孫健

【摘要】 目的：探討巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）IgM抗體檢測及IgG抗體親和力分析對CMV原發(fā)性感染的意義。方法：選取2017年1-12月在本院80例CMV感染患者的臨床資料進行回顧性分析。采集所有患者的血清標本，經間接免疫熒光法檢測CMV IgG抗體，采用免疫捕獲法檢測CMV IgM，分析CMV IgG抗體親和力。結果：所有患者的CMV IgG檢測均為陽性，且稀釋度在1︰1 022～1︰14。其中40例CMV IgM抗體為陰性，40例CMV IgM抗體為陽性。CMV IgM陰性與陽性者AI值與CMV IgG抗體親和力比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：在對CMV原發(fā)性感染診斷過程中，大部分CMV IgM抗體陽性者并非近期原發(fā)性感染，不能根據(jù)單一的血清學檢測進行診斷，CMV IgM抗體檢測聯(lián)合IgG抗體親和力分析有助于對CMV原發(fā)性感染確診。

【關鍵詞】 巨細胞病毒 原發(fā)性感染 CMV IgM CMV IgG抗體親和力

Significance of IgM Antibody Detection and IgG Antibody Affinity Analysis in the Diagnosis of Primary Infection of CMV/SUN Jian. //Medical Innovation of China， 2020， 17（22）： -122

[Abstract] Objective： To explore the significance of IgM antibody detection and IgG antibody affinity analysis in the diagnosis of primary infection of cytomegalovirus （CMV）. Method： The clinical data of 80 patients with CMV infection in our hospital from January to December 2017 were retrospectively analyzed. Serum samples were collected from all patients， CMV IgG antibody was detected by indirect immunofluorescence method， and CMV IgM was detected by immunocapture method， and the CMV IgG antibody affinity was analyzed. Result： CMV IgG was positive in all patients， and the dilution was 1︰1 022-1︰14. Among them， 40 cases were negative for CMV IgM antibody and 40 cases were positive for CMV IgM antibody. The AI values and CMV IgG antibody affinity of CMV IgM negative and positive patient were compared， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： In the diagnosis of CMV primary infection， most of the patients with positive CMV IgM antibody were not recently infected and could not be diagnosed based on a single serological test. CMV IgM antibody detection combined with IgG antibody affinity analysis is helpful for the diagnosis of primary CMV infection.

[Key words] Cytomegalovirus Primary infection CMV IgM CMV IgG antibody affinity

First-authors address： Heilongjiang Jiamusi Maternal and Child Health Hospital， Jiamusi 154004， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.22.031

臨床治療中，巨細胞病毒（CMV）屬一種皰疹類病毒，該病毒的感染情況在人群中較為常見，大多為隱匿性感染，臨床特征相對較少，新生兒、孕婦以及免疫力較為低下者極易出現(xiàn)CMV感染的情況，對其身體健康產生嚴重影響[1-2]。由于大部分CMV感染者并無顯著的臨床特征，因此僅靠癥狀對患者的病情進行判定具有一定的困難。在孕期，尤其孕早期若出現(xiàn)CMV感染，則會對胎兒生長發(fā)育情況造成嚴重影響，該階段是胎兒器官以及神經系統(tǒng)發(fā)育的重要時期，極易導致后遺癥出現(xiàn)[3-4]。在臨床治療中，對CMV活動性感染或近期感染主要通過CMV IgM抗體進行判定，而對于CMV原發(fā)性感染或長時間持續(xù)存在的IgM抗體等情況則不能夠進行準確判定[5]。近年來相關研究顯示，CMV原發(fā)性感染可通過進行CMV IgG抗體親和力的分析而進行有效評估與判定。低親和力抗體大多與近3個月內原發(fā)性感染的情況存在一定的相關性，而高親和力抗體則能夠有效排除近期原發(fā)性感染的存在情況[6]。本研究探討了CMV IgM抗體檢測及IgG抗體親和力分析對CMV原發(fā)性感染的診斷意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1-12月于本院就診以及住院的CMV感染的80例患者的臨床資料進行回顧性分析。納入標準：所有患者的臨床資料均較為完整;疑似CMV感染并經檢測CMV IgG抗體存在血清學轉換或CMV IgG、CMV IgM檢測結果為陽性;排除標準：患有嚴重的感染性或者免疫性疾病者;患有精神類疾病或者認知功能障礙不能配合本研究者;中途退出本研究者。所有患者中男43例，女37例，年齡26～65歲，平均（45.1±3.2）歲;所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書，本研究已經醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 于清晨抽取所有患者5 mL的空腹靜脈血，經10 min離心后取其血清待測。

