張 大，李夢嬌，楊 林

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院小兒外科，河南 鄭州 450052)

神經(jīng)母細(xì)胞性腫瘤是一組臨床表現(xiàn)及預(yù)后差異較大的兒童惡性實(shí)體腫瘤，主要分為神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma，NB)、節(jié)細(xì)胞神經(jīng)母細(xì)胞瘤(ganglioneuroblastoma，GNB)、節(jié)細(xì)胞神經(jīng)瘤(ganglioneuroma，GN)[1-3]。α-地中海貧血/精神發(fā)育遲滯綜合征X染色體相關(guān)基因(α-thalassemia/mental retardation syndrome X-linked，ATRX)在NB標(biāo)本中表達(dá)異常，這些異常僅在18月以上患兒的腫瘤組織中出現(xiàn)，這些異常包括點(diǎn)突變或基因片段缺失，最終導(dǎo)致ATRX編碼蛋白表達(dá)明顯減少且功能缺失，考慮ATRX蛋白可能參與了NB的生物學(xué)行為；ATRX基因突變與Ⅳ期NB診斷的年齡有關(guān)，并對NB患兒的預(yù)后產(chǎn)生影響[4]。2014年，ATRX蛋白被列為中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的標(biāo)志物之一[5]。NB的預(yù)后與腫瘤的原發(fā)部位、發(fā)病年齡、疾病的臨床分期等密切相關(guān)[6]。但ATRX蛋白在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)與預(yù)后關(guān)系尚不明確。

1 資料與方法

1.1 研究對象收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院小兒外科2016年1月至2019年8月期間手術(shù)治療的49例顱外神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤患兒的資料和腫瘤組織標(biāo)本，其中病理確診為NB 29例、GNB 10例、GN 10例。術(shù)后隨訪失訪15例(其中失聯(lián)7例，死亡8例)，存活34例。本研究中的病例樣本量較少，失訪率較高，在不影響統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的情況下進(jìn)行缺失值的替換，全部納入分析。

1.2 ATRX蛋白檢測方法所有組織標(biāo)本制作組織芯片及切片，并進(jìn)行免疫組化(immunohistochemistry，IHC)操作。使用多光譜組織成像與定量系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集，腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核棕黃色染色為陽性。染色結(jié)果判定采用Image J軟件IHC Tool Box工具檢測細(xì)胞核染色情況，獲得高倍(×200)鏡下單位面積內(nèi)的細(xì)胞核被染為棕黃色的數(shù)目，以此來評估NB患兒ATRX蛋白表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1 NB組、GNB組、GN組腫瘤組織中ATRX蛋白表達(dá)情況比較NB組、GNB組、GN組的ATRX蛋白表達(dá)水平分別是201.72±108.66、302.80±128.71、285.80±103.85，總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.103，P=0.023)；其中NB組與GNB組、NB組與GN組的ATRX蛋白表達(dá)水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見圖1。

圖1 NB組(A)、GNB組(B)、GN組(C)腫瘤組織中ATRX蛋白表達(dá)情況比較(IHC，×200)

2.2 NB組、GNB組、GN組患者生存情況比較NB組、GNB組、GN組中位生存期分別為39個(gè)月、30個(gè)月、30個(gè)月(χ2=1.820，P=0.403)。見圖2。

3 討論

ATRX蛋白是一個(gè)大小約為2 500殘基的表觀遺傳調(diào)控因子，包含一個(gè)N端同源異型結(jié)構(gòu)域，在整個(gè)細(xì)胞周期中都具有調(diào)控作用，主要作用于細(xì)胞核[7-8]。在細(xì)胞分裂間期，ATRX蛋白在核基質(zhì)的調(diào)控中占主導(dǎo)地位；在有絲分裂期，蛋白定位于凝縮染色體。ATRX蛋白的活動(dòng)主要在細(xì)胞核中，因此可使用Image J軟件中的IHC Tool Box工具統(tǒng)計(jì)細(xì)胞核被染為棕黃色的數(shù)目來反映ATRX蛋白的表達(dá)水平。

根據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析，我們發(fā)現(xiàn)，NB組、GNB組、GN組的ATRX蛋白表達(dá)水平分別是201.72±108.66、302.80±128.71、285.80±103.85，總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.103，P=0.023)；其中NB組與GNB組、NB組與GN組的ATRX蛋白表達(dá)水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。GN為良性腫瘤，其預(yù)后良好，而NB為惡性腫瘤，其預(yù)后一般較差，提示ATRX蛋白的低表達(dá)可能與NB預(yù)后相關(guān)。

兒童外周神經(jīng)母細(xì)胞性腫瘤分為NB、GNB和GN等3種組織病理學(xué)分型，ATRX蛋白表達(dá)在NB組、GNB組、GN組中的生存曲線相近?？紤]原因有：1)患兒隨訪時(shí)間短，未能獲得有臨床意義的5 a無事件生存時(shí)間，生存時(shí)間受影響，進(jìn)而影響各組生存曲線，如本研究中作為良性GN的中位生存期較惡性程度較高的NB短，而該結(jié)果也由樣本量少所致；2)NB、GNB、GN中有分化程度不同的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，降低了ATRX蛋白表達(dá)差異；3)組織芯片選取的腫瘤組織點(diǎn)不夠典型，可能會(huì)降低組間的差異；4)不同切片平面細(xì)胞核的數(shù)目不同可能會(huì)增大組內(nèi)的差異或降低組間的差異；5)Image J軟件中的IHC Tool Box工具插件識(shí)別的準(zhǔn)確性也需考慮在內(nèi)，其統(tǒng)計(jì)細(xì)胞核染為棕黃色數(shù)目來間接衡量ATRX蛋白表達(dá)水平存在系統(tǒng)偏倚；6)腫瘤標(biāo)本例數(shù)較少，檢驗(yàn)功效會(huì)受影響；7)觀察各組生存曲線之間有交叉，考慮ATRX蛋白表達(dá)水平對外周神經(jīng)母細(xì)胞性腫瘤預(yù)后的影響存在混雜因素的干擾。

圖2 NB組、GNB組、GN組患者Kaplan-Meier生存曲線比較

ATRX蛋白表達(dá)水平不同對NB患兒的預(yù)后生存時(shí)間雖無直接影響，但因本研究樣本量偏少且NB高?；純合鄬^多，不能完全排除ATRX蛋白表達(dá)對NB患兒預(yù)后的間接影響[9-10]。

總之，NB中ATRX蛋白低表達(dá)，且ATRX蛋白低表達(dá)可能預(yù)示著不良預(yù)后。