王亞濤

（黃河科技學(xué)院公共體育藝術(shù)部，河南 鄭州 450067）

“運動病”是指特定環(huán)境條件下的各種不規(guī)則運動所引起的身體反應(yīng)癥狀[1]?！疤囟ōh(huán)境”是指在乘船、飛機(jī)、汽車等交通工具時，環(huán)境條件的影響因素是多方面的，有的是汽油、空氣中的特殊氣味，有的是各種外部噪聲，還可能是海浪、周圍景色的起伏變化對視覺造成的沖擊；所謂的“不規(guī)則運動”是指顛簸、振動、搖晃、擺動、旋轉(zhuǎn)等運動方式；而“身體反應(yīng)的癥狀”則根據(jù)不同的人，“運動病”會出現(xiàn)不同反應(yīng)癥狀，如頭暈?zāi)垦！⒛樕n白、惡心嘔吐、眼花耳鳴，或者出冷汗、昏昏欲睡。“運動病”這種不適應(yīng)性的癥狀產(chǎn)生的原因目前還不是十分清楚，有人認(rèn)為是環(huán)境因素對聽覺、嗅覺和視覺的刺激，也有人認(rèn)為是心理作用，還有研究猜測是內(nèi)耳內(nèi)人體位置平衡的器官的失調(diào)、植物神經(jīng)功能紊亂等[2-3]。

“運動病”的治療目前主要通過鍛煉適應(yīng)能力、服用抗運動病及鎮(zhèn)靜藥物和日常預(yù)防治療等手段[4]。近年來，日常預(yù)防和治療手段逐漸被人們所認(rèn)可，通過調(diào)節(jié)飲食和保健食品的輔助治療取得了一定的效果，其中植物多糖在治療運動病方面的研究越來越受到廣泛的關(guān)注[5]。

牛肝菌（Boletus spp.）是牛肝菌科（Boletaceae） 一部分真菌的統(tǒng)稱，部分可食用。牛肝菌不僅香味獨特、營養(yǎng)豐富，是不可多得的美味佳肴，同時其藥用價值也十分突出，西醫(yī)對其在糖尿病、抗腫瘤、抗流感病毒[6]的功效十分認(rèn)可，而中醫(yī)則認(rèn)為牛肝菌在治療貧血、體虛、頭暈、耳鳴有特殊功效[7]，這與運動病的癥狀十分相似。為了解牛肝菌的藥用機(jī)理與生物活性成分，就牛肝菌粗多糖在運動病防治中的作用機(jī)理進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討牛肝菌的食療效功效、探討牛肝菌粗多糖在運動病治療中的作用。

1 試驗方法

1.1 材料與試劑

干牛肝菌子實體購自重慶市謙城鑫泰農(nóng)產(chǎn)品有限公司的“謙誠鑫泰”品牌牛肝菌，蟲蛀率≤1.0%，雜質(zhì)≤1.0%；水分≤92.0%；灰分≤8.0%。

蒸餾水、95%乙醇、無水乙醇（分析純） 購自西安市灞橋化學(xué)試劑廠；氯仿、正丁醇購自山東茂軍化工科技有限公司；無水乙醚（分析純）、丙酮（化學(xué)純）購自河南省新鄉(xiāng)市中原有機(jī)化工有限責(zé)任公司。小鼠5羥色胺 (5-HT)ELISA檢測試劑盒，購自上海江萊生物科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

SJBC-1000型立式粉碎機(jī)，臺州市世金塑膠機(jī)械有限公司；FA2004型電子分析天平，德國Sartorius公司；JB300-SH數(shù)顯恒速電動攪拌器，上海重逢科學(xué)儀器有限公司；DZF-6090型立式真空干燥箱，上海舍巖儀器有限公司；47600小鼠轉(zhuǎn)棒儀，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；SA204型Y迷宮實驗分析系統(tǒng)，江蘇賽昂斯生物科技有限公司；BZY-DG-400大小鼠跳臺記錄系統(tǒng)，東莞博之遠(yuǎn)生物科技發(fā)展有限公司；Allegra X-15R臺式冷凍離心機(jī)，貝克曼庫爾特生命科學(xué)事業(yè)部。

