蘭艷素，徐玉婷，張愉快，何寧濤，陳偉惠

(黃山學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，安徽 黃山245041)

無(wú)花果也叫蜜果、文仙果等，屬于?？崎艑僦参?。在我國(guó)，無(wú)花果資源很豐富，經(jīng)常當(dāng)作綠化植物種植，用于觀賞，果實(shí)可以食用，味道甜美，營(yíng)養(yǎng)豐富，葉子還可以藥用[1]。據(jù)《本草匯言》記載，無(wú)花果葉可以去濕熱，解毒瘡[2]。對(duì)于白癜風(fēng)、痔瘡、帶狀皰疹以及腹瀉等癥具有很好的治療效果[3]。

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)無(wú)花果葉中香豆素的相對(duì)含量較高，除外還含有一定的揮發(fā)油、黃酮、微量元素、維生素等成分[4]。無(wú)花果葉水、醇提取物可以降血糖、降血脂、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠等[5，6]。揮發(fā)油具有較好的抑菌消炎、止咳平喘、解熱鎮(zhèn)痛等作用[7]。

植物中揮發(fā)油成分的提取方法很多，其中最常用的是水蒸氣蒸餾法[8]，但是，在蒸餾提取的過(guò)程中，揮發(fā)油組分比較容易發(fā)生一些化學(xué)反應(yīng)，如分解、氧化等，從而導(dǎo)致得到的揮發(fā)油組分發(fā)生了一些變化。超臨界CO2流體萃取技術(shù)是在低溫條件下，以超臨界CO2作為流體，可以快速滲透到植物中，溶解性能較好，能夠?qū)崿F(xiàn)揮發(fā)油組分的高效提取，同時(shí)還具有快捷、簡(jiǎn)便、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)[9-10]。截止目前，對(duì)于無(wú)花果果實(shí)的研究較多，而將超臨界技術(shù)應(yīng)用于無(wú)花果葉揮發(fā)油的提取還未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道。

本文以黃山產(chǎn)無(wú)花果葉為原料，采用超臨界CO2流體萃取技術(shù)提取無(wú)花果葉揮發(fā)油，用無(wú)水硫酸鈉干燥后，適當(dāng)稀釋數(shù)倍，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對(duì)成分進(jìn)行分析，色譜峰面積歸一化法計(jì)算各組分的相對(duì)含量，以期為無(wú)花果葉的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

Waters MV-10超臨界萃取系統(tǒng)（美國(guó)waters 公司），Agilent 7890A-5975C 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent 公司），電子分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)。新鮮無(wú)花果葉采摘于黃山學(xué)院北校區(qū)，經(jīng)鑒定為?？崎艑僦参铩o(wú)水乙醇，無(wú)水硫酸鈉等均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 超臨界CO2萃取法提取無(wú)花果葉揮發(fā)油

用自來(lái)水將新鮮無(wú)花果葉清洗干凈后，用二次蒸餾水淋洗，陰涼處放置12h，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)100目篩，稱取10g粉末，置于濾紙上，包裹好，裝入萃取釜中，在萃取壓力 300bar、萃取溫度 40℃、CO2流量10mL·min-1，夾帶劑為乙醇（1mL·min-1）的條件下動(dòng)態(tài)萃取12min，靜態(tài)萃取8min，最后動(dòng)態(tài)萃取4min，循環(huán)進(jìn)行2次，得到透明的揮發(fā)油液體。

1.2.2 揮發(fā)油前處理

將揮發(fā)油轉(zhuǎn)移至小燒杯中，用無(wú)水Na2SO4干燥18h，離心后，準(zhǔn)確移取5μL 上層油狀透明液體于PCR 小管中，無(wú)水乙醇適當(dāng)稀釋，并用微孔濾膜過(guò)濾后，等待GC-MS進(jìn)樣檢測(cè)。

1.2.3 GC-MS測(cè)定條件

實(shí)驗(yàn)所用的是HP-5MS 彈性石英毛細(xì)管柱(0.25μm，30m×0.25mm)，高純度He 作為載氣，體積流量為1.0mL·min-1，按照如下程序進(jìn)行升溫：色譜柱初始溫度為40℃，30min 勻速緩慢升溫，達(dá)到160℃時(shí)，保持4min，再用20min 勻速緩慢升溫至285℃，保持10min，待儀器穩(wěn)定后，即可進(jìn)樣。進(jìn)樣口溫度為280℃，進(jìn)樣量為0.5μL，分流比為20：1，質(zhì)譜離子源為EI 模式，掃描質(zhì)量數(shù)范圍m/z為35～450，所用質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)為NIST08。