1.2.2 免疫熒光法檢測CMV IgG抗體 利用CMVAD169感染的人胚肺成纖維細胞進行相應的胰酶消化，并將相應的細胞核進行純化，然后在其中加入1/3正常的HEp-2細胞核，為內參陰性的參照對比;在印制28孔的孔片中將上述細胞懸液放入其中并進行滴涂，待干燥后采用丙酮進行15 min的固定。對血清標本進行稀釋后將抗原片滴入其中，之后將其置于37 ℃的環(huán)境中進行30 min的孵育，進行PBS沖洗后，加入Evans藍稀釋并帶有熒光標記的IgG抗體內，同樣在37 ℃的環(huán)境中進行孵育30 min，再次進行PBS沖洗，用甘油封片，并放置于顯微鏡下進行觀察。若細胞核呈腎形并且為翠綠色則為CMV感染陽性，同時存在小而圓的HEp-2細胞核未存在熒光染色。

1.2.3 免疫捕獲法檢測CMV IgM抗體 檢測原理為抗IgM μ鏈捕獲酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA），CMV IgM抗體檢測的試劑盒由意大利DiaSorin公司提供，分別抽取所有患者的空腹靜脈血，經離心后將其血清分離，然后按照1︰101的比例進行稀釋，并將100 μL稀釋液加入含有IgM μ鏈抗體的96孔板中，在溫育60 min之后進行洗滌酶標板，然后采用辣根過氧化物酶標記的抗CMV抗體以及CMV抗原的混合物加入其中，再進行溫育60 min。采用底物溶液在其洗滌后進行顯色，30 min后終止操作。采用酶標儀讀取吸光度值（OD值），當標本OD值/界限值孔的OD值后，若所得結果<0.9則為陰性，>1.1表示為陽性，當檢測的結果處于兩者之間時，則需進行再一次檢測。

1.2.4 CMV IgG抗體親和力分析 按照1︰101稀釋后的100 μL標本置入帶有CMV抗原的微孔板內，每個標本均加兩孔，并在室溫中進行30 min的孵育;洗液洗板1次后，將200 μL的尿素加入標本孔內。另一孔采用PBS進行參照，之后同樣置于室溫中，10 min后進行3次洗板，并將100 μL的辣根過氧化物酶標記的第2抗體混合物加入其中，經30 min的室溫孵育之后洗板3次，然后將100 μL的TMB底物加入其中，在室溫內放置15 min后將450/620 nm的終止液加入其中并進行相應的比色實驗。親和力指數(shù)（AI）=經尿素處理標本孔的OD值/未經尿素處理標本孔的OD值，所得結果若<30%則為低親和力抗體，在30%～60%則為中等親和力抗體，>60%則為高親和力抗體。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CMV IgG抗體、IgM抗體OD值及AI值 所

有患者的CMV IgG檢測均為陽性，且稀釋度在1︰1 022～1︰14。40例CMV IgM抗體為陰性，AI值54%～95%，平均（79.3±6.4）%。40例CMV IgM抗體為陽性，AI值5.1%～99.1%，平均（61.7±5.9）%。兩者AI值比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=12.788，P<0.05）。40例CMV IgM抗體陽性的IgM抗體OD值及AI，見表1。

2.2 CMV IgM陰性與陽性者親和力比較 40例CMV IgM陰性者中，2例（5.0%）IgG抗體為中等親和力抗體，38例（95.0%）IgG抗體為高親和力抗體。40例CMV IgM陽性中，9例（22.5%）IgG抗體為低親和力抗體;4例（10.0%）IgG抗體為中等親和力抗體;27例（67.5%）IgG抗體為高親和力抗體。CMV IgM陰性與陽性者CMV IgG抗體親和力比較，差異有統(tǒng)計學意義（Z=5.416，P<0.05）。

