覃 亮，彭梅妃，吳堅(jiān)毅，張清杰，馮 娟

(1 肇慶學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院，廣東 肇慶 526061；2 茂名市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 茂名 525000；

鼻通丸，由蒼耳子、辛夷、白芷、鵝不食草、薄荷、黃芩、甘草七味中藥加工制成。清風(fēng)熱，解熱毒，通鼻竅之功效[1]。本品主要用于外感風(fēng)寒而引起的風(fēng)寒風(fēng)熱、感冒，鼻塞流涕，頭痛流淚以及慢性鼻炎[2]。方中黃芩雖為臣藥，但其藥理作用非常重要，藥典標(biāo)準(zhǔn)沒有黃芩的定量指標(biāo).本方法參照《中國藥典》2010年版一部[3]，對鼻通丸中黃芩苷進(jìn)行含量測定。為了使其內(nèi)在的質(zhì)量得到更好地控制，本試驗(yàn)采取高效液相色譜法對本品中黃芩的有效成分黃芩苷的含量進(jìn)行了研究和分析，以更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

LC-20AT高效液相色譜儀，日本島津司；BT125D電子天平(十萬分之一)，瑞士梅特勒-托利多公司；KQ-500DA數(shù)控超聲波清洗器，昆明市超聲儀有限公司；UV-2450紫外分光光度計(jì)，日本島津；HY-5回旋式振蕩器，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州澳華儀器有限公司；UPW-20NE超純水純水器，沃特爾有限公司。

1.2 試 劑

鼻通丸，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠；黃芩苷對照品，中國藥品生物制品鑒定所；HPLC所用試劑為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱定含量為93.3%的黃芩苷對照品6.11 mg，置于200 mL的容量瓶中，加入70%的乙醇適量，使其溶解，并稀釋至刻度，制成每1 mL中含有30.55 μg黃芩苷的溶液，搖勻，用0.45 μm濾頭濾過，作為對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

取本品大蜜丸適量，約1.0 g，剪碎，精密稱定，置于100 mL含塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇90 mL，密塞，稱定整體重量，進(jìn)行超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)，經(jīng)過30 min處理后，放置回旋式振蕩器上振蕩(使冷卻，振搖使溶解均勻)，再稱定其重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾3 mL置于10 mL的容量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，用0.45 μm的濾頭濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.3 陰性溶液的制備

按照處方配比，取除了黃芩以外的其他六味藥材，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻備用。按照供試品溶液的制備方法，制成缺少黃芩的陰性樣品溶液，用0.45 μm濾頭濾過，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱：十八硅烷鍵合硅膠為填充劑[4]；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸溶液=45:55；流速：0.9 mL/min；柱子：Diamonsil C8(250 mm×4.6 mm，5 μL)色譜柱；柱溫：35 ℃；泵壓不大于25 MPa；定量方法：外標(biāo)法；進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長為277 nm。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)

吸取鼻通丸供試品溶液、黃芩苷對照品溶液以及陰性對照品溶液各10 μL，分別注入色譜儀，驗(yàn)證陰性是否有干擾。經(jīng)測定，鼻通丸中黃芩苷在擬定的色譜條件中檢測出黃芩苷峰，陰性溶液無干擾，表明該法專屬性良好。結(jié)果見圖1。

圖1 A黃芩苷對照品(tR=7.200, n=5405)；B供試品(tR=7.298,n=5197)；C陰性對照

2.3.2 線性關(guān)系考察

精密量取黃芩苷對照品(30.5500 μg/mL)溶液2、4、6、8、9、10 mL，分別置于10 mL的容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖動(dòng)均勻，即得6個(gè)濃度(6.1100 μg/mL、12.2200 μg/mL、18.3300 μg/mL、24.4400 μg/mL、27.4910 μg/mL、30.5500 μg/mL)的對照品溶液，各進(jìn)樣10 μL，注入液相色譜儀中測定[5]。以對照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得y=36080x-1890.9，R2=0.9998回歸方程，結(jié)果表明黃芩苷在6.1100～30.5500 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn)

取同一濃度(30.5500 μg/mL)的對照品溶液，按擬定的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測得黃芩苷的色譜圖峰面積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示樣品峰面積大小接近，RSD=0.15%(n=6)，小于3%，精密度良好,結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，按照含量測定方法，分別在0、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測定，記錄色譜圖峰面積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不同時(shí)段測得黃芩苷的峰面積平均值是1425062，RSD%=1.16%(n=6)，(見表2)說明本品制備后24 h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品，按照“2.3.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液6份，平行地進(jìn)行6次試驗(yàn)測試，記錄色譜圖峰面積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，6份鼻通丸中含有黃芩苷的量均在10.8154～10.9575 mg/g之間，平均值為10.8867，RSD=1.05%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，不超過規(guī)定范圍RSD%=3%，結(jié)果表明本方法重現(xiàn)性良好(見表3)。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.3.6 加樣回收試驗(yàn)

取同一已知含量(含量10.8867 mg)的供試品6份，每份取樣量是供試品(1 g)的50%，分別精密加入黃芩苷對照品6.0010 mg，按“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備溶液，再按照上述相同的色譜條件進(jìn)行含量測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷的平均加樣回收率。結(jié)果表明，6次同一供試品溶液中測得黃芩苷的平均回收率為98.70%，RSD%=0.2%，所測得結(jié)果不超過規(guī)定的平均回收率95%～105%范圍，表明該方法可行(見表4)。

表4 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.3.7 樣品含量測定

取三個(gè)不同批號(hào)的樣品，每一個(gè)批號(hào)的供試品平行取兩份，根據(jù)“2.3.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別吸取已有的對照品和供試品各10 μL注入液相色譜儀中進(jìn)行測定，記錄測定的圖譜數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，三個(gè)批號(hào)的鼻通丸中黃芩苷的含量略有不同，但是RSD%都較小，表明該方法穩(wěn)定，且可行(見表5)。

表5 鼻通丸含量測定結(jié)果

3 結(jié) 論

經(jīng)過試驗(yàn)，確立了利用高效液相測定鼻通丸中黃芩苷含量的方法。本法采用Diamonsil C8(250 mm×4.6 mm，5 μL)色譜柱，甲醇-0.4%磷酸溶液=45:55作為流動(dòng)相，277 nm為檢測波長，流速為0.9 mL/min，測定鼻通丸中黃芩苷的含量，黃芩苷的線性關(guān)系良好，精密性，重現(xiàn)性，穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果良好。