李翠紅

（鄭州科技學(xué)院，河南 鄭州 450064）

運動障礙是對一組神經(jīng)性疾病的總稱，主要是指自主運動的能力出現(xiàn)問題，身體動作不連貫，肌肉不受控制，運動遲緩或不能完成一些自主運動[1]。運動障礙的主要表現(xiàn)有2類，一種表現(xiàn)為肌肉無力、運動遲緩甚至不能運動，如肌無力，肌肉萎縮、僵硬等；另一種就是肌肉間歇性或連續(xù)性的痙攣，如癲癇、舞蹈癥、面部肌肉抽搐和常見的帕金森綜合癥等[2-3]。由于運動性障礙主要是由于腦部神經(jīng)組織發(fā)生的病變導(dǎo)致的，因此除采用一些必要的康復(fù)訓(xùn)練組合治療外，對神經(jīng)和肌肉組織的營養(yǎng)必不可少。

猴頭菇（Hericium erinaceus） 是一種大型食藥兼用真菌，生長在闊葉林或針葉林的樹干樹洞中，成熟的猴頭菇子實體形態(tài)為絨毛狀的白色、略帶黃棕色，從形色上看很像毛猴的頭部，因而得名[4]。猴頭菇不僅是一道珍饈美味，近年來其藥用價值不斷被挖掘，利用猴頭菇制成的“健胃靈”、“復(fù)方猴頭沖劑”和“猴頭菌片”等中成藥在治療胃腸病癥、炎癥等方面取得了很好的療效[5]。猴頭菇中的多種生物活性物質(zhì)在抗氧化性、抗腫瘤和抗炎等方面具有獨特的功效，這為運動障礙癥的輔助治療提供了新思路[6]。

1 猴頭菇活性成分提取與鑒定

1.1 材料與試劑

猴頭菇（Hericium erinaceus） 購寧德市榮祥貿(mào)易有限公司，菌蓋直徑4 cm～8 cm，雜質(zhì)≤1.0%，水分≤92.0%。

蒸餾水、無水乙醇（AR），天津市天力化學(xué)試劑有限公司；鹽酸（AR）、鎂粉，西安市灞橋化學(xué)試劑廠；檸檬酸（99%），成都萬象宏潤生物科技有限公司；三氯化鋁（AR），武漢欣欣佳麗生物科技有限公司；1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（1-Methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP），上海易匯生物科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

BS-224型電子天平，德國SARTORIUS公司；SJBC-1000型立式粉碎機(jī)，臺州市世金塑膠機(jī)械有限公司；UV紫外線燈，香河揚紫特光電設(shè)備有限公司；DD-5M低速離心機(jī)，長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司；SHA-C往復(fù)式水浴恒溫振蕩器，常州金壇良友儀器有限公司；DZF-6090型立式真空干燥箱，上海舍巖儀器有限公司；XD-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海賢德實驗儀器有限公司。

1.3 活性成分提取

采用醇提混合超聲波輔助提取猴頭菇活性物質(zhì)。取猴頭菇干品清洗干凈后切段、烘干、粉碎、過篩；按料液比為1∶20，依次加入無水乙醇和檸檬酸的混合液，在60℃下水浴提取4 h；自然冷卻后，設(shè)超聲波提取功率為700 W，提取時間為60 s，提取溫度為60℃進(jìn)行提??；提取液真空抽濾，濾液在40℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，然后用蒸餾水定容；3 000 r·min-1離心20 min后收集上清液，過濾、濃縮后即得猴頭菇活性物質(zhì)粗提取液。

1.4 活性成分定性檢測

1.4.1 多糖、多酚類和甾醇類物質(zhì)的定性檢測

將猴頭菇粗提取液放入高效液相色譜儀進(jìn)樣系統(tǒng)中，按操作流程通過圖譜信號來檢測所含物質(zhì)成分，對照標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖可以找到多糖和多酚的特定色譜，因此判斷提取液中含有多糖類和多酚類物質(zhì)。甾醇類物質(zhì)主要是麥角甾醇，同樣采用郭華等人提出的高效液相色譜法進(jìn)行定性測定[8]。