3 討論

人類在感染CMV后大多不會出現(xiàn)任何癥狀，屬于亞臨床感染的一種，在全球范圍內均有發(fā)生，且無任何季節(jié)性，感染率相對較高[7]。CMV出現(xiàn)原發(fā)性感染后，大多在內皮細胞、白細胞以及機體組織中進行潛伏。CMV感染通過對機體產生有效刺激進而致使CMV IgM抗體的產生，而CMV IgG抗體大約會在2周之后出現(xiàn)，CMV IgM抗體則會緩慢消失，部分患者CMV IgM抗體消失的時間會存在顯著延長的情況，因此，對患者在進行病情判定的過程中若單憑CMV IgM抗體進行CMV原發(fā)性感染的檢測，則容易導致誤診的情況出現(xiàn)，并且不利于是否為近期感染的情況進行有效判定[8-10]?？贵w親和力主要是指CMV IgG抗體與其抗原進行有效結合的能力，通過對親和力進行有效評估能夠對患者感染的時間進行大致判定。若機體內存在相對較低的親和力抗體，則表明患者感染的時間大約發(fā)生在3～5個月之內，若患者機體內的親和力抗體相對較高，則患者大約在幾個月或者幾年之內存在感染[11-12]。CMV IgG抗體親和力較高且IgM為陽性則表明患者存在遠期CMV感染的狀況，患者的機體內會具有IgM抗體持續(xù)存在的情況[13]。本研究40例CMV IgM陽性者中，有9例CMV IgG抗體為低親和力，說明為近期巨細胞病毒感染。4例CMV IgG抗體為中等親和力，并且其中有1例經檢測其效價能夠達到1︰1 022，與此同時，在臨床中存在發(fā)熱的情況，經過與臨床的診斷結果進行合理分析顯示，該患者存在近期原發(fā)性感染的狀況;此外其余的3例患者則并未出現(xiàn)血清學變化的狀況，也并為存在較為顯著的臨床癥狀，因此并不能排除遠期感染的情況。在進行臨床診斷的過程中，雖然部分患者具有感染的情況，但由于其CMV感染的癥狀并未存在特異性，致使不能夠將其與其他基礎類的疾病進行有效區(qū)分。雖然其CMV IgM抗體顯示為陽性，但仍有持續(xù)存在的CMV IgM抗體或者復發(fā)感染的可能[14]。對于存在自身免疫類疾病但身體狀況表現(xiàn)較為正常或者免疫力相對正常者而言，當CMV IgM抗體持續(xù)存在或復發(fā)感染的情況出現(xiàn)時，并不會存在任何的臨床特征[15-16]。有關研究中表明，AI值為30%是CMV IgG抗體親和力有效判定的臨界點，CMV IgG抗體親和力分析具有相對較高的敏感度，甚至能夠達到100%，而特異度也在84.5%以上，僅從CMV IgG抗體檢測或者CMV IgM抗體檢測均不能夠對CMV感染的情況進行有效判定[17-18]。本研究中顯示，在40例CMV IgM抗體為陽性的患者中，CMV IgG抗體低親和力占比相對較低，僅為22.5%（9/40），而高親和力為67.5%（27/40）占比相對較高，其中僅有4例患者表現(xiàn)為中等親和力抗體。依據(jù)國內外有關研究表明，大部分CMV IgM抗體顯示為陽性的患者均不是近期產生的CMV，需經CMV IgG抗體親和力評估進而判斷其是否存在近期原發(fā)性CMV感染的情況[19-20]。目前臨床診斷中，對于CMV病原學的檢查較為缺乏，因此，不能夠單憑血清學的檢測對患者的診斷結果進行評估，應通過CMV IgM抗體檢測及IgG抗體親和力分析對CMV感染情況進行有效評估，可在提高檢測結果的準確性的同時對患者目前的情況做出準確判定。

綜上所述，在CMV原發(fā)性感染診斷過程中，大多數(shù)存在CMV IgM抗體陽性的患者并非是近期的原發(fā)性感染，并不能根據(jù)單一的血清學檢測進行判定及診斷，應聯(lián)合IgM抗體檢測與IgG抗體親和力分析。

參考文獻

[1]陳武娟，賀美榮，楊蓉.人類巨細胞病毒IgG抗體ELISA檢測試劑的研制[J].免疫學雜志，2017，33（4）：349-353.

