李智慧

（常州婦幼保健院乳腺外科，江蘇常州，213000）

三陰性乳腺癌是一種特殊亞型的乳腺癌，特指雌激素受體、孕激素受體及HER-2 3種受體均為陰性的乳腺癌，亞洲女性屬于該類亞型乳腺癌常見人群之一，需要接受化療方式，有效改善患者臨床疾病[1-2]。吉西他濱屬于臨床一線常用乳腺癌化療藥物，受疾病耐藥性，影響對(duì)三陰性乳腺癌疾病治療效果低于預(yù)期。因此分析三陰性乳腺癌患者SLC29A1基因單核苷酸多態(tài)性變化，對(duì)提高治療效果具有重要價(jià)值。本研究分析三陰性乳腺癌患者SLC29A1基因單核苷酸多態(tài)性對(duì)吉西他濱化療耐藥性的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇2016年9月～2018年9月期間，常州婦幼保健院接收并確診三陰性乳腺癌患者20例為研究對(duì)象。同時(shí)患者年齡42～53歲，患者平均年齡（46.36±3.26）歲。滿足本研究需求。同時(shí)所有患者及患者家屬對(duì)本研究知情，且自愿加入該研究中。本院倫理委員會(huì)對(duì)該研究完全知情，并批準(zhǔn)相關(guān)研究進(jìn)行。

1.2 方法

1.2.1 SLC29A1基因SNP測(cè)序

所有患者接受化療當(dāng)日清晨采集外周靜脈血10mL，使用全血基因組提取試劑盒Ⅱ，依據(jù)試劑盒步驟開展操作。使用發(fā)光光度計(jì)測(cè)定DNA純度，并在測(cè)定后將其置入-20℃冰箱內(nèi)保存。完成上述環(huán)節(jié)后，使用應(yīng)用Primer Premier(6.0版)軟件設(shè)計(jì)相應(yīng)基因片段的上下游引物，上游引物序列為5’-TTTTTCAGCTTTTTGAACTGTGA-3’，下游引物序列為 5’-CTTGCTGTGTTGATTAGGGACAT-3’。應(yīng)用PCR法擴(kuò)增靶基因產(chǎn)物。PCR 反應(yīng)條件：95℃ 5 min；94℃ 30s；57℃ 30s；72℃45s；共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min。最后使用ABI公司DNA測(cè)序儀3730直接測(cè)序，測(cè)序結(jié)果由專業(yè)軟件Mutation Surveyor（2.0版本）分析，明確177、1288位點(diǎn)SNP序列。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色hENT1表達(dá)測(cè)定

選擇患者彩色多普勒超聲下穿刺三陰性乳腺癌患者病理科切片，采用常規(guī)免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行測(cè)定。采用相應(yīng)抗體，并確保抗體稀釋比例為1：200，使用DAB顯色試劑盒以及免疫組化全自動(dòng)染色儀，使用PBS為陰性對(duì)照，由醫(yī)院2位病理科主任醫(yī)生對(duì)每張病理切片讀片。其中患者病理切片出現(xiàn)棕黃色顆粒為染色陽(yáng)性，并依據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞百分率以及染色情況進(jìn)行評(píng)分。其中陽(yáng)性細(xì)胞低于10%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞占11%～25%為2分，26%～50%為3分，占比超高50%為4分；染色強(qiáng)度評(píng)分中，無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色為3分。兩種評(píng)分相加評(píng)估患者總評(píng)分。其中分?jǐn)?shù)低于2分判定為陰性，3～4分為弱陽(yáng)性，5～6分為陽(yáng)性，7分以上為強(qiáng)陽(yáng)性。最后，劃分患者h(yuǎn)ENT1中陰性及弱陽(yáng)性為低表達(dá)組，陽(yáng)性及強(qiáng)陽(yáng)性為高表達(dá)組。

表1 患者SLC29A1基因SNP測(cè)序與耐藥性 [n（%）]

表2 患者免疫組織化學(xué)染色hENT1表達(dá)測(cè)定 [n（%）]

