劉立果

摘要：以‘楊氏金紅50號獼猴桃組培苗為材料，進行生根培養(yǎng)、煉苗移栽研究。結(jié)果表明：‘楊氏金紅50號獼猴桃生根培養(yǎng)中，愈傷組織塊小的組培苗生根數(shù)多、根較長，且根深入培養(yǎng)基內(nèi)部，易成活。生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+0.9mg/L IBA，愈傷組織直徑為1.03cm，生根率100%，生根數(shù)12.58條，根長3.19cm。培養(yǎng)室開蓋煉苗7d后進行細沙栽培，細沙培養(yǎng)到根布滿培養(yǎng)瓶時移栽至黑色腐殖土的田園土中，以成活率高。

關鍵詞：獼猴桃;組培苗;生根;煉苗;移栽

近年來，中華獼猴桃以其優(yōu)良的口感廣受歡迎，人工栽培規(guī)模日趨增大。‘楊氏金紅50號獼猴桃是江蘇省揚州楊氏獼猴桃研究所選育的品種，果皮呈淺黃綠色，果肉呈淡黃色，果心呈紅色，果實外形整齊端正，平均單果重104g左右，最大果重164.3g，耐儲存，口感極佳，營養(yǎng)豐富，富含維生素C，具有較高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值。

獼猴桃傳統(tǒng)的育苗方法育苗時間長，成活率低，難以滿足市場的需求。利用現(xiàn)代生物技術(shù)——植物組織培養(yǎng)能實現(xiàn)獼猴桃苗快速大量繁殖。目前，國內(nèi)對獼猴桃的組織培養(yǎng)研究已獲得很大進展，在獼猴桃莖段、花藥、葉柄、葉片等器官的組織培養(yǎng)方面取得很多成果。為提高‘楊氏金紅50號獼猴桃組培苗的生根質(zhì)量，本實驗以其帶芽莖段培養(yǎng)的組培苗為生根培養(yǎng)原材料，探索最佳生根培養(yǎng)方法、煉苗方法，提高移栽成活率，為獼猴桃的工廠化育苗提供技術(shù)指導。

一、材料與方法

以南陽師范學院組織培養(yǎng)室提供的‘楊氏金紅50號獼猴桃組織培養(yǎng)苗為試驗材料，采用以下方法進行生根培養(yǎng)及移栽試驗。

（一）培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基高度為1.5CB，pH為5.8～6.0，用高壓滅菌鍋滅菌，滅菌條件為：121℃、0.1MPa、20min。組織培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照為1500～2000Lx。

（二）生根培養(yǎng)

在組織培養(yǎng)室選取高度3cm左右、長勢較好的獼猴桃組培苗，將其不定芽切下，接種在分別含有NAA（萘乙酸）和IBA（吲哚乙酸）的1/2 MS培養(yǎng)基中進行誘導生根，NAA、IBA二種激素濃度設置10個梯度，均為（單位：mg/L）：0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1。以1/2 MS培養(yǎng)基作為對照，每個處理重復3次，每個梯度接種30株組培苗，共接種1800株，培養(yǎng)35～40d后，進行生根率、生根數(shù)量及根長統(tǒng)計。

（三）煉苗、沙培和移栽

試驗于2018年6月開始，組織培養(yǎng)實驗室溫度為25±2℃，普通實驗室溫度為25～30℃。開蓋煉苗步驟如下：打開密封的瓶蓋，使每棵生根苗充分接觸光照，如煉苗過程中出現(xiàn)葉片萎焉現(xiàn)象，可適當向培養(yǎng)基內(nèi)注入自來水，水面高度剛沒過培養(yǎng)基表面即可。開蓋煉苗，每個處理60個苗，開蓋煉苗時間0～11d不等，煉苗環(huán)境分為培養(yǎng)室開蓋煉苗、普通實驗室開蓋煉苗兩種。

開蓋煉苗之后，進行細沙栽培3周左右，步驟如下：在玻璃培養(yǎng)瓶中加入3/4體積的細沙，將獼猴桃組培生根苗從培養(yǎng)基中取出，用自來水洗凈苗根部的培養(yǎng)基，將生根苗栽種在細沙中，然后用自來水一次性澆透，但不能澆過量，待其快干時，再澆第二次水。細沙煉苗在普通實驗室中進行，室內(nèi)通風，自然光照，溫度為25～30℃。

將細沙栽培后根系發(fā)達、長勢良好的生根苗移栽到裝有田園土的大花盆中，田園土包括黃土或腐殖土兩種，分別移栽60棵苗，然后將大花盆置于室外陽臺，使其充分沐浴陽光，每天澆適量水，保持花盆內(nèi)水分充足，一個月后統(tǒng)計成活率。

