【摘要】采用超聲波法提取玫瑰花中的黃酮化合物，并對提取工藝條件進(jìn)行研究。隨機(jī)選取一個(gè)特定的條件，分別用乙醇、丙酮、甲醇、沸水做提取劑，比較不同提取劑提取黃酮化合物的含量，并采用正交試驗(yàn)法確定玫瑰花中黃酮化合物的最佳提取工藝條件。實(shí)驗(yàn)表明，玫瑰花中黃酮化合物在65%乙醇為提取劑、物料比1：35、提取時(shí)間55min、溫度55℃時(shí)提取含量最高。

【關(guān)鍵詞】玫瑰花;超聲波提取;黃酮;提取

【中圖分類號(hào)】S682.3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

玫瑰花中的黃酮化合物比其他物質(zhì)的含量高，是玫瑰花中的主要成分。黃酮化合物是一種存在于自然界的、具有2-苯基色酮結(jié)構(gòu)的化合物。它在植物結(jié)果、抗菌和疾病預(yù)防中起重要作用。黃酮化合物主要通過三種方式實(shí)現(xiàn)抗癌防癌作用：①抗自由基作用直接抑制癌細(xì)胞的生長;②生物類黃酮是自由基猝滅劑和抗氧化劑，可有效預(yù)防脂質(zhì)過氧化引起的細(xì)胞損傷，起到抗癌防癌作用;③許多生物類黃酮具有抑制腫瘤細(xì)胞糖酵解，生長，線粒體琥珀酸氧化酶活性和磷脂酰肌醇激酶（卵巢癌細(xì)胞活性）的功能，從而起到抗癌和防癌作用?？芍?，黃酮化合物在玫瑰花抗氧化中起到了不可或缺的作用。隨著對玫瑰花的開發(fā)和研究，國內(nèi)和國際市場上對玫瑰花以及它的制品需求越來越大，對玫瑰花的研究和開發(fā)早已成為熱點(diǎn)的課題。因此，本實(shí)驗(yàn)主要研究提取玫瑰花中黃酮化合物的最佳提取工藝條件。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)的材料和試劑與儀器

玫瑰花茶：福瑞佳超市（沈陽）;蘆丁對照品;市售無水乙醇;甲醇溶液;丙酮溶液;亞硝酸鈉溶液;硝酸鋁溶液;氫氧化鈉（索來寶有限公司）。高速萬能粉碎機(jī)：天津市泰斯特儀器有限公司;分析天平：上海天平儀器精密儀器廠;KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司;紫外可見分光光度計(jì)：尤尼科（上海）儀器有限公司;Avanti高效離心機(jī)：貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，溶解于60%乙醇，定容至100 ml，得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為O.lmg/ml。量取O、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0和7.Oml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于多個(gè)容量瓶中。取5%的NaN02溶液0.3ml加入其中，搖勻后靜置6min;再加入0.3ml 10%的AI（N03）3溶液，搖勻后靜置6min;再加入4%的NaOH溶液4ml，用濃度為60%的乙醇定容到lOml，搖勻放置12min以后，在波長為5lOnm處測量吸光度值。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X，mg/ml），以吸光度值為縱坐標(biāo)（Y），繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到線性回歸方程：Y=4.8087X+0.0198（ R2=0.9916）。結(jié)果見圖1.

1.2.2提取劑的選擇。將玫瑰花茶放入高速萬能粉碎機(jī)中粉碎，分別稱取0.5 9粉末，置于4個(gè)燒杯中，依次加入甲醇，丙酮，乙醇和沸水25ml，超聲波45℃下提取45min后，在3000r/min下離心lOmin。取2 ml上層溶液，加入0.3ml的5%0NaN02溶液，搖勻后靜置6min;再加入0.3ml 10%的AI（N03）3溶液，搖勻后靜置6min;再把40-/0的NaOH溶液4ml加入其中，最后用60%乙醇定容到10ml，搖勻后放置12min，在波長為5lOnm處測吸光度A，由結(jié)果可知，乙醇作為提取劑時(shí)，黃酮化合物的含量最多，提取率達(dá)到最高。

1.2.3黃酮化合物含量的測定。稱取玫瑰花粉末0.5g，置于250ml燒杯中，加入4% - 80%乙醇10-30ml置于超聲波清洗器中，25 - 65℃下超聲波提取20 - 60min（超聲功率為600w）.在3000r/min下離心lOmin。準(zhǔn)確吸取2ml上清液，加入0.3 ml的5%的NaN02溶液，搖勻后靜置6min;加入0.3ml的10%的AI（N03）3溶液，搖勻后靜置6min;再加入4ml的4%的NaOH溶液，用乙醇（濃度同上）定容至10ml，搖勻，放置12min后測其吸光度值A(chǔ)。

