丁寧　胡琳　周榮山

摘要： 以金娃娃萱草莖段誘導(dǎo)出的愈傷組織和叢生苗為外植體，在不同NaCl濃度的培養(yǎng)基上進行增殖和生根培養(yǎng)，觀察鹽脅迫對其影響。結(jié)果表明：不同鹽濃度對外植體根系生長發(fā)育的影響大于對地上部分的影響；外植體在鹽脅迫下多代轉(zhuǎn)接后，耐鹽性均得到提高，這說明鹽脅迫下的多代轉(zhuǎn)接是一條獲得優(yōu)良耐鹽突變體的有效途徑。

關(guān)鍵詞： 金娃娃萱草；組培苗；耐鹽性

中圖分類號：S682.1+90.4+3 文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2015）08-0051-02

金娃娃萱草（Hemerocallis fulva ‘Golden Doll）系百合科萱草屬多年生草本宿生花卉，是萱草人工栽培的園藝品種，其花期長、花徑大、適應(yīng)性強，在城市綠化中應(yīng)用廣泛 [1]。而城市綠化特別是在沿海城市，土壤鹽漬化是綠化中遇到的嚴重問題，耐鹽植物是解決這一問題的關(guān)鍵，而金娃娃萱草作為適應(yīng)性強的地被植物，其耐鹽性研究具有重大的意義，是解決鹽漬化土壤綠化的有效途徑之一。采用常規(guī)育種方法培育耐鹽植物，在短期內(nèi)不易獲得成效。近年來植物組織快繁技術(shù)的發(fā)展為培育耐鹽植物提供了一個新的途徑 [2-3]，特別是把愈傷組織轉(zhuǎn)在加有高濃度鹽分的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，有可能篩選出耐鹽的細胞系 [4-5]。因此，研究金娃娃萱草對環(huán)境脅迫的響應(yīng)通過組培快繁技術(shù)則更為精細、更具可控性。本研究以金娃娃萱草為試驗材料，研究了鹽脅迫對其組培快繁效果的影響。

1 材料與方法

1.1 外植體來源

本試驗采用金娃娃萱草的莖段為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，再分化出叢生苗，進而誘導(dǎo)生根，馴化移栽。鹽脅迫主要以愈傷組織和分化出的叢生苗為試驗材料，研究鹽脅迫對金娃娃萱草的分化增殖和生根階段的影響。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同鹽濃度對金娃娃萱草增殖培養(yǎng)的影響 將愈傷組織接種到分化增殖培養(yǎng)基，增殖擴繁培養(yǎng)30 d（初代培養(yǎng)）后，轉(zhuǎn)接至同樣培養(yǎng)基上，增殖擴繁3代（繼代培養(yǎng)）后分別統(tǒng)計成活率和增殖系數(shù)，測量苗高。

1.2.2 不同鹽濃度對金娃娃萱草生根培養(yǎng)的影響 將 30 mmol/L NaCl脅迫下金娃娃萱草愈傷組織分化出的叢生苗接種至生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)30 d后，統(tǒng)計成活率、生根率、生根數(shù)量，測量苗高等生長量指標(biāo)。成活率、生根率、增殖系數(shù)分別按下面的公式計算：

成活率=成活外植體個數(shù)/接種外植體個數(shù)×100%；

生根率=生根外植體個數(shù)/接種外植體個數(shù)×100%；

增殖系數(shù)=新增叢生苗（高度>0.5 cm）數(shù)/所接種外植體個數(shù)×100%。

經(jīng)過多次試驗對比，金娃娃萱草的組織培養(yǎng)已得出各階段最佳培養(yǎng)基配方，分別為分化增殖培養(yǎng)基：MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA；生根培養(yǎng)基：1/2MS+0.5 mg/L IBA，2.5%蔗糖，6 g/L瓊脂，pH值為5.8 [6]。在培養(yǎng)基中加入NaCl，濃度設(shè)3種處理：30、60、90 mmol/L，并設(shè)1組對照（NaCl濃度為0 mmol/L）。共計4種鹽處理（包括對照）、 2個階段，每瓶接種 5個外植體，每組10 瓶，3 次重復(fù)。組培室培養(yǎng)條件：溫度 （25±2） ℃，光照時間12～14 h/d，相對濕度（80±2）%。