二、結(jié)果和分析

（一）組培苗生根

1、不同質(zhì)量濃度的NAA或IBA對組培苗生根的影響。NAA或IBA對組培苗的生根均有促進作用，不加植物生長調(diào)節(jié)劑的1/2 MS培養(yǎng)基的組培苗生根率為0;加入NAA誘導生根，第10d出現(xiàn)根點，17d后陸續(xù)出現(xiàn)不定根;IBA誘導生根較快，在培養(yǎng)第7d有根點產(chǎn)生，14d后陸續(xù)長出不定根。不同濃度的NAA和IBA對組培苗生根的影響見表1和表2。

由表1可知，10個濃度的NAA處理中，生根率均達到了85%以上，生根效果良好。濃度（mg/L）為1.0、1.1時，生根率為100%，濃度（mg/L）為0.6、0.7、0.8時，生根率均為98.89%，濃度（mg/L）為0.5、0.9時，生根率為97.78%，這三檔生根率之間無顯著差異。

由表2可知，10個濃度的IBA處理中，生根率都達到了100%?？梢姡诮M培苗生根率方面，IBA的效果優(yōu)于NAA。

2、兩種植物生長調(diào)節(jié)劑濃度對愈傷組織大小的影響。由圖1可知，NAA處理的愈傷組織塊相對較大，濃度為0.6 mg/L時愈傷組織直徑最大，0.2mg/L時，愈傷組織直徑最小，但所有的處理愈傷組織塊均大于1.5cm，因此，絕大部分的根均為附著在培養(yǎng)基表面的不定根。IBA處理中，濃度為0.2mg/L時，愈傷組織最大，濃度為0.9mg/L時，愈傷組織最小，其中，濃度為0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、1.1mg/L的愈傷組織直徑大于1.5cm，會出現(xiàn)部分附著在培養(yǎng)基表面的根，濃度為0.7、0.8、0.9、1.0mg/L的愈傷組織直徑小于1.5cm，根基本都扎在培養(yǎng)基內(nèi)部。

3、不同植物生長調(diào)節(jié)劑對組培苗生根條數(shù)的影響。由圖2可知，NAA處理的生根數(shù)均高于IBA處理，兩者的趨勢均為先隨著激素濃度的升高生根條數(shù)逐漸增加，在濃度為0.2～0.5mg/L范圍內(nèi)生根條數(shù)增加迅速，NAA處理由7.55條上升到13.71條，IBA處理由6.99條上升到11.51條;濃度在0.5～0.9mg/L范圍內(nèi)時，NAA處理增加較明顯，增長幅度為2.26條，而IBA處理增長幅度僅為1.07條;兩者均在0.9mg/L時達最大值，NAA處理為15.97條，IBA處理為12.58條，此時2處理的生根條數(shù)差也達最大，為3.39條。濃度大于0.9mg/L時生根條數(shù)減少，NAA處理的下降幅度大于IBA處理?？梢?，在生根數(shù)量方面，NAA處理所有濃度均優(yōu)于IBA處理，尤其濃度為0.9mg/L時，生根數(shù)量最多。

4、不同植物生長調(diào)節(jié)劑對組培苗根長的影響。由圖3可知，IBA處理每個濃度的根長均高于NAA處理。濃度在0.2～0.9mg/L時，兩種處理均隨著激素濃度增加根長逐漸變長，濃度為0.9mg/L時，兩種處理的平均根長均最長，IBA處理為3.19cm，NAA處理為2.87cm，差值為0.32cm;濃度在0.9～1.1mg/L時，IBA處理的根長先略微降低，然后迅速降低，NAA處理的根長是先降低然后又略有增加，但各濃度間的根長無顯著差異。分析表明，IBA在促進根伸長方面效果更優(yōu)，濃度為0.9mg/L時根長最長。

綜上所述，濃度為0.9mg/L的IBA處理，生根率為100%，愈傷組織直徑最小，平均生根數(shù)最多，平均根長最長，說明此濃度為IBA處理的最佳濃度。濃度為0.9mg/L的NAA處理，生根數(shù)最多，根長最長，且都顯著高于其它濃度的處理，愈傷組織直徑處于中等水平，生根率為97.78%，與最高的100%無顯著差異，但顯著高于其濃度以下的生根率，因此，該濃度為NAA處理的最佳濃度。

