丁治偉 趙燕萍

【摘 要】目的：探討熒光定量PCR和ELISA法對(duì)支原體肺炎診斷的臨床意義，以為支原體肺炎患兒臨床治療和監(jiān)測(cè)預(yù)后提供可行性借鑒。方法：采用醫(yī)學(xué)研究對(duì)比法，隨機(jī)篩選我院檢驗(yàn)科2019年3月-2020年3月收治的400例患兒為受試對(duì)象，依照原體肺炎診斷環(huán)節(jié)相關(guān)方法差異，等分對(duì)照為對(duì)照組和觀察組兩列，分別是以ELISA法檢驗(yàn)和熒光定量PCR檢驗(yàn)法檢測(cè)，觀察每組對(duì)支原體肺炎診斷的診斷療效。結(jié)果：觀察組肺炎支原體陽(yáng)性檢驗(yàn)正確率為95%（190/200）明顯高于對(duì)照組檢驗(yàn)正確70%（140/200），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。結(jié)論：熒光定量PCR在支原體肺炎患兒肺炎支原體的檢驗(yàn)成效突出，比之ELISA法更具診斷成效，值得臨床推廣實(shí)施。

【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR;ELISA法;支原體肺炎;診斷;臨床意義

【中圖分類號(hào)】R965.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2020）20--02

肺炎支原體（mycoplasma pneumonia，MP）是呼吸內(nèi)科常見(jiàn)急性呼吸道感染性疾病，也是社區(qū)獲得性肺炎病原菌中較為常見(jiàn)的誘因之一[1]。從感染致病菌特點(diǎn)來(lái)看，多為兒童，且與呼吸道感染的臨床表現(xiàn)相似。借助實(shí)驗(yàn)室檢查，可有助患者治療和監(jiān)測(cè)預(yù)后，以避免疾病進(jìn)展對(duì)患兒臟器和肺外并發(fā)癥及其對(duì)中樞神經(jīng)損傷，具有重要的檢驗(yàn)價(jià)值。熒光定量PCR（（ realtime fluorescence quantitative PCR）和ELISA法（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）的檢驗(yàn)對(duì)比分析，一度成為臨床檢驗(yàn)患者為的熱點(diǎn)，現(xiàn)對(duì)兩種不同檢驗(yàn)方式的檢驗(yàn)過(guò)程及其途徑分析總結(jié)如下：

1 臨床資料和方法

1.1 一般材料

采用醫(yī)學(xué)研究對(duì)比法，隨機(jī)篩選我院檢驗(yàn)科2019年3月-2020年3月收治的400例患兒為受試對(duì)象，依照原體肺炎診斷環(huán)節(jié)相關(guān)方法差異，等分對(duì)照為對(duì)照組和觀察組兩列，其中第一小組：男110例，女90例，年齡0.5-76歲，平均年齡（37.08±1.92）歲;觀察組：男111例，女89例，年齡1-75歲，平均年齡（37.18±1.82）歲。兩組參選對(duì)象的臨床基礎(chǔ)資料差異在年齡、起病時(shí)間、感染程度上差異不明顯，不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）

1.2 方法

分別是以ELISA法檢驗(yàn)和熒光定量PCR檢驗(yàn)法檢測(cè)，臨床觀察每組對(duì)支原體肺炎診斷的診斷療效。

ELISA法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)，洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌，后一遍用DDW洗滌。加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。結(jié)果判定。

熒光定量PCR檢驗(yàn)： 2.0%瓊脂糖凝膠制備;將制備好的電泳膠放入電泳槽（帶梳子孔的一端在陰極），倒入電泳液（1×TBE）浸過(guò)膠面即可;PCR產(chǎn)物各取10μL，加入2μL上樣緩沖液（6×Loading Buffer），混勻后加入電泳膠孔內(nèi)（先加Marker（DL-2000）5μL，然后依次加標(biāo)本PCR產(chǎn)物，再加陰性對(duì)照，最后加陽(yáng)性對(duì)照產(chǎn)物;電泳電壓100V，約30～40min后看結(jié)果;將電泳膠放入凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并照相;結(jié)果判斷[2-3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用IBM SPSS Statistics 24.0（社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包）對(duì)所有研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以（n/%）表示，用χ2 檢驗(yàn)，，當(dāng)卡方值P<0.05時(shí)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組肺炎支原體陽(yáng)性檢驗(yàn)正確率為95%（190/200）明顯高于對(duì)照組檢驗(yàn)正確70%（140/200），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。詳見(jiàn)下表1所示：

3 討論

小兒肺炎支原體肺炎是肺炎中常見(jiàn)、多發(fā)類型。在治療中，通過(guò)臨床癥狀、疾病史、實(shí)驗(yàn)室檢查等手段進(jìn)行必要的抗炎治療，以降低并發(fā)癥危害。

目前對(duì)支原體肺炎的檢查中，酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)以其批量標(biāo)本測(cè)定價(jià)值、簡(jiǎn)單易行、成本低廉、靈活性掌握價(jià)值極高，但假陽(yáng)性結(jié)果較多。故此，熒光定量PCR在支原體肺炎患兒肺炎支原體的檢驗(yàn)，更具替代性價(jià)值。本研究的結(jié)果表明，觀察組肺炎支原體陽(yáng)性檢驗(yàn)正確率為95%（190/200）明顯高于對(duì)照組檢驗(yàn)正確70%（140/200），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

文獻(xiàn)資料進(jìn)一步佐證，ELISA法陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組（P<0.05），C反應(yīng)蛋白、血沉較低（P<0.05）;小兒肺炎支原體感染進(jìn)行檢測(cè)，可明顯發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性率異常升高，而C反應(yīng)蛋白、血沉則有所下降，證明臨床檢驗(yàn)對(duì)診斷起著重要價(jià)值[4]。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)兒童肺炎支原體肺炎診斷的敏感度略高于快速培養(yǎng)法;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)兒童肺炎支原體肺炎診斷的特異度、符合率分別為為91.84%、88.33%，高于快速培養(yǎng)組的77.56%、76.66%;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)能夠早期檢出兒童肺炎支原體，具有較高的特異度與符合率[5]。膠體金法（A組）、被動(dòng)凝集法（B組）和并聯(lián)組（C組）三組陽(yáng)性率分別是45.45%、32.72%和52.72%;在疑似肺炎支原體感染時(shí)，應(yīng)聯(lián)合膠體金法和被動(dòng)凝集法檢測(cè)患兒血清支原體MP-IgM抗體和肺炎支原體抗體，可提高檢出率，為臨床提供更有利的診斷依據(jù)[6]。

定量檢測(cè)結(jié)果以其重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和第三方檢驗(yàn)方法的貫徹實(shí)施，為彌補(bǔ)常規(guī)檢驗(yàn)方法缺憾的有效方法。本次醫(yī)學(xué)觀察研究中，觀察組肺炎支原體陽(yáng)性檢驗(yàn)正確率為95%（190/200）明顯高于對(duì)照組檢驗(yàn)正確70%（140/200），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。從熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用成效來(lái)講，具有靈敏性、特異性、重復(fù)性、正確性等特征，而從熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)法的比較優(yōu)勢(shì)來(lái)看，熒光定量PCR檢測(cè)支原體肺炎以其定量檢測(cè)BALF MP-DNA陽(yáng)性和血清MP-IgM陽(yáng)性的診斷價(jià)值，為臨床所采用。

綜上所述，熒光定量PCR在支原體肺炎患兒肺炎支原體的檢驗(yàn)成效突出，比之ELISA法更具診斷成效，值得臨床推廣實(shí)施。

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