì)各組雞只進(jìn)行滴鼻攻毒（42日齡），攻毒劑量104EID50/只，攻毒后觀察各組雞體免疫指標(biāo)變化，直至飼養(yǎng)至10周，統(tǒng)計(jì)臨床保護(hù)率。

1.4 中和抗體效價(jià)檢測(cè)

通過(guò)免疫雞血清中和抗體效價(jià)檢測(cè)試驗(yàn)考察6組免疫雞血清抗體對(duì)NDV F48E9病毒的中和能力，進(jìn)而評(píng)定加入CpG ODN后對(duì)雞體體液的免疫效果。所有免疫組于14、28、42、56和70日齡隨機(jī)翅靜脈采血6只，每只取樣500～1000 μL，室溫靜置，離心分離血清于-20℃保藏；將制備好的雞胚成纖維細(xì)胞接種于96孔板，37℃、5% CO2培養(yǎng)24～36 h至細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)單層；用PBS將DNV F48F9病毒株稀釋至100 TCID50備用；待測(cè)血清融化后56℃水浴30 min，用PBS稀釋血清樣品 70 μL/孔；取 70 μL 病毒稀釋液加至每個(gè)稀釋度血清樣品中，37℃、5% CO2中和反應(yīng)1 h；吸去96孔板中的DMEM培養(yǎng)液，PBS洗滌2次，將20～30 μL病毒血清中和溶液加入CEF細(xì)胞中，每個(gè)中和溶液設(shè)置3個(gè)平行孔，同時(shí)設(shè)定純血清和100 TCID50的病毒液為對(duì)照組，吸附反應(yīng)l h；吸去中和液，加DMEM完全培養(yǎng)液，37℃、5% CO2培養(yǎng)96 h，每隔12 h觀察、記錄細(xì)胞病變情況，按Reed-Muench法計(jì)算每組血清樣品的中和保護(hù)價(jià)（protective dose，PD50），計(jì)算每組血清 PD50的幾何平均數(shù)，即為該日齡雞血清的中和抗體幾何平均滴度（geometric mean titer，GMT）。用ELISA檢測(cè)試劑盒分別檢測(cè)IgG、IgA、sIgA（分泌型IgA）抗體，評(píng)價(jià)6組雞血清抗體NDV體液免疫和黏膜免疫水平。

1.5 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)

利用刀豆蛋白A（ConA）或病毒的特異性抗原刺激，提取雞外周血T淋巴細(xì)胞，引起增殖效應(yīng)，根據(jù)試驗(yàn)組T淋巴細(xì)胞的免疫刺激指數(shù)（stimulation index，SI）評(píng)估不同刺激組的細(xì)胞免疫效果。每組選取3只雞在首免、二免后的1周（21日齡和35日齡），攻毒后1、2周（49日齡和56日齡）翅靜脈采血2 mL，分裝于10 mL EP管中，等體積稀釋混勻，將稀釋血液沿管壁緩慢加入雞淋巴細(xì)胞分離液上（稀釋血液與分離液柱高比為3∶2～2∶1），2000 r/min離心20 min，試管中的液體可以分為4層，用1 mL注射器緩慢吸取離心管中間的白色細(xì)胞層，將其放入新的10 mL EP管中，加入D-Hank's液重復(fù)洗滌2次，1500 r/min離心10 min，棄上清，加入1 mL RPMI1640重懸淋巴細(xì)胞（1.0×107/mL）；按照G3580試劑盒說(shuō)明，加入各試驗(yàn)組的淋巴細(xì)胞，每孔 50 μL（5.0×105/孔），共設(shè)NDV刺激孔（含50 μL NDV的細(xì)胞懸液）、ConA刺激孔（陽(yáng)性對(duì)照，含5 μg/mL ConA的細(xì)胞懸液）及相應(yīng)對(duì)照孔（含50 μL RPMI1640培養(yǎng)基）3組，重復(fù) 3個(gè)，37℃、5% CO2培養(yǎng) 48 h，每孔加入10 μL CellTiter 96 Aqueous One Solution 試劑，37℃恒溫孵育4 h，酶標(biāo)儀檢測(cè)D490nm，取3個(gè)平行孔的平均值，計(jì)算刺激指數(shù)。SI=試驗(yàn)組D490nm平均值/相應(yīng)對(duì)照組D490nm平均值。

