孫豐收，羅媛媛，張文文，孫 奇，柏 楊，慕 衛(wèi)*

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東 泰安 271018；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心，山東 泰安 271001；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

蟲螨腈(chlorfenapyr)又名溴蟲腈，是美國氰胺公司開發(fā)的新型吡咯類殺蟲劑，其通過昆蟲體內(nèi)多功能氧化酶作用于線粒體，干擾呼吸鏈上電子傳遞從而影響昆蟲體內(nèi)能量代謝，對同翅目、鱗翅目等多種昆蟲有良好防效，尤其對甜菜夜蛾、小菜蛾、斜紋夜蛾等害蟲防治顯著，因其殺蟲譜廣、殺蟲效果好和作用機(jī)理獨(dú)特而廣受關(guān)注[1～4]。

2018年JMPR評估了蟲螨腈殘留物膳食評估定義，確定為蟲螨腈和其代謝物溴代吡咯腈(tralopyril)10倍之和，雖然溴代吡咯腈在殘留物中的所占比重較低，但其毒理學(xué)效應(yīng)因子為蟲螨腈的10倍[5]，所以其對食品安全可能產(chǎn)生較大的風(fēng)險。

目前我國蟲螨腈登記的作物有甘藍(lán)、大白菜、豆角、柑橘、黃瓜、梨、蘋果、小白菜、豇豆、茶等作物，在甘藍(lán)上登記產(chǎn)品的數(shù)量占總登記產(chǎn)品數(shù)量的70%以上[6]，國內(nèi)報(bào)道的蟲螨腈在蔬菜[7-9]、水果[10-11]、茶[12-13]等基質(zhì)中的殘留檢測多采用液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)等方法，溴代吡咯腈報(bào)道的檢測方法有液相色譜(HPLC)法[14]，溴代吡咯腈在甘藍(lán)上的殘留檢測方法未見報(bào)到。在現(xiàn)有報(bào)道基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)研究建立了蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈在甘藍(lán)中的殘留檢測方法，為蟲螨腈在甘藍(lán)上的殘留監(jiān)測、膳食風(fēng)險評估及合理使用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(TSQ 800 EVO)；萬分之一電子天平(BSA124S-CW)；百分之一電子天平(YP-5102)；漩渦混合儀(MTV-100)；高速離心機(jī)(HC-2517)；低速離心機(jī)(SC3612)；氮吹儀(SE812-J)；移液器；0.22μm有機(jī)濾膜等。

1.2 主要試劑 乙腈、甲醇，色譜純；甲酸，色譜純；高溫蒸餾水；氯化納，分析純；無水硫酸鎂，分析純；PSA；多壁碳納米管。

98.1%蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；99.3%溴代吡咯腈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取 稱取10.00g勻漿后的甘藍(lán)樣品，加入20.0mL乙腈旋渦震蕩3min，加入3.00g氯化鈉、2.00g無水硫酸鎂，旋渦震蕩3min，以4 000r/min離心2min，上清液待凈化。

1.3.2 凈化 檢測蟲螨腈時，取上述上清液1.500mL加入2mL離心管(內(nèi)含50mg PSA、150mg無水硫酸鎂和5mg多壁碳納米管)，旋渦震蕩5min，以10 000r/min離心2min，取上清液氮吹至近干，用二氯甲烷復(fù)溶并稀釋5倍，過0.22μm有機(jī)濾膜，進(jìn)行GC-MS/MS檢測。

檢測溴代吡咯腈時，取上述上清液1.500mL于2mL離心管，加入50mg PSA、150mg無水硫酸鎂和5mg多壁碳納米管，旋渦震蕩5min，以10 000r/min離心2min，取上清液稀釋5倍，過0.22μm有機(jī)濾膜，進(jìn)行UPLC-MS/MS檢測。

1.4 檢測條件 檢測蟲螨腈時，使用GC-MS/MS進(jìn)行檢測，參考儀器條件：

色譜柱：EVO TSQ 8000 TG-5MS柱(30.0m×0.25mm，0.25μm)；程序升溫：初始溫度100℃，保持1min,以30℃/min 升溫至280℃，保持5min；載氣：He，純度：99.999%；柱流量：1.2mL/min；進(jìn)樣體積：1μL；進(jìn)樣方式：不分流；離子源：EI；檢測器電壓：70V；進(jìn)樣口溫度：280℃；離子源溫度：300℃。監(jiān)測模式：SRM，監(jiān)測條件(表1)；

表1 質(zhì)譜監(jiān)測參數(shù)

檢測溴代吡咯腈時，使用UPLC-MS/MS進(jìn)行檢測，參考儀器條件：

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC?BEH C18柱，2.1×50mm，1.7μm；流動相：A為甲酸水(0.05%)溶液，B為甲醇，梯度洗脫程序(表2)；柱溫：35℃；流速：0.3mL/min；進(jìn)樣體積：1μL；

表2 梯度洗脫程序(VA + VB)

離子源：電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子模式；監(jiān)測模式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(SRM)，監(jiān)測條件(表3)；噴霧電壓：3 500V；脫溶劑溫度：350℃；離子傳輸管溫度：325℃；鞘氣壓力50Arb；輔助氣壓力為10Arb。

表3 質(zhì)譜監(jiān)測參數(shù)

相關(guān)譜圖(圖1、圖2)。

圖1 蟲螨腈標(biāo)樣0.01mg/L圖2溴代吡咯腈標(biāo)樣0.01mg/L

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確稱取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0.1mg)，蟲螨腈用二氯甲烷溶解稀釋，溴代吡咯腈用乙腈溶解稀釋，配制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度均為0.5、0.1、0.05、0.02、0.01、0.005、0.001mg/L，用1.4方法分析。得到蟲螨腈線性回歸方程為y=495 340x+122 9，相關(guān)系數(shù)r為0.999 9；溴代吡咯腈線性回歸方程為y=1 798 387x+7 089，相關(guān)系數(shù)r為0.999 7。結(jié)果表明在濃度0.001～0.5mg/L范圍內(nèi)，蟲螨腈和溴代吡咯腈標(biāo)曲線性關(guān)系良好，(表4)。

表4 線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

2.2 添加回收 將空白甘藍(lán)樣品粉碎，加入標(biāo)樣，充分混勻后靜置2h，做0.01、0.1、5mg/kg，3個水平的添加回收，每個添加水平重復(fù)5次，用1.3方法前處理，1.4方法分析。在3個添加水平下，蟲螨腈的回收率在85.2%～103.6%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.3%～3.7%之間，溴代吡咯腈的回收率在96.4%～103.1%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.4%～3.8%之間，(表5)。

表5 回收率(n=5)和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3 定量限 根據(jù)添加回收試驗(yàn)，甘藍(lán)中蟲螨腈和溴代吡咯腈的定量限均為0.01mg/kg。

3 結(jié)論

本文采用乙腈提取，QuEChERS凈化，蟲螨腈由氣質(zhì)檢測，溴代吡咯腈由液質(zhì)檢測，建立了甘藍(lán)中蟲螨腈及其代謝物的殘留檢測方法，并對方法的正確度和精密度進(jìn)行了研究。在3個添加水平下，回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)[15]。本方法便捷、高效，為甘藍(lán)中蟲螨腈及其代謝物的殘留檢測提供了可靠的方法。