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比分析SLC29A1基因SNP測(cè)序后，177位點(diǎn)以及1288位點(diǎn)野生型與突變型患者耐藥性差異，其中患者耐藥性是指耐藥患者數(shù)/總病例數(shù)×100%。

對(duì)比分析免疫組織化學(xué)染色hENT1表達(dá)測(cè)定下，高表達(dá)與低表達(dá)患者耐藥性差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究使用SPSS21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，并以[n（%）]表示，＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者SLC29A1基因SNP測(cè)序與耐藥性

在20例患者中，177位點(diǎn)野生型13例患者中，耐藥6例；突變型患者中，耐藥6例；1288位點(diǎn)野生型12例患者中，耐藥5例；突變型患者中，耐藥7例。其中177位點(diǎn)突變型耐藥性高于野生型耐藥性，1288位點(diǎn)突變型耐藥性高于野生型耐藥性，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)含義意義（＜0.05）。見表 1。

2.2 患者免疫組織化學(xué)染色hENT1表達(dá)測(cè)定

患者免疫組織化學(xué)染色hENT1表達(dá)測(cè)定結(jié)果分析，其中高表達(dá)患者9例，耐藥7例，低表達(dá)患者11例，耐藥4例。兩種表達(dá)下患者吉西他濱耐藥性具有一定變化，其中高表達(dá)患者耐藥性明顯高于低表達(dá)耐藥性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)含義意義（＜0.05）。見表 2。

3 討論

三陰性乳腺癌屬于乳腺癌中常見亞型，在亞洲女性患者中具有較高發(fā)病率，需要采用針對(duì)性化療方式，有效控制疾病進(jìn)一步發(fā)展，提高其生存質(zhì)量。吉西他濱屬于臨床常見一線乳腺癌化療藥物，在患者疾病治療過程中具有較高抗腫瘤效果，對(duì)提高患者生存率具有顯著效果。但是該類化療藥物在臨床使用過程中，存在一定耐藥性，無法有效發(fā)揮其臨床治療作用。因此具體分析三陰性乳腺癌患者SLC29A1基因單核苷酸多態(tài)性，對(duì)準(zhǔn)確掌握吉西他濱耐藥性具有顯著效果。

在患者相關(guān)疾病檢測(cè)治療過程中發(fā)現(xiàn)，核苷轉(zhuǎn)運(yùn)載體在介導(dǎo)核苷及核苷類藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程中發(fā)揮重要作用。其中hENTl和hENT2參與吉西他濱的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程，hENTl是目前發(fā)現(xiàn)的在人體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)吉西他濱的主要蛋白，可以發(fā)現(xiàn)hENTl表達(dá)程度對(duì)吉西他濱耐藥性具有一定影響。而隨著針對(duì)三陰性乳腺癌研究的深入，SLC29A1基因SNP中不同位點(diǎn)序列對(duì)及系統(tǒng)并耐藥性具有一定影響，其關(guān)鍵在于相應(yīng)的編碼序列氨基酸發(fā)生一定變化。具體而言，SLC29A1基因SNP177，1288位點(diǎn)可在亞洲人群中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，而由于三陰性乳腺癌患者不同位點(diǎn)序列發(fā)生一定變化，從而影響了在臨床治療過程中吉西他濱耐藥性[3-4]。因此在臨床開展三陰性乳腺癌患者診斷與治療過程中，可通過SLC29A1基因單核苷酸多態(tài)性分析，相應(yīng)掌握患者耐藥性變化情況，以便于及時(shí)采用相應(yīng)藥物治療，提高臨床治療效果[5-6]。

在本研究中，三陰性乳腺癌患者SLC29A1基因單核苷酸多態(tài)性對(duì)吉西他濱耐藥性具有較大影響，其中1288、177位點(diǎn)突變型耐藥性較高，hENTl中高表達(dá)耐藥性較強(qiáng)，對(duì)患者治療效果造成一定影響，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。

綜上所述，針對(duì)采用吉西他濱治療三陰性乳腺癌患者，具體分析其SLC29A1基因單核苷酸多態(tài)性，準(zhǔn)確掌握吉西他濱耐藥性情況，對(duì)調(diào)整患者治療方案具有重要價(jià)值。