1.3 牛肝菌粗多糖提取

取牛肝菌干品清洗干凈后切段、烘干、粉碎、過篩，按照粗多糖水提醇沉法進(jìn)行多糖分離提取[6]。取牛肝菌粉200 g，按料液比1∶10的比例加蒸餾水混合均勻，煎煮2 h；自然冷卻后，靜置沉淀反應(yīng)2 h，重復(fù)3次后進(jìn)行過濾，將過濾后得到的煎煮液濃縮至50%得到約1 000 mL的濃縮液，自然冷卻后放入4°C冰箱靜置24 h。采用Sevag法去除蛋白質(zhì)[9]，取出后依次加入200 mL的氯仿、20 mL的正丁醇，用電動攪拌器混合15 min后靜置分層，去除水層與溶液交界處的變性蛋白，再加入500 mL的95%乙醇攪拌濃縮，重復(fù)3次后自然冷卻靜置24 h，收集底部沉淀物，依次用無水乙醇、丙酮和無水乙醚對沉淀物進(jìn)行洗滌，除去水分和殘存物，真空干燥即得牛肝菌粗多糖粉末[8]。

1.4 試驗分組與試驗方法

1.4.1 試驗分組

試驗用BALB/c小鼠40只，體重 (20±2)g，購自濟(jì)南朋悅實驗動物繁育有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（魯）20190003；按標(biāo)準(zhǔn)小動物飼養(yǎng)方式適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成4組，每組10只。試驗開始后每天上午定時給3個劑量組的小鼠灌胃配制好的牛肝菌粗多糖溶液，高劑量組、中劑量組、低劑量組分別灌胃 400 mg·kg-1、200 mg·kg-1和 100 mg·kg-1濃度的牛肝菌粗多糖溶液；空白對照組灌胃同樣體積生理鹽水，連續(xù)灌胃1周。

1.4.2 適應(yīng)性訓(xùn)練

1）給藥1小時后進(jìn)行迷宮適應(yīng)性訓(xùn)練：將小鼠放入Y迷宮中央，讓其自由穿梭于迷宮的3個臂，適應(yīng)2 min～3 min后開始試驗。隨機(jī)變換安全區(qū)，電擊小鼠，記錄小鼠逃往安全區(qū)為一次正確反應(yīng)。連續(xù)9次正確反應(yīng)即為學(xué)會逃避。在每只小鼠試驗結(jié)束后，需清理Y迷宮的排泄物。用75%醫(yī)用酒精擦拭，直至酒精揮發(fā)完全再繼續(xù)下一只小鼠的檢測，以防止氣味影響后續(xù)小鼠的穿梭行為。如小鼠不能學(xué)會逃避則舍棄不用。

2）跳臺適應(yīng)性訓(xùn)練：將小鼠放上跳臺系統(tǒng)的平臺，觀察小鼠在箱內(nèi)可自由上下適應(yīng)2 min～3 min，然后將跳臺底部電棒通交流電。小鼠能夠感受到電擊，有正常的跳上平臺躲避電擊反應(yīng)，訓(xùn)練期內(nèi)如果小鼠未跳下平臺則舍棄不用。

1.4.3 Y迷宮試驗

選擇迷宮適應(yīng)性訓(xùn)練和跳臺適應(yīng)性訓(xùn)練表現(xiàn)正常的小鼠，在末次適應(yīng)性訓(xùn)練結(jié)束后的第2天上午進(jìn)行Y迷宮試驗。首先建立小鼠眩暈?zāi)Ｐ停簩⑿∈笾糜谵D(zhuǎn)棒儀，轉(zhuǎn)速為10 r·s-1，勻速正向旋轉(zhuǎn)60 s急剎停止；立即再進(jìn)行Y迷宮試驗，記錄小鼠學(xué)會逃避所用時間。