2 結(jié)果與分析

2.1 無(wú)花果葉中揮發(fā)油成分分析

按照1.2.3項(xiàng)對(duì)儀器參數(shù)進(jìn)行設(shè)置，待儀器穩(wěn)定后進(jìn)樣，利用GC-MS技術(shù)對(duì)無(wú)花果葉中所含的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，得到揮發(fā)油的總離子流圖如圖1。經(jīng)NIST08 譜圖庫(kù)檢索和匹配后，初步鑒定所含成分，再將成分離子峰與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖比對(duì)，進(jìn)行人工解譜，最終確定無(wú)花果葉揮發(fā)油的化學(xué)成分，各成分的相對(duì)含量通過(guò)面積歸一化法計(jì)算得到，結(jié)果如表1所示。

表1 無(wú)花果葉中所含揮發(fā)油成分

續(xù)表

由圖1、表1可知，在無(wú)花果葉揮發(fā)油成分中，絕大部分組分的保留時(shí)間為40～70min。一共從無(wú)花果葉中分離鑒定了68種化合物，約為揮發(fā)油總量的95.22%。無(wú)花果葉揮發(fā)油中含有醇、酯、酚、酸、烯烴、烷烴、醛、酮類成分，各類有效成分的含量各異，含量最高的是醇類（35.18%），共12 種；其次為酚類（18.04%），共3種。酯、烯烴以及烷烴類化合物的相對(duì)含量均在10%左右，有機(jī)酸的含量為6.57%，醛和酮的相對(duì)含量都比較低，分別為0.72%、0.19%。

無(wú)花果葉揮發(fā)油中富含有β-谷甾醇、天然維生素E，相對(duì)含量分別為18.55%、17.08%。相對(duì)含量大于4%的組分還有反式角鯊烯（6.41%），植醇（4.11%），亞麻酸（4.21%），β-香樹(shù)脂醇（4.71%）、補(bǔ)骨脂素（4.52%），這6種組分的總含量為59.59%，超過(guò)揮發(fā)油總量的一半。三氯乙烯、二十九烷、香葉基香葉醇、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素的含量分別為3.13%、2.87%、2.92%、2.40%、2.07%，其它組分的含量均低于2%。

3 結(jié)論與討論

超臨界CO2流體法提取得到的無(wú)花果葉揮發(fā)油的成分比較復(fù)雜，主要為醇、酚類化合物，占揮發(fā)油總量的53.22%，還有酯、烯烴、烷烴等成分，各組分的含量順序?yàn)椋捍迹痉樱觉ィ鞠N＞烷烴＞酸＞醛＞酮。共分離鑒定出68種化合物，得到相對(duì)含量較高的組分是天然維生素E、角鯊烯、亞麻酸。天然維生素E除了具有抗氧化活性外，還能有效抑制腫瘤生長(zhǎng)等。角鯊烯能增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，對(duì)抗衰老、抗腫瘤等藥效顯著；亞麻酸是構(gòu)成生物酶的基礎(chǔ)物質(zhì)，對(duì)身體健康起到?jīng)Q定性作用，具有降低血脂、降低血壓等作用，這些均與無(wú)花果葉的藥理活性相符。

與文獻(xiàn)報(bào)道的水蒸氣法提取無(wú)花果葉揮發(fā)油相比較，從成分上來(lái)看，主要成分基本一致，如補(bǔ)骨脂素、植醇，5-甲氧基補(bǔ)骨脂素，但含量稍有差異。超臨界法提取得到的補(bǔ)骨脂素含量不高，只有4.52%。而水蒸氣蒸餾法、乙醚超聲法[3]提取得到含量最高的成分是補(bǔ)骨脂素，含量高達(dá)50%以上，提取結(jié)果有較大差距。這是因?yàn)闊o(wú)花果葉揮發(fā)油的提取效果與提取方法、無(wú)花果葉的來(lái)源地，還有采摘的季節(jié)有較大關(guān)系。

數(shù)量上比水蒸氣蒸餾法提取得到的化合物多42種。水蒸氣法提取的揮發(fā)油中主要是補(bǔ)骨脂素，另外還有烷烴，烯烴類化合物[11]，超臨界萃取得到的主要為醇、酚類化合物?？梢?jiàn)，水蒸氣蒸餾法的提取率相對(duì)較低，得到的揮發(fā)油成分以沸點(diǎn)低、極性小的烴類化合物為主，而超臨界法CO2萃取法提取得到化合物的個(gè)數(shù)更多，且極性較大。導(dǎo)致成分及相對(duì)含量均存在一定的差異的原因是超臨界萃取法采用超臨界CO2作為流體，能快速滲透到無(wú)花果葉之中，不受溶劑極性的影響，對(duì)藥材中各個(gè)極性段的化合物均具有較好的溶解性，特別是高沸點(diǎn)、大極性組分的提取率較高，且不易發(fā)生氧化、分解等反應(yīng)。因此，超臨界法CO2萃取技術(shù)非常適用于中藥材揮發(fā)油組分的提取。