周興卓，劉洪玲，丁媛媛

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 青島 266000)

兩頭尖，又名竹節(jié)香附，系毛茛科銀蓮花屬植物多被銀蓮花的干燥根莖。多夏季采挖，除去須根，洗凈，干燥。辛，熱，有毒[1]。具有祛風(fēng)濕，消癰腫之功效[2]，有抗腫瘤、抗驚厥、抗炎等作用[3-5]，主要含有三萜皂苷、揮發(fā)油等成分，其中竹節(jié)香附素A是發(fā)揮抗腫瘤活性的主要成分[6-9]。

《中國(guó)藥典》(2015版)中記載兩頭尖藥材具有一定的毒性，每次用量為1～3 g。據(jù)報(bào)道[10]，小鼠灌胃毒性實(shí)驗(yàn)表明，兩頭尖水提物L(fēng)D50為104.50 g/kg，按照中藥毒性分級(jí)，兩頭尖藥材毒性介于“中毒”和“小毒”之間。鑒于有毒中藥經(jīng)過(guò)合理炮制后可降低毒性，提高藥用的安全性。本文以竹節(jié)香附素A為測(cè)定成分，建立兩頭尖藥材中竹節(jié)香附素A的含量測(cè)定方法，并采取酒制、鹽制、醋制等不同方法對(duì)兩頭尖藥材進(jìn)行炮制，比較炮制前后竹節(jié)香附素A含量的變化，為后續(xù)降低兩頭尖藥材毒性，提高藥用安全的研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Agilent液相色譜儀；CPA225D型電子天平；KQ-500DE型超聲波清洗機(jī)。

1.2 試 藥

竹節(jié)香附素A(批號(hào)20162416)對(duì)照品，兩頭尖藥材(批號(hào)20130710)；炮制品由實(shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以Hanbon-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱，以206 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃，流動(dòng)相為乙腈-0.1%的甲酸水(53:47)溶液，進(jìn)行等度洗脫，進(jìn)樣量均為10 μL。結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 高校液相色譜圖(1-竹節(jié)香附素A)

圖2 不同炮制品HPLC色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品的制備

精密稱(chēng)取5.12 mg對(duì)照品竹節(jié)香附素A，置于5 mL容量瓶中，加入甲醇，定容至刻度，搖勻，得1.024 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品的制備

取兩頭尖及其不同炮制品藥材，粉碎。精密稱(chēng)取2.0 g兩頭尖及其不同炮制品藥材，分別置于100 mL的錐形瓶中，分別加入70%的乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min后過(guò)濾，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定容?0 mL，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系

精密吸取0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10 mL的“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別置于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容至10 mL，即得不同濃度的對(duì)照品溶液。再按“2.1”項(xiàng)色譜條件吸取10 μL進(jìn)行進(jìn)樣分析，以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣濃度X進(jìn)行回歸方程計(jì)算，結(jié)果竹節(jié)香附素A在質(zhì)量濃度為25.60～1024 μg·mL-1內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系：Y=336.07X-10.85，r=0.9998。

2.3.2 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積RSD為0.85%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備6份平行供試品，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積RSD為2.08%，表明方法重復(fù)性較好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12、24 h下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果峰面積值RSD=1.94%。表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取1.0 g兩頭尖藥材，6份，按1:1的比例加入對(duì)照品，按“2.2.1”項(xiàng)進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)(n=6)

2.3.6 樣品含量測(cè)定

按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備兩頭尖及其不同炮制品的供試品溶液，每批均平行制備3份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品的含量測(cè)定(n=3)

3 結(jié) 論

兩頭尖有效成分竹節(jié)香附素A的含量隨炮制而變，其中酒制品和醋制品中竹節(jié)香附素A的含量明顯升高，由兩頭尖原藥材的0.223%升至酒制品的0.349%和醋制品的0.657%。而炒黃品中竹節(jié)香附素A的含量則略有降低，由0.223%降至0.139%。雖然經(jīng)過(guò)不同炮制，毒性降低了，但其中含有的有效成分含量也會(huì)發(fā)生變化，不同的炮制方法其所含有的成分不盡相同，其臨床配伍使用也有所差異。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立簡(jiǎn)便的竹節(jié)香附素A含量測(cè)定方法，比較炮制前后兩頭尖的竹節(jié)香附素A含量差異，為后續(xù)加選擇使用兩頭尖藥材提供較好選擇依據(jù)。