劉玲玲

（吉林電子信息職業(yè)技術學院，吉林 吉林 132021）

虎掌菌又名又稱獐子菌、仲帽、獐頭菌等，學名翹鱗肉齒菌（Saarcodon imbricatum）。其子實體粗大，菌肉厚實、水分少，新鮮時味道鮮美可以食用，但變干后略有苦味[1]?；⒄凭墒炀w上長有一層黃褐色的絨毛，并有明顯的黑色花紋，外形與老虎的爪子十分相似因而得名?；⒄凭且环N外生菌根菌，多分布于我國西藏、青海等西部高山高寒地區(qū)的森林中，尤以云杉、冷杉林中較多[2]。中醫(yī)認為該菌性平味甘，本質(zhì)溫熱，食用后有抗寒、舒筋活血、益氣補氣之功效，對關節(jié)炎和風濕痹痛以及腰酸背痛等癥都有明顯預防和緩解作用[3]?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明，虎掌菌含有大量的胞外多糖，可以增強人體免疫細胞活性，提高人體自身免疫力，被用于癌癥、腫瘤、肝硬化等疾病的輔助治療中[4]；民間因虎掌菌的外形認為有類似虎鞭的壯陽功效，而且因虎掌菌濃郁持久的香味，常被用于夏季驅(qū)蚊、防止米面生蟲[5]。

虎掌菌營養(yǎng)豐富、食用價值特別高，保健功效也很明顯，經(jīng)常食用能滋養(yǎng)身體也能增強身體素質(zhì)。虎掌菌含有的真菌多糖具有控制細胞分化，調(diào)節(jié)細胞生長衰老，提高免疫力等多種功效[6]。對運動員來說具有特殊的保健功效，對提高運動耐力、延緩運動員的疲勞感、改善運動生理狀態(tài)都有一定的作用?？梢哉f，虎掌菌多糖是一種天然的抗疲勞活性物質(zhì)，而且多糖還具有抗腫瘤、防止過早衰老、美容養(yǎng)顏、抗病毒、促進核酸和蛋白質(zhì)的生物合成，修復損傷的組織細胞等多種功效，這主要也源于虎掌菌多糖的抗氧化活性[7]。因此，虎掌菌粗多糖極具藥用和食用價值，研究虎掌菌粗多糖對運動疲勞和抗氧化作用有著十分重要的理論和現(xiàn)實意義。

1 虎掌菌粗多糖提取及含量測定

1.1 試劑與儀器

虎掌菌干品購自云南珍松露商貿(mào)有限公司，清洗晾干后備用。主要試劑有：丙酮、乙醚、無水乙醇（分析純） 購自河南焦作市化工三廠；濃硫酸、苯酚、葡萄糖、水楊酸、氫氧化鈉、丙三醇（分析純）購自西安市灞橋化學試劑廠。

主要儀器設備：WBZ-S801-7鼓風電熱烘箱，蘇州王品工業(yè)烘箱設備有限公司；756PC紫外可見分光光度計，上海醫(yī)用激光儀器廠；HH-W420型電熱恒溫水浴鍋，濟南歐萊博科學儀器有限公司；BS-220邁瑞全自動生化分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.2 虎掌菌粗多糖提取

虎掌菌粗多糖包括菌絲體多糖和子實體多糖[8]，子實體多糖的提取方法為：取虎掌菌子實體低溫烘干后粉碎過篩，使用80%乙醇脫脂除雜后過濾，濾渣加水浸提2次，濾液合并后濃縮、醇沉，沉淀使用丙酮、乙醚、無水乙醇洗滌，即為虎掌菌粗多糖。

1.3 虎掌菌粗多糖含量測定

總含量測定一般采用苯酚-硫酸法或蒽酮-硫酸法測定，再用DNS法測還原糖[9]。粗多糖含量（m，g·g-1）計算公式為：

式中：m1為總糖含量（g·g-1）；m2為還原糖含量（g·g-1）。

測定結果為，虎掌菌子實體粗多糖含量為0.737 5 g·g-1，其中總糖含量為0.759 8 g·g-1，還原糖含量為 0.0223g·g-1。

2 虎掌菌粗多糖抗氧化作用研究

2.1 總抗氧化能力的測定

2.1.1 總抗氧化能力的測定方法

配置 10 mg·mL-1、20 mg·mL-1、30 mg·mL-1三種濃度的虎掌菌粗多糖溶液各100 uL，分別加入4 mL的三吡啶吖嗪測試液，混合均勻后放入35℃水浴鍋中水浴15 min，取出后在595 nm處測量吸光度，并根據(jù)標準曲線計算出樣品中總鐵的濃度，從而計算出不同濃度的虎掌菌粗多糖溶液總抗氧化能力的大小。

2.1.2 總抗氧化能力測定結果與分析

根據(jù)虎掌菌粗多糖溶液中的還原性物質(zhì)可將Fe3+還原成Fe2+，并在595 nm處有一強吸收的特性?；⒄凭侄嗵侨芤褐械目寡趸镔|(zhì)能給出電子使Fe3+還原，觀察顯色劑三吡啶三吖嗪溶液的顏色會由淡黃色逐漸變成藍綠色，鐵和顯色劑生成藍綠色復合物有一個明顯的變色過程。然后用比色計在595 nm波長處測量吸光度的變化值，通過吸光度值來間接的判定虎掌菌總抗氧化性能的強弱。一般來說，吸光值越大還原力越強，即總抗氧化活性越高。3種不同濃度的虎掌菌粗多糖溶液的總抗氧化活性測定結果見表1。