（二）開蓋煉苗

由于生根培養(yǎng)中出現(xiàn)了2種生根方式，分別對其進行開蓋煉苗處理，每個處理60個苗。

1、開蓋煉苗對根附在培養(yǎng)基表面生根苗的影響。根附著在培養(yǎng)基表面的生根苗在開蓋煉苗時，1d內(nèi)就會出現(xiàn)葉片干焦的情況，超過4d葉片基本落完，莖也會出現(xiàn)萎焉現(xiàn)象，因此，煉苗時間應控制在5d以內(nèi)。由于煉苗時間較短，可選擇培養(yǎng)室煉苗和普通實驗室煉苗兩種方式，分別煉苗3d、4d，以0d為對照。煉苗過程中，培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)基4d內(nèi)無污染，而普通實驗室的培養(yǎng)基第2d便有菌斑出現(xiàn)，第4d已經(jīng)有較大的菌落，少量菌落已沾在苗的根部，第5d時，菌落大面積接觸幼苗根部，嚴重影響移栽。開蓋煉苗3d、4d，此種苗的絕大部分根不能從培養(yǎng)基獲得營養(yǎng)。

2、開蓋煉苗對根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部生根苗的影響。根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部的生根苗可進行多天開蓋煉苗，選擇細菌相對較少的組織培養(yǎng)室內(nèi)煉苗，煉苗時間為4～11d。試驗觀察發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基內(nèi)部的根無明顯根毛分化，主根粗、長，側(cè)根多且清晰可辨，根與根間基本不會纏繞在一起。開蓋煉苗過程中，低于4d，達不到煉苗效果，多于11d，細菌會大量污染培養(yǎng)基，導致生根苗無法移栽。在4～11d時，絕大部分發(fā)育完全的根開始具有吸收作用。在培養(yǎng)室內(nèi)，第6d培養(yǎng)基開始出現(xiàn)菌點，擴展較慢，到第11d，一部分苗也會感染細菌導致無法移栽。

（三）細沙栽培

將上述2種方式開蓋煉苗不同天數(shù)的生長狀況良好的生根苗轉(zhuǎn)栽至細沙中，進行下一階段栽培，統(tǒng)計煉苗天數(shù)與移栽至細沙后成活率的關系，每個處理60個苗。

1、細沙栽培對根附著在培養(yǎng)基表面生根苗的影響。細沙栽培時，生根苗基部的葉片會先干枯脫落，再由腋芽重新萌發(fā)，長出新葉，整個過程2周左右。一部分幼苗1周內(nèi)會直接枯萎死亡，一部分幼苗根部腐爛，間接導致死亡。不同開蓋煉苗天數(shù)對生根苗細沙栽培成活的影響見表3。

由表3可見，0d時，即直接進行細沙栽培的生根苗成活率最低，僅20%;在普通實驗室開蓋煉苗4d的生根苗進入細沙煉苗后成活率最高，為66.67%。普通實驗室煉苗效果比培養(yǎng)室煉苗效果好，3d時成活率高10%，4d時高26.67%。成活的苗，細沙栽培至6周，從瓶子外部不能看到根的明顯生長，但苗生長正常，挖出幼苗可發(fā)現(xiàn)大塊的愈傷組織仍然存在，但由原來的青綠色變?yōu)楹稚１砻?，根附著在培養(yǎng)基表面的幼苗，根與細沙栽培前相差不大。

2、細沙栽培對根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部生根苗的影響。不同開蓋煉苗天數(shù)對根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部生根苗的影響見圖4。開蓋煉苗7d時，成活率最高，達到100%，4～7d時的成活率逐步上升，7～11d時成活率下降，到第11d達到最低值，僅40%，與第10d相差35%。表明組織培養(yǎng)室內(nèi)煉苗7d的細沙栽培效果最好。在細沙栽培第2～3周時，透過透明的玻璃培養(yǎng)瓶可清楚看到根系穿過細沙，布滿培養(yǎng)瓶。

上述分析表明，根附在培養(yǎng)基表面的幼苗由于條件限制，最佳開蓋煉苗天數(shù)短，為4d，細沙栽培成活率低，僅為66.67%;根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部的幼苗開蓋煉苗7d時，細沙栽培成活率為100%，兩者細沙栽培成活率有顯著差異?？梢?，應選擇根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部的生根苗進行煉苗，培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗7d，再細沙栽培2～3周。