1.4.2 黃酮類物質(zhì)定性檢測

1）取少量猴頭菇粗提取液，加入乙醇溶解混勻后，再加入鹽酸，鎂粉，觀察溶液出現(xiàn)微櫻桃紅色。

2）另取少量猴頭菇粗提取液滴兩滴在干凈的濾紙上，再滴上1%三氯化鋁乙醇溶液，自然晾干后在紫外線燈下觀察，發(fā)現(xiàn)有黃綠色熒光斑點。通過以上2種反應(yīng)證明，猴頭菇粗提取液中含有黃酮類物質(zhì)。

2 小鼠運動障礙試驗

2.1 試驗動物及分組

試驗選用SPF級小鼠，體重20 g左右，由鄭州市惠濟(jì)區(qū)華興實驗動物養(yǎng)殖場提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（豫） 2019-0002。按標(biāo)準(zhǔn)小動物飼養(yǎng)條件，分籠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用腹腔注射的方法進(jìn)行MPTP模型的建立，給小鼠每天注射20 mg·kg-1的MPTP，連續(xù)2周。給藥后觀察小鼠，出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、弓背、豎毛、抽搐或顫抖，自主運動減少等現(xiàn)象時，說明MPTP模型成功。剔除吞咽和飲水困難的小鼠，同時，在轉(zhuǎn)棒儀和爬桿試驗裝置進(jìn)行1周適應(yīng)性訓(xùn)練，剔除不合格的小鼠。

將合格小鼠隨機(jī)分5組，每組10只。運動障礙組：采用MPTP建模的小鼠；高劑量組：每日1次定時經(jīng)口灌胃400 mg·kg-1的猴頭菇粗提取液；中劑量組：每日1次定時經(jīng)口灌胃灌胃200 mg·kg-1的猴頭菇粗提取液；低劑量組：每日1次定時經(jīng)口灌胃灌胃100 mg·kg-1的猴頭菇粗提取液；對照組：不進(jìn)行MPTP建模，每日1次定時經(jīng)口灌胃小鼠同等劑量的純凈水。以上各組均連續(xù)注射、灌胃2周。

2.2 試驗方法

1）轉(zhuǎn)棒試驗。轉(zhuǎn)棒儀用于檢測小鼠的運動協(xié)調(diào)能力。末次灌胃1 h后進(jìn)行轉(zhuǎn)棒試驗，采用小鼠轉(zhuǎn)輪（直徑 35 mm），將轉(zhuǎn)棒儀轉(zhuǎn)速設(shè)置為30 r·min-1，測試限時5 min，記錄每只小鼠掉下轉(zhuǎn)輪的時間，中間休息時間1 min，共記錄3次，每次可同時對8只小鼠進(jìn)行試驗。

2）爬桿試驗。爬桿試驗用于檢測小鼠肢體協(xié)調(diào)能力。轉(zhuǎn)棒試驗結(jié)束1 h后進(jìn)行小鼠爬桿試驗，在試驗裝置下端放入鼠籠中，將小鼠放于試驗裝置上端的圓球上，開始記時，記錄小鼠頭朝上轉(zhuǎn)為頭向下的時間和爬到桿底時間，每只小鼠測試3次，將3次平均時間作為小鼠爬桿時間。

3）敞箱試驗。敞箱試驗系統(tǒng)采用計算機(jī)視覺相關(guān)算法測量小鼠進(jìn)入敞箱后的各種行為（運動、靜止等）以及動物在各劃定區(qū)域的行為參數(shù)。利用敞箱引起小鼠的焦慮及恐懼，以測量小鼠的運動量和運動模式變化。主要用于評價小鼠對新環(huán)境的適應(yīng)能力和運動能力的評估。

2.3 試驗結(jié)果與分析

猴頭菇活性成分對小鼠轉(zhuǎn)棒時間的影響試驗結(jié)果見表1。

表1 猴頭菇活性成分對運動障礙小鼠轉(zhuǎn)棒時間的影響Tab.1 Effect of the active ingredients of Hericium erinaceus on the transfer time of exercise impaired mice

由表1可知，與對照組相比，運動障礙組、低劑量組、中劑量組和高劑量組的小鼠轉(zhuǎn)棒時間均大幅縮短，說明MPTP對小鼠運動能力產(chǎn)生了明顯影響，使小鼠出現(xiàn)了運動障礙的癥狀表現(xiàn)，運動協(xié)調(diào)性下降明顯。與運動障礙組相比，灌胃猴頭菇粗提取液的3組小鼠的轉(zhuǎn)棒時間均有所增長，中劑量組的效果最好，適當(dāng)增加猴頭菇粗提取液的劑量能夠延長小鼠轉(zhuǎn)棒時間，一定程度上改善了小鼠的運動障礙癥狀，小鼠運動協(xié)調(diào)能力有所提高。猴頭菇活性成分對小鼠爬桿時間的影響試驗結(jié)果見表2。