表1 虎掌菌粗多糖溶液總抗氧化活性Tab.1 Total antioxidant activity of polysaccharide solution from Saarcodon imbricatum

由表1可知，不同濃度的虎掌菌粗多糖溶液對Fe3+的還原能力存在一定的差異。30 mg·mL-1的虎掌菌粗多糖溶液還原力最強。隨著濃度的下降，其還原能力也在降低，表現(xiàn)出一定的正量價關系。這說明多糖的含量與總抗氧化能力成正比。

2.2 羥自由基清除能力的測定

2.2.1 羥自由基的清除能力的測定方法

配置 10 mg·mL-1、20 mg·mL-1、30 mg·mL-1三種濃度的虎掌菌粗多糖溶液各100 uL，取5 mL的試管3支，均加入0.5 mmol·L-1的鄰二氮菲溶液0.5 mL，分別加入0.1 mol·L-1的磷酸緩沖鹽溶液1 mL。在3支試管中分別加入3種濃度的虎掌菌粗多糖溶液，充分混勻后，再加入0.5 mmol·L-1的硫酸亞鐵溶液l mL。充分混合均勻后再加入0.01%的過氧化氫溶液l mL。放入35℃水浴鍋中水浴60 min，在510 nm處用分光度計測定吸光度值，作為樣品管。同時設置對照管和空白管，用l mL的蒸餾水代替虎掌菌粗多糖溶液，作為對照管；用l mL的蒸餾水代替過氧化氫溶液，作為空白管。每個處理試樣均做3個平行試驗，取平均值，其中VC為陽性對照。羥自由基的抑制率（E，%）計算公式為：

式中：A0為空白管吸光度值；A為虎掌菌粗多糖溶液吸光度值。

2.2.2 清除羥自由基能力測定結果與分析

根據(jù)公式計算不同濃度的虎掌菌粗多糖溶液對羥自由基的抑制率，可以看出，虎掌菌粗多糖溶液對Fenton反應產(chǎn)生的羥基自由基都有明顯的清除作用，反應體系中選用不同濃度的多糖溶液對羥自由基的清除作用有一定差異。最大清除率可達93.49%，平均清除率為88.67%；而且多糖濃度與清除率呈正量價關系，說明虎掌菌粗多糖的含量與清除羥自由基的能力成正比。

3 虎掌菌粗多糖對運動抗疲勞的作用

3.1 試驗方法

選本校體育系的20名男運動員為研究對象，常年進行體育運動訓練，身體健康無疾病。平均年齡（20.40±1.27） 歲；身高 （176.40±2.43） cm；體重（78.80±2.03） kg。分2組進行試驗，每組10人，試驗組在每天正常飲食的基礎上，服用200 mL的虎掌菌粗多糖溶液，連續(xù)服用30 d。如遇多糖溶液口感問題可以加少量安慰劑幫助服用；對照組不服用任何補劑。試驗期間各組均每天正常飲食，不得添加其它額外的藥品、保健品和飲料等食物。

3.2 試驗結果與分析

血尿素氮和血清肌酸激酶的檢測結果見表2。

表2 血液指標檢測結果Tab.2 Results blood index test

由表2可知，對照組試驗前后的血尿素氮含量基本沒有變化；而試驗組血尿素氮的含量變化明顯，試驗開始后升高了22.06%；試驗組與對照組相比，試驗30 d后血尿素氮含量變化不大。由此可見，服用虎掌菌粗多糖溶液會提高血液中血尿素氮的含量。分析血尿素氮含量的升高的原因可能是服用虎掌菌粗多糖后，攝入的蛋白質(zhì)過多而造成的；虎掌菌粗多糖溶液中含有大量的大分子蛋白質(zhì)，每天200 mL的攝入量可能過高，造成多余蛋白質(zhì)不能被人體吸收，從而引起血尿素氮的升高，屬于高蛋白飲食的問題。

試驗組血清肌酸激酶含量在試驗前后增加了7.48%；而對照組在試驗前后相比則增加了33.66%，對照組血清肌酸激酶含量增加明顯。試驗組與對照組相比，試驗后血清肌酸激酶含量反而減少了19.83%。對照組試驗前后血清肌酸激酶的增加表明，在試驗期間運動訓練負荷有一定的增加，造成血清肌酸激酶含量的升高。但試驗組由于服用了虎掌菌粗多糖，血清肌酸激酶含量增加幅度明顯要少，在合理的數(shù)值范圍內(nèi)。分析其原因是虎掌菌粗多糖對受損的運動細胞有一定的修復作用，能夠減少自由基對細胞膜的損害，修復受損細胞的同時，也可以提供大負荷運動時的能量供給，維持機體的能量平衡，從而減少血清肌酸激酶的滲出。由于正常的男性血清肌酸激酶含量數(shù)值范圍在約20 U·L-1～200 U·L-1之間，因此試驗組和對照組人員均未有明顯的疲勞感。

4 結論

虎掌菌子實體提取的粗多糖具有一定的抗氧化作用，各種活性氧自由基對機體都有一定的氧化損傷，輕者會引起運動性疲勞，嚴重時會導致各種疾病的產(chǎn)生。通過對虎掌菌粗多糖的體外抗氧化活性進行研究，測定了虎掌菌粗多糖的總抗氧化能力和羥自由基的清除能力。同時，對虎掌菌粗多糖的運動抗疲勞作用進行研究，對研究對象的血尿素氮和血清肌酸激酶2項血液指標進行了檢測，分析了運動疲勞的產(chǎn)生及恢復機理，證明了虎掌菌粗多糖對運動疲勞的抗氧化作用。為進一步開發(fā)虎掌菌資源提供了理論依據(jù)。