綜合分析表明，濃度為0.9mg/L的IBA處理獲得的‘楊氏金紅50號獼猴桃生根苗為最佳的煉苗材料。

（四）田園土移栽

選擇兩種田園土基質(zhì)黃土和黑色腐殖土，移栽幼苗為0.9mg/L IBA處理獲得的愈傷組織塊小、根數(shù)較多、根長較長的生根苗，并進行7d培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗，2～3周細沙栽培，選根系發(fā)達的幼苗移栽，每種基質(zhì)移栽60個苗。田園土基質(zhì)為黃土的成活率為97.78%，田園土基質(zhì)為黑色腐殖土的成活率為100%。試驗發(fā)現(xiàn)，在黃土中移栽的幼苗澆水比較麻煩，且土粒易濺到葉子及頂芽上，若粘在頂芽上，則有可能導致幼苗死亡，因此，黃土移栽應選擇莖部較長的幼苗。黑色腐殖土不會出現(xiàn)上述情況，管理簡單，長勢也好?？梢?，田園土基質(zhì)為黑色腐殖土更適合用于‘楊氏金紅50號獼猴桃幼苗移栽。

三、討論

在‘楊氏金紅50號獼猴桃生根時，基本培養(yǎng)基中加入IBA 0.9mg/L可促進組培苗生根，生根率達100%，生根速度快，根數(shù)量多而長、質(zhì)量好;開蓋煉苗時，根在培養(yǎng)基內(nèi)部，能充分保證根所需水分、養(yǎng)分，使其保持活性，移栽成活率高。而經(jīng)NAA處理的組培苗，由于愈傷組織過大，根生長在培養(yǎng)基外表面，無法及時汲取培養(yǎng)基養(yǎng)分，在煉苗中易干枯、死亡。有關IBA與NAA誘導獼猴桃生根的報道較多，如，劉長春等對比了NAA、IBA對‘金富獼猴桃生根的影響，指出IBA誘導生根時間更短，生根率高出NAA處理9.8%，最佳使用濃度為0.7mg/L;吳秀華等對培養(yǎng)‘海沃德獼猴桃生根的結(jié)果表明，相同濃度的IBA誘導效果好于NAA，且有促進莖部伸長的作用，最佳使用濃度為0.7mg/L;呂海燕等培養(yǎng)‘東紅獼猴桃生根時表明，0.5mg/L濃度時，IBA的誘導效果顯著優(yōu)于NAA，生根率為92.33%。本試驗的結(jié)果與上述文獻相似，但IBA的濃度比上述文獻高，這可能是因為品種差異導致對激素的響應程度不同。

現(xiàn)有文獻中，沒有涉及愈傷組織塊大小對生根培養(yǎng)影響的研究，本試驗發(fā)現(xiàn)愈傷組織直徑大于培養(yǎng)基高度時，產(chǎn)生的根附在培養(yǎng)基表面，對后續(xù)煉苗影響很大，這是因為此類根雖然根毛旺盛，但根系脆弱，與培養(yǎng)基接觸少，大部分根裸露在空中，瓶子開蓋后水分喪失多，而又不能吸收培養(yǎng)基中的水分和養(yǎng)分，因此，生根苗很快就會出現(xiàn)干焦的情況。愈傷組織塊直徑小于培養(yǎng)基高度時，開蓋煉苗，根會被培養(yǎng)基包裹，有充足的養(yǎng)分和水分供給，可保證開蓋煉苗時長時間不會枯萎，能達到煉苗的效果。因此，在獼猴桃生根培養(yǎng)時，應控制愈傷組織大小，使多數(shù)根生長在培養(yǎng)基內(nèi)部。

細沙栽培是生根苗移栽至田園土的過渡階段，此階段在自然光照、自然溫度中進行，細沙和田園土較為相似，獼猴桃幼苗的根在生長中能吸收營養(yǎng)及水，根變得更長更壯。細沙的透氣性好，但保水性差，培養(yǎng)瓶是不漏水的，利用培養(yǎng)瓶裝細沙可有效保證細沙內(nèi)的水分，彌補了細沙的短處。王羽悅等將細沙和蛭石配合使用，對葛棗獼猴桃組培苗煉苗30d，得到了93.3%的成活率;林苗苗等將細沙與珍珠巖、泥炭1：1：1配比組合使用進行軟棗獼猴組培苗煉苗，得到98%的成活率。上述研究將細沙與蛭石或珍珠巖等配合使用是為了保持水分和通透性，這在原理上與本試驗使用培養(yǎng)瓶裝細沙相似。

田園土移栽中，移栽于田園土基質(zhì)為黃土的幼苗，澆水方式至關重要，在澆水時應注意清洗幼苗葉片附著過多的黃土。移栽于田園土基質(zhì)為黑色腐殖土內(nèi)的幼苗，腐殖質(zhì)含量多，顆粒大，營養(yǎng)豐富，且透氣性好，澆水時濺到葉片上影響也不大，幼苗生長迅速，葉片大而綠，根、莖健壯，成活率高。

（責任編輯 曹雯梅）