[2]賈春輝，王磊，荊凡輝，等.艾滋病合并巨細胞病毒感染48例臨床分析及T淋巴細胞亞群特點[J].中華內科雜志，2019，58（3）：191-197.

[3]李璐，林菲，賈瑩，等.成人EB病毒和巨細胞病毒混合感染相關性單核細胞增多癥的臨床分析[J].中華醫(yī)學雜志，2017，97（39）：3068-3071.

[4]陳怡雯，蘇婷，張美華，等.以皮膚損害為首要表現(xiàn)的巨細胞病毒感染一例[J].中華皮膚科雜志，2019，52（4）：236-240.

[5]柯鵬，馬驍，劉躍均，等.異基因造血干細胞移植后合并巨細胞病毒腦炎一例[J].中華內科雜志，2017，56（1）：54-55.

[6]李秋馨，方育群.尿液巨細胞病毒DNA聯(lián)合血清巨細胞病毒特異抗體檢測對嬰兒巨細胞病毒感染的診斷價值研究[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2016，13（19）：118-121.

[7]谷體心，任珂南，馮紅云，等.巨細胞病毒感染患者射頻消融聯(lián)合雙心干預效果觀察[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2019，29（6）：831-834.

[8]于濤，劉志佳，肖漓，等.腎移植術后巨細胞病毒感染對受者NKT細胞表達CD226的影響[J].中華醫(yī)學雜志，2019，99（12）：884-888.

[9]王爽，鄒飛，吳思，等.人巨細胞病毒感染新生兒血清和腦脊液細胞因子的變化[J].中華實用兒科臨床雜志，2019，34（11）：823-826.

[10] Luck S E，Wieringa J W，Blázquez-Gamero D，et al.

Congenital Cytomegalovirus：A European Expert Consensus Statement on Diagnosis and Management[J].Pediatr Infect Dis J.2017，36（12）：1205-1213.

[11]王雪珂，程秀永.新生兒先天性巨細胞病毒感染的實驗室檢查及研究進展[J].中華實用兒科臨床雜志，2018，33（22）：1758-1760.

[12]曾慶賀，董加秀，孟艷，等.人巨細胞病毒感染的流行病學研究進展[J].山東醫(yī)藥，2017，57（12）：110-116.

[13]姜輝，張秋彬，朱華棟.非艾滋病耶氏肺孢子菌肺炎患者合并巨細胞病毒血癥的危險因素分析[J].中華急診醫(yī)學雜志，2018，27（9）：1004-1009.

[14]卜妙然，郁晶晶，葉黎離，等.巨細胞病毒肝炎嬰兒外周血IL-33、sST2表達及意義[J].臨床兒科雜志，2019，37（7）：512-515.

[15]王玉梅.丁二磺酸腺苷蛋氨酸與更昔洛韋聯(lián)合治療嬰兒巨細胞病毒性肝炎療效觀察[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2015，12（10）：1-3.

[16] Luzarowski M，Kosmacz M，Sokolowska E，et al.Affinity purification with metabolomic and proteomic analysis unravels diverse roles of nucleoside diphosphate kinases[J].Journal of Experimental Botany，2017，68（13）：3487-3499.

[17]楊偉健，鄭亦男，沈海廣，等.不同體液巨細胞病毒DNA實時熒光定量-PCR檢測在免疫正常嬰兒巨細胞病毒肺炎中的診斷價值[J].中華實用兒科臨床雜志，2019，34（9）：669-674.

[18] Guberina H，Nardi F D S，Michita R T，et al.Susceptibility of HLA-E*01：03 Allele Carriers to Develop Cytomegalovirus Replication After Living-Donor Kidney Transplantation[J].J Infect Dis，2018，217（12）：1918-1922.

[19]崔丹，張建樓，左玉柱，等.驢源抗犬細小病毒IgG抗體的制備及其抗病毒活性的分析[J].中國獸醫(yī)學報，2018，17（9）：1677-1681.

[20] Boeckh M，Stevens-Ayers T，Travi G，et al.Bronchoalveolar Lavage DNA Quantification in Cytomegalovirus Pneumonia after Hematopoietic Cell Transplantation[J].J Infect Dis，2017，215（10）：1514-1522.

（收稿日期：2019-12-19） （本文編輯：田婧）