1.4.4 跳臺試驗

下午進(jìn)度小鼠跳臺試驗。同樣方法建立小鼠眩暈?zāi)Ｐ秃螅⒓磳⑿∈蠓湃胩_系統(tǒng)，記錄小鼠第一次從平臺跳下所需要的時間（潛伏期），記錄5 min內(nèi)小鼠遭受電擊后跳下平臺的次數(shù)（錯誤次數(shù)）。

1.4.5 小鼠血清神經(jīng)遞質(zhì)含量檢測

建立小鼠眩暈?zāi)Ｐ秃?，無需麻醉，將小鼠固定，立即對頭部下頜處進(jìn)行消毒、采血靜置30 min后進(jìn)行冷凍離心機(jī)，在4℃、3 000 r·min-1離心15 min，將分離后的上清液嚴(yán)格按照小鼠5-羥色胺（5-HT）ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）檢測試劑盒操作步驟和方法，檢測血清內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)含量。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 小鼠Y迷宮試驗結(jié)果

各組小鼠學(xué)會逃避所用時間見表1。

表1 Y迷宮試驗結(jié)果Tab.1 The results of Y maze test

由表1可知，與對照組比較，灌胃牛肝菌粗多糖后，3個劑量組的小鼠逃避時間均有所縮短。說明牛肝菌粗多糖對產(chǎn)生眩暈的小鼠判斷力有積極的影響，對小鼠的機(jī)械旋轉(zhuǎn)所導(dǎo)致的眩暈有一定的抑制作用。而且灌胃劑量與抑制眩暈的效果有一定的正比例關(guān)系。

2.2 小鼠跳臺試驗結(jié)果

各組小鼠從平臺跳下時間和次數(shù)見表2。

表2 跳臺試驗結(jié)果Tab.2 The results of jumping test

由表2可知，與對照組比較，3個劑量組的小鼠的潛伏期均有顯著延長，其中高劑量組延長效果最好；而3個劑量組的錯誤次數(shù)均有明顯少，其中高劑量組的減少作用最為明顯。試驗結(jié)果說明，灌胃牛肝菌粗多糖對機(jī)械旋轉(zhuǎn)所導(dǎo)致的小鼠眩暈有一定的抑制作用，且灌胃劑量與抑制眩暈的效果呈現(xiàn)一定的正比例關(guān)系。

2.3 小鼠血清神經(jīng)遞質(zhì)水平變化

小鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)含量的試驗結(jié)果見表3。

表3 小鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)含量Tab.3 5-HT contents of in serum of mice

由表3可知，與對照組比較，3個劑量組的小鼠的神經(jīng)遞質(zhì)5-HT含量均有所降低，而且中劑量組的效果最為明顯。說明灌胃牛肝菌粗多糖能夠顯著降低小鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)5-HT的含量，抑制胃腸神經(jīng)的興奮度，減少惡心嘔吐等運動病癥狀；同時，灌胃中等劑量的效果要更好些。

3 結(jié)論

通過試驗，顯示出牛肝菌粗多糖中的生物活性物質(zhì)能夠?qū)ι窠?jīng)功能紊亂有一定的抑制作用，對小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力有一定的提高。這說明牛肝菌粗多糖對運動病的作用機(jī)理主要是對神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控作用，包括了對腦神經(jīng)、中樞神經(jīng)等神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。牛肝菌粗多糖的主要功效在于對神經(jīng)細(xì)胞過氧化的保護(hù)作用、對神經(jīng)細(xì)胞的營養(yǎng)作用、新陳代謝和免疫力的調(diào)節(jié)作用等。但由于運動病的產(chǎn)生原因復(fù)雜，與人的心情、對外界環(huán)境的適應(yīng)能力和神經(jīng)系統(tǒng)的反應(yīng)等多種因素有關(guān)。因此，后期還需要對牛肝菌粗多糖對血液系統(tǒng)和心理方面的影響進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討對運動病的診斷和治療方法。