2 結(jié)果與分析

2.1 [JP3]不同鹽濃度對金娃娃萱草愈傷組織初代培養(yǎng)效果的影響

培養(yǎng)30 d后，4個處理的愈傷組織均有不同程度的增殖和分化，但差距較大。試驗結(jié)果（表1）顯示，30 mmol/L NaCl 脅迫下，金娃娃萱草愈傷組織初代培養(yǎng)中成活率、增殖系數(shù)、苗高都呈下降趨勢，與對照相比分別降低了8.0百分點、0.9百分點、0.4 cm，但與對照差異不顯著；60、90 mmol/L NaCl脅迫下，與對照相比，成活率分別下降20百分點、34百分點，增殖系數(shù)分別下降2.1百分點、3.7百分點，苗高分別下降1.0、2.0 cm，并與對照都差異顯著。總體來看，隨著NaCl濃度升高，金娃娃萱草的愈傷組織有變小的趨勢。

2.4 不同鹽濃度下金娃娃萱草組培中經(jīng)多代轉(zhuǎn)接后苗木耐鹽性的變化

在金娃娃萱草的增殖培養(yǎng)階段，從初代培養(yǎng)到繼代培養(yǎng)，愈傷組織的成活率、增殖系數(shù)、苗高，在30 mmol/L NaCl脅迫下分別提高12.0百分點、0.6百分點、1.3 cm；在60 mmol/L NaCl脅迫下分別提高16.0百分點、1.2百分點、1.5 cm；在90 mmol/L NaCl脅迫下分別提高16.8百分點、1.6百分點、1.3 cm。數(shù)據(jù)表明，不同濃度NaCl條件下，各材料繼代培養(yǎng)的成活率、增殖系數(shù)和苗高均高于初代培養(yǎng)，并且隨著NaCl濃度升高，提高的幅度更大。

在金娃娃萱草的生根培養(yǎng)階段，外植體經(jīng)鹽脅迫后再進行生根培養(yǎng)，在成活率上比增殖分化階段得到顯著提升，苗高也只是在90 mmol/L NaCl脅迫下與對照差異顯著，并且苗高在不同鹽濃度下的差距也比增殖階段有了一定的縮小，再次看出鹽脅迫對根系生長發(fā)育的影響大于對地上部分的影響。

3 結(jié)論

金娃娃萱草在鹽濃度為30 mmol/L時，無論是增殖分化還是生根階段，均與對照差異不顯著，證明金娃娃萱草是具有一定耐鹽性的。

金娃娃萱草在生根階段，地上部分的評價指標(biāo)如成活率和苗高與對照均無顯著差異，除了苗高在鹽濃度為90 mmol/L時與對照差異顯著；而根系生長發(fā)育的評價指標(biāo)生根率和生根數(shù)量在鹽濃度為60 mmol/L時與對照差異顯著。說明不同鹽濃度對根系生長發(fā)育的影響大于對地上部分的影響。

從金娃娃萱草組培不同階段的數(shù)據(jù)可知，外植體在鹽脅迫下多代轉(zhuǎn)接后，耐鹽性均得到提高。研究表明，組織培養(yǎng)過程中鹽脅迫下的多代轉(zhuǎn)接是一條獲得優(yōu)良耐鹽突變體的有效途徑。本試驗中金娃娃萱草通過多代轉(zhuǎn)接，耐鹽性得到了顯著提高，因此可以通過鹽脅迫下的組織培養(yǎng)法為鹽漬化土壤綠化提供耐鹽品種。

參考文獻：

[1] 王漢海，程貫召，杜延飛.大花萱草新品種“金娃娃”的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 植物生理學(xué)通訊，2002，38（5）：458.

[2]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，1991.

[3]熊 麗，吳麗芳.觀賞花卉的組織培養(yǎng)與大規(guī)模生產(chǎn)[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003.

[4][JP3]岳 瑋，夏光敏，陳惠民，等. 獐毛愈傷組織耐鹽性研究及耐鹽變異體的篩選[J]. 山東大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2000，35（3）：338-343.

[5]王海英，孫建設(shè)，王旭靜，等. 果樹耐鹽性研究進展[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000，23（2）：54-58，61.

[6]趙玉芬，儲博彥，尹新彥，等. 大花萱草工廠化快繁技術(shù)研究[J]. 北方園藝，2011（2）：152-155.