1.6 細(xì)胞因子檢測(cè)

不同試驗(yàn)組分別在 14、28、42、56及 70日齡隨機(jī)翅靜脈采血6只，每只0.5～1 mL，離心分離血清，用細(xì)胞因子ELISA試劑盒測(cè)定雞血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞的濃度。

1.7 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)用Origin8.0和Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)均以x±s表示，均數(shù)間的比較采用差異顯著性分析，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 免疫雞攻毒存活率和臨床癥狀

結(jié)果得到TCID50=10-4.5/100 μL，首免和二免后雞只表現(xiàn)正常，但攻毒2～7 d后均出現(xiàn)不同程度的發(fā)病，主要表現(xiàn)為精神低靡、食欲不振、呼吸困難、飲水增多、排便異常，發(fā)病后期部分雞只出現(xiàn)臥地不起、轉(zhuǎn)脖癥狀，甚至死亡。免疫雞攻毒結(jié)果顯示（圖1），BV-BXY-F+CpG ODN B聯(lián)合免疫組（A組）存活率為100%，較BV-BXY-F+CpG ODN P組（B組）、BV-BXY-F單獨(dú)免疫組（E組）分別提高了31.43%和46.73%。結(jié)果表明，免疫佐劑CpG ODN B不僅能夠增強(qiáng)BV-BXY-F疫苗對(duì)雞的保護(hù)率，且效率明顯優(yōu)于其他組。

2.2 免疫雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖情況

圖1 6組免疫雞只生存情況分析

圖2 雞體免疫后淋巴細(xì)胞增殖情況

如圖2所示，試驗(yàn)組（A和B組）和對(duì)照組（E和F組）的T淋巴細(xì)胞受NDV和ConA刺激后均出現(xiàn)增殖反應(yīng)，隨著天數(shù)的增加，各組雞的免疫刺激指數(shù)SI出現(xiàn)先升高后降低趨勢(shì)，49 d試驗(yàn)組SI值達(dá)到最大分別為 4.52±0.07、4.26±0.09，與對(duì)照組（3.01±0.17、0.67±0.05）相比差異極顯著（P＜0.01），且A組免疫雞淋巴細(xì)胞的SI值與B組相比差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明添加CpG ODN B對(duì)雞體刺激可以產(chǎn)生較強(qiáng)的黏膜免疫應(yīng)答反應(yīng)，效果優(yōu)于其他試驗(yàn)組。

2.3 中和抗體、sIgA、IgG和IgA的測(cè)定

如圖3所示，A～E組免疫前（14日齡）中和抗體效價(jià)和sIgA含量均較低，但在首免和二免后中和抗體效價(jià)、sIgA水平均開(kāi)始上升后下降，分別在42和56 d時(shí)達(dá)到最大，而PBS對(duì)照組抗體始終維持較低水平無(wú)明顯變化。42 d時(shí)，A、B組免疫雞血液中和抗體效價(jià)分別為1634.56±2.65和1237.52±2.21，與E組（863.08±3.24）相比差異極顯著（P＜0.01）；56 d時(shí)，A、B組免疫雞鼻腔中 sIgA抗體水平分別為435.06±2.01和401.19±3.50 ng/L，與 E組（382.60±2.69 ng/L）相比差異顯著（P＜0.05）。同時(shí)，A組免疫雞血清中和抗體效價(jià)和免疫雞鼻腔中sIgA抗體水平分別較B組提高了32.08%和8.44%，差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果說(shuō)明CpG ODN對(duì)重組疫苗BV-BXY-F起到了免疫協(xié)同作用，能刺激雞體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，添加CpG ODN B能夠?qū)V-BXY-F起到較強(qiáng)的免疫協(xié)同作用，刺激雞體產(chǎn)生較強(qiáng)的黏膜免疫應(yīng)答，效果優(yōu)于其他組，檢測(cè)結(jié)果與攻毒保護(hù)結(jié)果基本吻合。