按照下列式子計(jì)算玫瑰花中黃酮化合物的提取率W（ %）

W=C×V×N/ M×100%

W：黃酮化合物提取率，%;C：玫瑰花中黃酮化合物質(zhì)量濃度，mg/ml;V：提取劑體積，ml;N：稀釋倍數(shù);M：玫瑰花粉質(zhì)量，g。

1.2.4乙醇濃度的選定。精確稱取0.5g玫瑰花粉，料液比l：30，在35℃下分別加入40%、50%、60%、70%和80%乙醇，在超聲波（ 600W）下提取20min，離心后添加顯色劑在紫外分光光度計(jì)中測定其黃酮化合物的提取率。

1.2.5提取時(shí)間的選定。精確稱取0.5g玫瑰花粉，料液比1：30，超聲功率600 W，在35℃下加入60%乙醇，分別提取20、30、40、50和60min，離心后添加顯色劑在紫外分光光度計(jì)中測定其黃酮化合物的提取率。

1.2.6料液比的選定。精確稱取0.5 g玫瑰花粉，在35℃條件下加入60%乙醇，在料液比分別為1：20、1：30、1：40、1：50、1：60下提取50min，離心后添加顯色劑在紫外分光光度計(jì)中測定其黃酮化合物的提取率。

1.2.7提取溫度的選定。精確稱取0.5g玫瑰花粉，料液比1：40，在溫度分別為25℃、35℃、45℃、55℃、65。C下加入60%乙醇，在超聲波下提取50min，離心后添加顯色劑在紫外分光光度計(jì)中測定其黃酮化合物的提取率。

1.2.8正交實(shí)驗(yàn)。通過單因素試驗(yàn)所得出的結(jié)果，選擇乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比和提取溫度為四個(gè)實(shí)驗(yàn)因素，設(shè)計(jì)四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)，以黃酮化合物的提取率為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，進(jìn)行正交組合實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取劑的確定結(jié)果

由上圖可知，在所選擇的甲醇、乙醇、丙酮、沸水這四種提取劑中乙醇提取的黃酮化合物提取率最高，其次是甲醇，然后是丙酮，最后是沸水。所以選擇乙醇作為提取劑，進(jìn)行接下來的確定提取最佳工藝的實(shí)驗(yàn)。

2.2 提取工藝的結(jié)果與分析

由圖3可知，當(dāng)60%的乙醇作為提取劑時(shí)黃酮化合物的提取率最高，所以選取60%的乙醇濃度為最佳提取濃度，選擇55%、60%、65%的乙醇濃度作為正交實(shí)驗(yàn)中乙醇濃度的三個(gè)水平。由圖4可知，在20 - 50min提取時(shí)間內(nèi)，黃酮化合物的提取率逐漸上升，在50min時(shí)達(dá)到最高，提取率也最高，在50 - 60min時(shí)，提取率下降，所以50min為最佳提取時(shí)間，因此選擇45、50、55min為正交實(shí)驗(yàn)中提取時(shí)間的三個(gè)水平。由圖5可知，在料液比（g：ml）為1：20 -1：60之間，從1：20 -1：40下黃酮化合物的提取率逐漸上升，之后逐漸下降，在1：40時(shí)達(dá)到最高，所以選擇l：40為最佳提取料液比。選擇1;35、1：40、1：45為正交實(shí)驗(yàn)中料液比的三個(gè)水平。由圖6可知，提取溫度為25℃- 55℃時(shí)，黃酮化合物的提取率逐漸上升，在55℃時(shí)達(dá)到最高，之后逐漸下降，因此55℃被視為最佳提取溫度。正交實(shí)驗(yàn)中提取溫度的三個(gè)水平選擇45℃、55℃、65℃。

2.3 正交實(shí)驗(yàn)

以單因素試驗(yàn)為基礎(chǔ)，正交實(shí)驗(yàn)因素選取乙醇濃度、提取溫度、料液比和提取時(shí)間。采用L9（ 34）正交因子水平表，設(shè)計(jì)四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)。

根據(jù)極差分析結(jié)果，影響玫瑰花中黃酮化合物的提取率的因素順序是：C>B>A>D，即料液比>提取溫度>乙醇濃度>提取時(shí)間，最佳提取條件為A382CID3，即乙醇濃度65%，溫度55℃，料液比1：35，時(shí)間55 min時(shí)的提取率最高。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

影響玫瑰花中黃酮化合物提取率大小的提取劑的順序?yàn)椋阂掖?甲醇>丙酮>沸水，所以選擇乙醇作為提取劑進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。影響玫瑰花中黃酮化合物提取率大小的因素順序是：料液比>提取溫度>乙醇濃度>提取時(shí)間，最佳提取條件為A382CID3，即乙醇濃度65%，溫度55℃，料液比1：35，時(shí)間55 min時(shí)玫瑰花中黃酮化合物的提取率最高。

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[作者簡介]齊宇（1995-），女，遼寧阜新人，在讀碩士研究生。