表2 猴頭菇活性成分對運動障礙小鼠爬桿時間的影響Tab.2 Effect of the active ingredients of Hericium erinaceus on the climbing time of dyskinesia mice

由表2可知。與對照組相比，運動障礙組、低劑量組、中劑量組和高劑量組的小鼠爬桿時間均有所延長，說明MPTP對小鼠的肢體協(xié)調(diào)能力產(chǎn)生了明顯影響，使小鼠出現(xiàn)了肢體協(xié)調(diào)能力下降的運動障礙癥狀。與運動障礙組相比，灌胃猴頭菇粗提取液的3個劑量組，小鼠平均爬桿時間均有所減少，而且灌胃的劑量與小鼠爬桿時間呈正比量價關(guān)系，高劑量的猴頭菇粗提取液對小鼠的肢體協(xié)調(diào)能力影響顯著，能有效改善小鼠帕金森病引起的運動障礙癥狀。猴頭菇活性成分對小鼠開場試驗的影響試驗結(jié)果見表3。

表3 猴頭菇活性成分對運動障礙小鼠開場試驗行為的影響Tab.3 Effect of the active ingredients of Hericium erinaceus on the opening test behavior of dyskinesia mice

由表3可知，與對照組相比，運動障礙組、低劑量組、中劑量組和高劑量組的小鼠進(jìn)入開場中心區(qū)域的次數(shù)明顯減少，而且小鼠的活動總路程也明顯減少。說明MPTP對小鼠的運動能力和焦慮程度影響較大，小鼠只在開場的周邊活動，較少進(jìn)入中心區(qū)域，小鼠的焦慮情緒增加。與運動障礙組相比，灌胃猴頭菇粗提取液的3組小鼠進(jìn)入開場中心區(qū)域的次數(shù)均有所增加，而且活動的總路程也有增加，說明猴頭菇粗提取液能夠提高小鼠的運動能力，減少小鼠的焦慮感。

4 討論

猴頭菇中含有比較多的不飽和脂肪酸，可以很好的降低膽固醇含量、軟化血管。血液供給量的提升，對腦部神經(jīng)元細(xì)胞的營養(yǎng)和受損修復(fù)有一定的作用。而帕金森癥這種運動障礙病正是一種神經(jīng)退化性的疾病，其主要病因就是腦黑質(zhì)區(qū)中的多巴胺神經(jīng)元的損傷和死亡，導(dǎo)致休內(nèi)多巴胺的運輸出現(xiàn)問題。而多巴胺是大腦重要的神經(jīng)傳導(dǎo)遞質(zhì)，是調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要物質(zhì)，也是控制人體運動的重要物質(zhì)。帕金森病就是多巴胺減少而引起的運動障礙。小鼠的轉(zhuǎn)棒試驗和爬桿試驗都說明，灌胃了猴頭菇活性物質(zhì)的小鼠，其肢體協(xié)調(diào)運動能力和反應(yīng)能力都有所提升。說明猴頭菇活性成分對有運動障礙小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的修復(fù)作用，能夠營養(yǎng)腦神經(jīng)元細(xì)胞，減少多巴胺神經(jīng)元的死亡。

小鼠開場試驗中在中心區(qū)域進(jìn)出次數(shù)的減少，說明小鼠對陌生的開場試驗環(huán)境有一定的恐懼感，處于一種焦慮的狀態(tài)，不愿意像正常嚙齒動物一樣對新環(huán)境進(jìn)行探索，只在靠邊的位置活動，以增加自身的安全感。而灌胃猴頭菇活性成分后，小鼠在開場試驗中的表現(xiàn)出了一定的興奮性，進(jìn)入中心次數(shù)和活動量明顯增加。這也驗證了猴頭菇活性成分對神經(jīng)性遞質(zhì)的減少有抵制作用，可以改善焦慮、記憶衰退等神經(jīng)性問題，提高小鼠的運動興奮度，小鼠開場試驗中活動總路程的增加也說明了猴頭菇活性成分對運動障礙的抵抗作用。