如圖4所示，各試驗(yàn)組首免后免疫雞血清中IgG和IgA抗體水平呈先升高后降低，56 d和42 d時(shí)各組IgG和IgA值達(dá)到最大，而PBS對(duì)照組免疫雞血清中IgG和IgA抗體水平始終較低。A組免疫雞血清中IgG和IgA抗體含量較E組分別提高了10.4%和21.3%，且差異顯著（P＜0.05），B組的IgG和IgA抗體水平則低于E組。與此同時(shí)，A組免疫雞血清中IgG和IgA抗體含量較B組分別提高了 13.56%和 23.71%（P＜0.05），表明添加 CpG ODN B可以協(xié)同重組疫苗，更好地刺激雞體產(chǎn)生更強(qiáng)的黏膜免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)。

2.4 細(xì)胞因子免疫指標(biāo)分析

A組IFN-γ、IL-2、IL-4、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞含量分別為 613.34±2.87（56 d）、798.66±3.47（42 d）、963.48±5.55（42 d）、132.46±0.37（56 d）、192.32±0.25（42 d），與 B 組相比差異顯著（P＜0.05），與E組相比差異極顯著（P＜0.01）。說(shuō)明添加CpG ODN B對(duì)BV-BXY-F起到了免疫協(xié)同作用，能刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生較強(qiáng)的黏膜免疫應(yīng)答。

70 d時(shí)，A組細(xì)胞因子仍維持較高水平，IFN-γ、IL-2、IL-4、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞含量分別為 126.89±1.59、162.24±3.54、155.26±2.93、46.29±0.22、46.64±0.80，與B組相比差異顯著（P＜0.05），與E組相比差異顯著（P＜0.05）。說(shuō)明添加CpG ODN B，在免疫后期能協(xié)助重組疫苗刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)雞體黏膜免疫應(yīng)答。綜上所述，添加CpG ODN B對(duì)雞新城疫重組桿狀病毒疫苗有增強(qiáng)效應(yīng)。

圖3 雞體免疫組誘導(dǎo)NDV中和抗體效價(jià)和雞鼻腔中sIgA抗體水平

圖4 雞血清中IgG和IgA抗體水平

3 討論

新城疫是禽類(lèi)致死性傳染病，對(duì)我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。添加CpG ODN對(duì)增強(qiáng)雞新城疫重組桿狀病毒載體疫苗是臨床上有效的預(yù)防手段之一。CpG ODN可激活哺乳動(dòng)物、禽類(lèi)及魚(yú)類(lèi)的免疫系統(tǒng)，通過(guò)天然免疫系統(tǒng)增強(qiáng)機(jī)體對(duì)外界病原的抵抗力[14]。在雞體內(nèi)，TLR配體作為佐劑可以增強(qiáng)對(duì)病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)感染的免疫防護(hù)，獲得了理想的結(jié)果[15]。B型CpG ODN 2007與H9N2禽流感病毒滅活疫苗聯(lián)合肌肉注射雞群，能夠更加有效地刺激產(chǎn)生中和抗體免疫應(yīng)答，中和抗體水平顯著高于以角鯊烯基為佐劑的疫苗[16]；CpG ODN 2007與NDV滅活疫苗聯(lián)合鼻內(nèi)給藥免疫雞群，提高了血清IgG和sIgA的表達(dá)水平，可以誘導(dǎo)T細(xì)胞的分化，保護(hù)雞群免受NDV強(qiáng)毒株的致死性攻擊[17]；CpG ODN 2007可以通過(guò)上皮樹(shù)突狀細(xì)胞的吸收，幫助H9N2禽流感病毒穿過(guò)鼻黏膜上皮細(xì)胞，這是最佳固有免疫應(yīng)答的一個(gè)全新機(jī)制[6]。上述研究表明CpG ODN可以有效激活雞體的黏膜和全身免疫應(yīng)答，為進(jìn)一步發(fā)展滴鼻的禽類(lèi)病毒疫苗提供了全新前景。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)通過(guò)改變CpG ODN的序列和結(jié)構(gòu)來(lái)改變其類(lèi)型和性質(zhì)，可以?xún)?yōu)化其免疫增強(qiáng)效果，但不同類(lèi)型CpG ODN對(duì)于不同類(lèi)型疫苗黏膜免疫效果的影響不同。

本研究以人工合成的2種類(lèi)型的CpG ODN為免疫佐劑，與雞新城疫重組桿狀病毒載體疫苗BV-BXY-F混合后在雞體內(nèi)進(jìn)行滴鼻免疫及攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，CpG ODN B聯(lián)合免疫組的雞只保護(hù)率達(dá)100%，而CpG ODN P聯(lián)合免疫組的存活率為68.57%，表明不同類(lèi)型CpG ODN的免疫協(xié)同能力確有不同。He[18]等在評(píng)價(jià)各類(lèi)合成CpG ODN誘導(dǎo)火雞先天免疫應(yīng)答能力時(shí)同樣發(fā)現(xiàn)，不同CpG基序和不同序列結(jié)構(gòu)對(duì)于CpG ODN的免疫刺激活性有很大的影響。該團(tuán)隊(duì)通過(guò)測(cè)量火雞外周血單個(gè)核細(xì)胞中的NO產(chǎn)量來(lái)評(píng)價(jià)CpG ODN誘導(dǎo)火雞先天免疫應(yīng)答能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo)NO大量產(chǎn)生的CpG ODN是人特異性CpG ODN M362，隨后是CpG ODN 2006（人）和CpG ODN 1826（小鼠）。可見(jiàn)，在眾多類(lèi)型的CpG ODN中，CpG ODN 1826具有較強(qiáng)的免疫刺激作用，故本研究中合成的CpG ODN序列參照文獻(xiàn)中的CpG ODN 1826序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，結(jié)果表明CpG ODN B對(duì)雞新城疫桿狀病毒疫苗的免疫增強(qiáng)效果較好。另外，添加CpG ODN B聯(lián)合免疫組的中和抗體水平也明顯高于添加CpG ODN P組，此結(jié)果與Wang[19]等分別以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、糞鏈球菌和B類(lèi)CpG ODN作為免疫佐劑與H5N1滅活油乳劑疫苗聯(lián)用進(jìn)行雞體免疫結(jié)果類(lèi)似?？梢?jiàn)，添加CpG ODN B對(duì)雞新城疫重組桿狀病毒疫苗有較強(qiáng)的免疫協(xié)同作用。本研究中聯(lián)合免疫組BV-BXY-F+CpG ODN B的免疫雞血清IgG和IgA抗體水平較BV-BXYF+CpG ODN P組分別提高13.56%和23.71%。Gomis[20]等將CpG ODN注射至雞的感染部位時(shí)發(fā)現(xiàn)注射部位的IgG抗體水平明顯升高，表明CpG ODN可誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生不同水平的黏膜免疫應(yīng)答，進(jìn)而刺激不同水平的體液免疫應(yīng)答。細(xì)胞免疫應(yīng)答水平方面，CpG ODN B聯(lián)合免疫組免疫雞血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的含量均明顯高于CpG ODN P聯(lián)合免疫組，此結(jié)果與Chrzastek[21]等一致，免疫雞外周血淋巴增殖試驗(yàn)亦得到相似結(jié)果。表明不同類(lèi)型的CpG ODN可誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生不同水平的細(xì)胞免疫應(yīng)答，其中CpG ODN B的免疫增強(qiáng)效果最為顯著。

此外，CpG ODN B聯(lián)合免疫組的sIgA水平遠(yuǎn)高于CpG ODN P聯(lián)合免疫組，且差異顯著，此結(jié)果與Iho[7]等一致。可見(jiàn)，CpG ODN確實(shí)可作為黏膜佐劑進(jìn)行機(jī)體免疫，協(xié)助各類(lèi)疫苗提高其免疫效果，且CpG ODN B和CpG ODN P具有不同的免疫協(xié)同作用。從結(jié)果來(lái)看，當(dāng)CpG ODN B刺激雞體黏膜組織時(shí)可產(chǎn)生較高水平的黏膜免疫應(yīng)答，進(jìn)而誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生較高水平的全身系統(tǒng)性免疫應(yīng)答，以全面提高疫苗的免疫保護(hù)效果，添加CpG ODN B對(duì)雞新城疫重組桿狀病毒疫苗的增強(qiáng)效果較好。